152024-02-23發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標準化技術(shù)委員會（SAM/TC1本文件起草單位：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學、內(nèi)蒙古賽諾種羊科技有限I綿羊體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了綿羊體外胚胎生產(chǎn)過程中的卵母細胞體外成熟、體外受精和早期胚胎體外培養(yǎng)等內(nèi)3.1卵母細胞在體外恢復減數(shù)分裂并發(fā)育到第二次減數(shù)分裂中期（MII）這一過程，3.2哺乳動物的精子和卵子置于適宜的培養(yǎng)條件下使之完成3.3將受精卵置于適宜的培養(yǎng)條件下使其發(fā)育至囊胚采卵液、體外成熟培養(yǎng)液（IVM液）、受精液（IVF液）和胚胎發(fā)育液（IVC液）配方見附錄1后，操作人員將雙手清洗干凈后，穿戴工作服、口罩、手套、帽子等，更換拖鞋進入實驗室，關(guān)閉實驗室門；用75%酒精噴灑消毒雙手；實6.2檢卵采卵液于37℃恒溫板上提前預熱。將含有卵母細胞的采卵液置入60mm的培養(yǎng)皿。在體式顯微體外受精實驗開始前，在5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，平衡受8.2體外受精如使用冷凍精液，將所需精液置于37℃~40℃水浴解凍。28.3卵母細胞處理/100μ~20枚/100μL受精液的密度移入受精液中。8.4體外受精μL上清液加入提前預熱好的離心管中，1500r/min離心4min后棄掉上清液，剩余約30μL～50μL精子沉淀液，輕輕混勻。用移液槍吸取精子沉淀液，傾斜槍頭從邊緣插入受精液滴或孔，對準卵母細預先將綿羊胚胎體外發(fā)育液（IVC液）在38.6℃、5%CO2培），）；態(tài)，將其分為A、B、C級）、退化卵數(shù)（胞質(zhì)不均勻、卵丘擴散嚴重、裸卵數(shù)）；記錄卵母細胞成熟時3A.1卵母細胞體外成熟液配制0.02IU/mLFSH、0.02IU/mS、0.1ml青鏈霉素合劑，使用TCM-1濾，在0℃~5℃條件下可保存2周。A.2采卵液配制0.05gBSA、0.035g肝素鈉、0.5mL青鏈霉素合劑，使用PBS定容至50mL，混勻后用Millipore0.22μm的過濾器過濾，在0℃~5℃條件下可保存2周。3.1452gNaCl、0.2675gKCl、0.0814gKH2PO4、0.0442gMgSO4、0.2655g丙酮酸鈉、1.3115gCaCl2、0.0251g肌醇、0.0074g谷氨酰胺、300μL乳酸鈉、0.5mL青鏈霉素合劑、1%酚紅，使用胚胎水定容至50mL，混勻后用Millipore0.22μm的過濾器過濾，在0℃~5℃條件下可保存2周。1mL發(fā)情羊血清、6IU/ml肝素鈉,使用器