生物安全柜性能快速測(cè)評(píng)方法2010-12-31發(fā)布2011-04-01實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009給出的規(guī)則編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：廣州市計(jì)量檢測(cè)技術(shù)研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：胡良勇、魏賢莉、何欣、程丹。本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。1凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。YY0569—2005中第3章界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。生物安全柜根據(jù)氣流及隔離屏障設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)分為I、Ⅱ、Ⅲ三個(gè)等級(jí)，分級(jí)按YY0569—2005中第4a)溫度：(15～30)℃;b)相對(duì)濕度：不高于70%;c)潔凈度：在自凈狀態(tài)下可以達(dá)到5級(jí)；d)試驗(yàn)菌種的環(huán)境本底濃度應(yīng)能在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中保持不變。a)電源電壓：220V±22V;a)數(shù)字壓力計(jì)：量程為(0～30)kPa,精度等級(jí)不低于1.5級(jí)；b)空氣壓縮機(jī)：常用輸出壓力：(0～0.6)MPa;c)肥皂溶液：由25g/L軟肥皂的微溫蒸餾水溶液組成；d)氣溶膠發(fā)生器：可用鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)產(chǎn)生多分散高濃度的氣溶膠；粒徑范圍(0.01~e)氣溶膠光度計(jì)：檢測(cè)濃度范圍(0.001～200)mg/m3,精度為滿量程的0.05%;2f)塵埃粒子計(jì)數(shù)器：粒徑分辨率優(yōu)于0.3μm;g)碘化鉀(KI)溶液：15g/L碘化鉀的乙醇溶液；i)空氣微生物檢測(cè)儀：抽取空氣不低于100L/min;j)空氣采樣器：采樣流量不低于100L/min;1)干擾圓筒：外徑為63mm兩端封閉的圓筒，材質(zhì)為不銹鋼或鋁，壁厚不超過(guò)1mm)熱球式風(fēng)速儀：量程為(0～9.99)m/s,分辨率為0.01m/s;n)溫度計(jì)：最小分度值為0.1℃;p)聲級(jí)計(jì)：測(cè)量范圍為(35～100)dB,精度為0.1dB,有“A”計(jì)權(quán)模式；r)振動(dòng)儀：最小可靠讀數(shù)為2.5μm(rms)振幅，頻響范圍(10～1000)Hz;s)漏電流檢測(cè)儀：(0～30)mA,精度2%;t)接地電阻測(cè)試儀：測(cè)量范圍為(0～600)mQ,精度為2.5%;用目視并配合手動(dòng)操作進(jìn)行檢查，結(jié)果應(yīng)符合7.1的評(píng)價(jià)要求。c)用空氣壓縮機(jī)給安全柜增壓到500Pa,封閉加壓空氣，30min后測(cè)定壓力；d)如果安全柜壓力不能保持(450～550)Pa之間，則用肥皂泡法查找泄漏位置；用空氣壓縮機(jī)給安全柜增壓到500Pa,使其壓力持續(xù)實(shí)測(cè)值為(450～550)Pa;沿安全柜壓力通風(fēng)系統(tǒng)的所有焊縫、襯墊、套接處和封口處的外表面噴或涂刷檢漏液體，小的泄漏會(huì)出現(xiàn)氣泡，如果從孔測(cè)試結(jié)果應(yīng)符合表2中第1項(xiàng)的規(guī)定。a)運(yùn)行安全柜的風(fēng)機(jī)和燈，去掉過(guò)濾器的散流裝置和保護(hù)蓋(如果有)。安放氣溶膠發(fā)生器，將氣溶膠導(dǎo)入安全柜，按廠商的說(shuō)明，產(chǎn)生均勻分布的高效過(guò)濾器上游氣流。廠c)對(duì)HEPA過(guò)濾器含有氣溶膠的上游氣流進(jìn)行取樣，證實(shí)該濃——如果是線性刻度的光度計(jì)(0～100)分度，將讀數(shù)調(diào)整為100;—如果是對(duì)數(shù)刻度的光度計(jì)，將上游氣流濃度的讀數(shù)調(diào)整在一個(gè)分度對(duì)應(yīng)濃度的1×10?以上；d)將氣溶膠光度計(jì)探針?lè)旁诒粶y(cè)試面上距測(cè)試面不超過(guò)25mm,以小于50mm/s的掃描速率移動(dòng)，使3個(gè)過(guò)濾器外圍、沿組合過(guò)濾片和框架的連接處以及圍繞過(guò)濾器和設(shè)備之間的密封合表2中第2項(xiàng)的規(guī)定。對(duì)于經(jīng)管道排氣的安全柜，不能進(jìn)行排氣過(guò)濾器的掃描檢測(cè)，過(guò)濾器下游氣流是在下游氣流的管道上鉆直徑約Φ10mm的孔，將帶有硬管光度計(jì)探針插入孔中進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果應(yīng)符合表2中第2項(xiàng)的規(guī)定。安全柜開(kāi)機(jī)工作30min;潔凈度的測(cè)量邊界距離內(nèi)表面或前窗100mm,塵埃粒子計(jì)數(shù)器的采樣口置于工作臺(tái)面向上200mm高度位置。結(jié)果應(yīng)符合表2中第3項(xiàng)的規(guī)定。測(cè)量點(diǎn)按圖1布置。8安全柜長(zhǎng)度--安全柜寬度安全柜開(kāi)機(jī)工作30min,并連續(xù)運(yùn)行至所有測(cè)試完成。按附錄A進(jìn)行，重復(fù)試驗(yàn)3次，每次試驗(yàn)結(jié)果均應(yīng)符合表2中第4項(xiàng)的規(guī)定。安全柜開(kāi)機(jī)工作30min,并連續(xù)運(yùn)行至所有測(cè)試完成。a)干擾圓筒固定在安全柜工作臺(tái)面上的中心區(qū)，一端貼住工作區(qū)的后壁，另一端從前窗操作口伸出安全柜至少150mm,干擾圓筒的軸線高于工作臺(tái)面50mm,見(jiàn)圖2;下O干擾圓筒空氣微生物采樣器4b)將盛有55ml濃度為(5×10?~8×10?)個(gè)/ml芽孢懸浮液(配制方法見(jiàn)附錄B)的噴霧器放在安全柜外，噴霧器噴射軸在安全柜中心并與前窗操作口上沿平齊，噴霧器的噴嘴前端位于前窗操作口外100mm,噴霧方向平行于工作臺(tái)面，正對(duì)前窗操作口，見(jiàn)圖2;c)干擾圓筒將工作臺(tái)面分成平均的兩部分，空氣微生物檢測(cè)儀分別放在兩部分的中央位置，見(jiàn)圖2;d)啟動(dòng)噴霧器，運(yùn)行5min后關(guān)閉，開(kāi)啟空氣微生物檢測(cè)儀；e)檢查空氣微生物檢測(cè)儀計(jì)數(shù)。測(cè)試結(jié)果應(yīng)符合表2中第5項(xiàng)的規(guī)定。6.5.3交叉污染保護(hù)的測(cè)試安全柜開(kāi)機(jī)工作30min,并連續(xù)運(yùn)行至所有測(cè)試完成。a)將盛有55ml濃度為(5×10?~8×10?)個(gè)/ml的芽孢懸浮液的噴霧器置于安全柜內(nèi)，緊靠左側(cè)內(nèi)壁的中心，噴霧器噴射軸線在工作臺(tái)面上(76～130)mm處，噴射方向平行于工作臺(tái)面正對(duì)面的側(cè)壁，見(jiàn)圖b)啟動(dòng)噴霧器，5min后關(guān)閉噴霧器，開(kāi)啟空氣微生物檢測(cè)儀計(jì)數(shù)；;d)將噴霧器放于靠右側(cè)內(nèi)壁中央執(zhí)行上述步驟。測(cè)試結(jié)果應(yīng)符合表2中第6項(xiàng)的規(guī)定。土土下6.6流入氣流流速(正面流速)的測(cè)試a)運(yùn)行安全柜，在前窗口操作臺(tái)均勻分布10個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)讀取熱球式風(fēng)速儀至少3次，得到相應(yīng)的氣體速度測(cè)量值；b)計(jì)算出風(fēng)速的平均值。測(cè)試結(jié)果應(yīng)符合表2中第7項(xiàng)的規(guī)定。6.6.2Ⅲ級(jí)生物安全柜測(cè)試去掉Ⅲ級(jí)生物安全柜的一個(gè)連接口的手套，用熱球式風(fēng)速儀在連接口中心測(cè)量氣流流速，讀取熱球式風(fēng)速儀至少10次，得到相應(yīng)的氣體速度測(cè)量值，計(jì)算出風(fēng)速的平均值。在其它手套連接口進(jìn)行同樣測(cè)量。測(cè)試結(jié)果應(yīng)符合表2中第7項(xiàng)的規(guī)定。6.7下降氣流流速測(cè)試6.7.1均勻下降氣流安全柜按下列方式在工作區(qū)上方高于前窗操作口上沿100mm的水平面上確定測(cè)量點(diǎn)位置，多點(diǎn)測(cè)量穿過(guò)該平面的下降氣流流速，見(jiàn)圖4:a)測(cè)量點(diǎn)等距分布，形成的正方形柵格不大于150mm×150mm,測(cè)試點(diǎn)最少應(yīng)有3排，每排最少應(yīng)5有7個(gè)測(cè)量點(diǎn)；b)測(cè)試區(qū)域邊界與安全柜的內(nèi)壁及前窗操作口的距離應(yīng)c)用夾具將熱球式風(fēng)速儀探針準(zhǔn)確定位在各測(cè)量點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量，記錄所有測(cè)試點(diǎn)的測(cè)量值并計(jì)算出測(cè)試結(jié)果應(yīng)符合表2中第8項(xiàng)的規(guī)定。區(qū)域由測(cè)試機(jī)構(gòu)驗(yàn)證。對(duì)安全柜運(yùn)行不重要的可拆卸元件(可選擇的零件)應(yīng)在設(shè)置額定值前拆除。用夾具將熱球式風(fēng)速儀探針準(zhǔn)確定位在各測(cè)量點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量。記錄所有測(cè)試點(diǎn)的測(cè)測(cè)試結(jié)果應(yīng)符合表2中第8項(xiàng)的規(guī)定。圖4下降氣流流速測(cè)試在I級(jí)、Ⅱ級(jí)生物安全柜的工作區(qū)域離開(kāi)口處約50mm的整個(gè)截面上點(diǎn)燃發(fā)煙材料，發(fā)出可視性煙霧，觀察煙霧。結(jié)果應(yīng)符合表2中第9項(xiàng)的規(guī)定。果應(yīng)符合表2中第9項(xiàng)的規(guī)定。安全柜正常連續(xù)工作4h。將一個(gè)溫度計(jì)置于被測(cè)生物安全柜前窗開(kāi)口面中心向外80mm處測(cè)量環(huán)境溫度，另一個(gè)溫度計(jì)置于被測(cè)生物安全柜工作臺(tái)面的幾何中心向上300mm處測(cè)量操作區(qū)溫度。當(dāng)溫度計(jì)上的數(shù)值達(dá)到穩(wěn)定后，兩個(gè)溫度計(jì)的差值結(jié)果應(yīng)符合表2中第11項(xiàng)的規(guī)定。633210QQ6.12照度測(cè)試在工作臺(tái)面上，沿工作臺(tái)面內(nèi)側(cè)壁中心連線設(shè)置照度測(cè)量點(diǎn)，測(cè)量點(diǎn)之間的距離不超過(guò)300mm,與側(cè)壁最小距離為150mm,見(jiàn)圖6;生物安全柜正常工作，重復(fù)各測(cè)量點(diǎn)測(cè)量。被測(cè)生物安全柜照度為各測(cè)量點(diǎn)照度的算術(shù)平均值，結(jié)果應(yīng)符合表2中第13項(xiàng)的規(guī)定。圖6照度測(cè)試7安全柜置于正常工作，將振動(dòng)儀的振動(dòng)傳感器牢固地固定在工作臺(tái)面中心，見(jiàn)圖7,測(cè)量生物安全柜工作時(shí)的振幅。振動(dòng)儀的最大讀數(shù)為工作臺(tái)面的振動(dòng)幅值，結(jié)果應(yīng)符合表2中第14項(xiàng)的規(guī)定。安全柜連續(xù)運(yùn)行4h后，施加110%額定電壓，用泄漏電流測(cè)量?jī)x測(cè)量機(jī)組外露的金屬部分與電源線之采用GB4793.1-2007中的方安全柜應(yīng)有完整的下列標(biāo)識(shí)：安全柜名稱、型號(hào)、出廠編號(hào)、制造電壓及頻率。在生物安全柜前部顯著位置應(yīng)印有國(guó)際通用的生物危險(xiǎn)標(biāo)志，如圖8所示。生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)應(yīng)按圖9比例繪制。生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)的顏色應(yīng)為黑色，背景為黃色。8圖8生物危險(xiǎn)標(biāo)志圖中尺寸ABCDEFGH以A為基146圖9生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)的繪制方法7.1.1所有緊固件均應(yīng)安裝牢固，連接件應(yīng)連接良好，不應(yīng)松動(dòng)；各調(diào)節(jié)旋鈕轉(zhuǎn)動(dòng)靈活，無(wú)松動(dòng)現(xiàn)象；按鍵和開(kāi)關(guān)均能正常工作，電纜線的接插件應(yīng)接觸良好；不應(yīng)有影響安全柜正常工作的損傷。7.1.2各部件運(yùn)轉(zhuǎn)正常，無(wú)異常聲響和振動(dòng)。7.1.3安全柜的數(shù)字顯示應(yīng)清晰、完整、正確。7.1.4柜體表面無(wú)明顯劃傷、銹斑、壓痕，表面光潔，外形平整規(guī)矩。7.1.5說(shuō)明功能的文字和圖形符號(hào)標(biāo)志應(yīng)正確、清晰、端正、牢固。7.1.6柜體各連接件必須連接牢固并做密封處理，Ⅲ級(jí)生物安全柜各連接件必須充分密封，窗玻璃與手套應(yīng)保證密封不泄露。7.1.7前窗操作口連鎖報(bào)警系統(tǒng)、內(nèi)部供/排氣風(fēng)機(jī)連鎖報(bào)警系統(tǒng)、排氣系統(tǒng)連鎖報(bào)警系統(tǒng)、氣流波動(dòng)連鎖報(bào)警系統(tǒng)等必須正常工作。7.2主要性能評(píng)價(jià)安全柜的主要性能按表2規(guī)定進(jìn)行評(píng)價(jià)。9I級(jí)II級(jí)III級(jí)1一—2高效過(guò)濾的一不可掃描檢測(cè)過(guò)濾器檢測(cè)點(diǎn)的漏過(guò)率不應(yīng)超過(guò)0.005%;3潔凈度凈化級(jí)別(粒子計(jì)數(shù)一一4一前窗操作口的保護(hù)因子應(yīng)不小于1×10?一5產(chǎn)品保護(hù)空氣微生物檢測(cè)儀個(gè)一一6空氣微生物檢測(cè)儀個(gè)一一78下降氣流100mm處平面區(qū)域內(nèi)的一一9工作區(qū)內(nèi)一一氣流應(yīng)垂直向下，不產(chǎn)生旋渦不應(yīng)從安全柜中逸出一前窗操作口整個(gè)周邊氣流應(yīng)向內(nèi)，無(wú)向外逸出的氣流；II級(jí)前窗操作口流入氣流不應(yīng)進(jìn)入工作區(qū)一一正常運(yùn)行4h后，操作區(qū)與環(huán)境的溫度差℃噪聲前壁板水平中心向外1100mm處的噪聲照度(無(wú)背景照明)操作臺(tái)面幾何中心的電氣安全泄漏電流可觸及表面的泄漏電電阻可觸及金屬表面與電源插頭“地”插銷間的電阻值Qab當(dāng)一只手套脫落時(shí)，通過(guò)手套孔的流入氣流速度不小于08檢測(cè)項(xiàng)目表安全柜檢測(cè)項(xiàng)目表見(jiàn)附錄C。(規(guī)范性附錄)碘化鉀法A.1基本原理傳遞指數(shù)將給定點(diǎn)的曝露量定義n/(N×s),N是釋放粒子數(shù)，n是以流速s采樣獲得的粒子數(shù)，采樣持續(xù)至測(cè)試結(jié)束。紊流通風(fēng)的房間，其整個(gè)空間可達(dá)到完全均勻的混合，傳遞指數(shù)相當(dāng)于1/V,其中V為含沉降損失的有效流量。傳遞指數(shù)的量綱為：時(shí)間/體積。開(kāi)放工作臺(tái)的傳遞指數(shù)與安全柜內(nèi)部的傳遞指數(shù)的比值為保護(hù)因子Apf。Aof無(wú)量綱。對(duì)于通風(fēng)量為V的參考開(kāi)放工作臺(tái)，室內(nèi)通風(fēng)量為10m3/min,那么如果采樣速率s以m3/min為單位，則A?e為(N×s)/(10n),如果采樣率s以L/min為單位，則A。r變?yōu)?N×s)/(10?n)。理想情況下，不應(yīng)有危害性氣溶膠從安全柜逸出，故n為0,A。無(wú)窮大。然而，前窗操作口開(kāi)啟的安全柜不會(huì)提供安全的保護(hù)，A?f最小值取決于測(cè)試的靈敏度，即：挑戰(zhàn)試驗(yàn)釋放粒子數(shù)N、采樣速率s和采樣獲得的能可靠地從背景污染中區(qū)分出來(lái)粒子的最小數(shù)量。一套測(cè)試系統(tǒng)的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)值為：N≥3×10?,s≥20L/min,n≤4,由此確知A,的最小值為1.5×10?。A.2試劑碘化鉀法試驗(yàn)中使用的試劑為：——碘化鉀(KI):15g/L碘化鉀的乙醇溶液或不超過(guò)5%(體積比)水的工業(yè)甲基化酒精溶液；——氯化鈀(P.C1):1.0g/L氯化鈀的0.1mol/L鹽酸溶液。A.3設(shè)備碘化鉀法試驗(yàn)中的主要儀器為：a)氣溶膠發(fā)生器：由直徑38mm,能以28000r/min±500r/min速度旋轉(zhuǎn)的渦流盤和一個(gè)將碘化鉀溶液噴射到渦流盤上的噴嘴組成，噴嘴末端與渦流盤的間隙調(diào)整至0.1mm;該裝置還包括一只實(shí)驗(yàn)支架，必要時(shí)，用其將氣溶膠發(fā)生器支撐在工作臺(tái)面以上；b)空氣采樣器：利用向心力原理工作，前部入口的空氣流量為100L/min,一只錐形管夾帶3%的這種空氣；c)干擾圓筒：直徑(60～65)mm,表面光滑，至少一端封閉，由支架支撐；d)皮氏培養(yǎng)皿：直徑55mm;e)過(guò)濾膜：直徑25mm,孔徑3μm。A.4測(cè)試準(zhǔn)備在遠(yuǎn)離被測(cè)試安全柜的地方擺放兩只皮氏培養(yǎng)皿。一只培養(yǎng)皿內(nèi)裝入半皿氯化鈀溶液，另一只內(nèi)裝入半皿蒸餾水，將蓋子蓋回到培養(yǎng)皿上。準(zhǔn)備兩張濾紙，用于干燥過(guò)濾膜。將干擾圓筒放在安全柜工作區(qū)域的側(cè)壁之間的中部，一端伸入到安全柜內(nèi)部，緊貼安全柜后壁，干擾圓筒下沿距安全柜工作臺(tái)面(65～75)mm。干擾圓筒的另一端伸出安全柜至少150mm。將四只空氣采樣器放到安全柜前放中間部位，使采樣器的空氣進(jìn)氣口距安全柜前部開(kāi)口平面150mm～160mm。兩只采樣器的進(jìn)氣口與干擾圓筒頂部水平，并在前部開(kāi)口中線兩側(cè)各距中線150mm,另外兩只采樣器的進(jìn)氣口與前窗底沿平齊，在前部開(kāi)口中線兩側(cè)各相距中線150mm。對(duì)于I級(jí)安全柜，要將氣溶膠發(fā)生器放到安全柜中間低于干擾圓筒的位置，使渦流盤的前沿位于前部開(kāi)口平面之后100mm。對(duì)于II級(jí)安全柜，使實(shí)驗(yàn)支架上的氣溶膠發(fā)生器位于安全柜中間，渦流盤盤心在干擾圓筒上方正對(duì)干擾圓筒的中心，渦流盤的前沿位于前部開(kāi)口平面之后100mm。調(diào)節(jié)發(fā)生器高度至渦流盤與前部開(kāi)口頂沿水平。在每只空氣采樣器上安裝一塊過(guò)濾膜，依照廠家說(shuō)明書(shū)每只采樣器的壓差至可產(chǎn)生100L/min的吸入氣流流量。A.5試驗(yàn)步驟啟動(dòng)安全柜，使其運(yùn)行至正常操作狀態(tài)。使空氣采樣器吸氣，啟動(dòng)渦流盤。等待15s后，使碘化鉀進(jìn)入渦流盤中部，允許20mL的碘化鉀氣溶膠化。氣溶膠化結(jié)束15s后空氣采樣器停止吸氣。等到抽氣泵完全停下來(lái)后，移去過(guò)濾膜。將一只采樣器上取下的過(guò)濾膜放到盛有氯化鈀溶液的皮氏培養(yǎng)皿內(nèi)，暴露在氣流中的面朝上。對(duì)移去過(guò)濾膜的那只采樣器進(jìn)行標(biāo)記。過(guò)濾膜將在30s～50s內(nèi)被氯化鈀飽和，所有碘化鉀微粒將變?yōu)樽厣目梢?jiàn)斑點(diǎn)。將過(guò)濾膜放入蒸餾水內(nèi)浸透3s～4s,然后將過(guò)濾膜放在清潔的濾紙上干燥。其他空氣采樣器上取下來(lái)的過(guò)濾膜也做相同的處理。將蓋子蓋回培養(yǎng)皿。用一只10倍的放大鏡檢查每個(gè)過(guò)濾膜，對(duì)過(guò)濾膜上的棕色斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。A.6結(jié)果計(jì)算用式(A.1)計(jì)算釋放的碘化鉀粒子數(shù)N:M氣溶膠發(fā)生器分散的碘化鉀溶液的體積，以毫升(mL)表示；3.1×10'——由液滴尺寸、采樣流量和渦流盤轉(zhuǎn)速導(dǎo)出的一個(gè)常數(shù)。用式(A.2)計(jì)算由每個(gè)過(guò)濾膜得到的開(kāi)口保護(hù)因子值A(chǔ)pr:V—采樣流量，以升每分(L/min)表示；N—過(guò)濾膜上的斑點(diǎn)數(shù)；n——以流速s采樣獲得的粒子數(shù)Apr=6.2×10?/n……A.7背景測(cè)試將兩只帶有過(guò)濾膜的空氣采樣器放到安全柜前面，距前部開(kāi)口每側(cè)中線150mm,距前部開(kāi)口平面100mm.啟動(dòng)采樣器抽氣泵，在氣溶膠發(fā)生器不產(chǎn)生碘化鉀液滴的情況下運(yùn)行10min。取出過(guò)濾膜，按照A.5處理和檢查。注1:如果在此前24h之內(nèi)未作過(guò)測(cè)試，則該背景測(cè)試結(jié)束時(shí)，顯影過(guò)濾膜上應(yīng)沒(méi)有棕色斑。注2:如果實(shí)驗(yàn)室最近做過(guò)A,測(cè)試(或者氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)時(shí)已有相當(dāng)多的泄漏),則最好在對(duì)安全柜作進(jìn)一步測(cè)試前進(jìn)行背景測(cè)試。10min測(cè)試后如果發(fā)現(xiàn)兩塊過(guò)濾膜中有一塊斑點(diǎn)數(shù)超過(guò)5,則視為不合要求，進(jìn)一步的安全柜測(cè)試工作需推遲到背景不再有污染時(shí)才能進(jìn)行。(規(guī)范性附錄)B.2按下列方法制備無(wú)菌稀釋液B.2.1方法一：磷酸鹽緩沖液(PBS)的制備a)將34gKH?PO?溶于500ml蒸餾水中，用1mol/LNaOH將溶液的pH值調(diào)至7.2±0.5,用蒸餾水稀釋至1000ml,制備濃磷酸鹽緩沖液(PBS);b)取1.25ml濃PBS,加入1000ml蒸餾水，高壓滅菌器中120℃消毒15min,得到稀釋的PBS;可B.2.2方法二：蒸餾水緩沖液的制備1000ml蒸餾水，25℃時(shí)將蒸餾水的pH值調(diào)節(jié)至7.0±0.1,在高壓滅菌器中120℃消毒15min。B.3按下列方法制備枯草芽胞桿B.3.1方法A(使用B.1枯草芽抱桿菌)a)用劃線技術(shù)無(wú)菌接種于胰酶的大豆瓊脂(Dificol或與之相當(dāng)?shù)钠贩N)培養(yǎng)皿D(Φ90mm)中；b)在37℃±0.5℃下培養(yǎng)48h±2h;c)選取特征著色菌落，并轉(zhuǎn)移至10個(gè)220ml消毒的帶螺旋蓋小瓶中，每個(gè)瓶?jī)?nèi)盛有大約50ml胰d)在37℃±0.5℃培養(yǎng)48±2h;e)加10mlPBS至斜面培養(yǎng)基上并輕輕的洗滌瓊脂表面的細(xì)菌；f)合并細(xì)菌懸浮液于一消毒的150ml具螺旋蓋的瓶中，使其約為100ml;在65℃±0.5℃熱