152024-05-31發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標準化技術(shù)委員會（SAM/TC1技有限責任公司，內(nèi)蒙古金草原生態(tài)科技集團有限公司，內(nèi)蒙古杜美牧業(yè)生物科技有限公I規(guī)模化羊場綿羊支原體肺炎診斷及免疫技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了規(guī)?；驁鼍d羊支原體肺炎診斷及免NY/T2835奶山羊飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)范NY/T3052舍飼肉羊飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)范綿羊肺炎支原體mycoplasmaovi約125nm～500nm，無細胞壁。Mo合成能力差，聚合酶鏈式反應polymerasechain一種級聯(lián)反復循環(huán)的DNA合成反應過程。一般由三個步驟組成：模板的熱變性，寡核苷酸引物復性12間接酶聯(lián)免疫吸附試驗indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay(間接ELISA)已知的抗原吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板，也稱酶標板)表面，樣品中待檢測抗體于抗機體抵抗力下降的羊更易感染。綿羊肺炎支原體在自然條件下可以通過空氣-飛沫(氣溶膠)傳染，引一年四季都發(fā)，其中夏末和冬季頻發(fā)。環(huán)境因素也會導致本病流行肺臟與胸腔粘連，出現(xiàn)胸腔積液。尖葉病變嚴重，心葉和膈葉次之，其他器官的頸靜脈無菌采血3mL～5mL,室溫放置1h后4℃放置過夜，室溫3000rpm離心5min～10min,分離血清，于-20℃保存。無菌條件下取樣，在肺組織病變與正常組織交界處，取3cm3～5cm3大小的組織樣本，冷藏條支原體液體培養(yǎng)基，支原體固體培養(yǎng)基，馬血清，1%醋酸鉈，8萬單在表層消毒后，在病變和正常組織交界處取米粒至綠豆大小深層肺組織置于玻璃勻漿器中，加入3），體變?yōu)槌燃t色，取1mL培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入10mL培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)，盲傳三代后，取3mL培養(yǎng)液提取基因3PCR儀，電爐，離心機，混勻器，微量可調(diào)移液器，1.5mL離心管，PCR反應管，核酸電泳儀，凝4對照設置：對照模板為綿羊肺炎支原體Y98標準株基因體，1M硫酸溶液。除另有規(guī)定，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682分離鑒定并經(jīng)測序確定為綿羊肺炎支原體的菌液制備全菌滅活抗原，并用其免疫3月齡羔羊制備標綿羊肺炎支原體菌液100mL，4℃12000rpm離心30min，棄上清，取沉淀。將菌體沉淀用0.1MpH7.4的PBS緩沖液洗滌3次，用5mLPBS重懸。菌體重懸液超聲裂解，4℃集上清，即為綿羊肺炎支原體全菌抗原。用BCA法測定蛋白質(zhì)濃度，將抗原凍存于-20℃?zhèn)溆谩？准尤胫撩嘎?lián)反應板，置4℃冰箱過夜，次日棄56待檢樣本S,陽性對照P,陰性對照N。陽性對照P值應大于0.8,陰性對照值應小于0.2,待檢驗本S/陰性對照N比值>2.1即判定為陽性，待檢驗本S/陰性臨床診斷符合綿羊肺炎支原體癥狀，病原鑒定為陽性或PCR鑒定為陽性，即可判定為綿羊肺炎支原疫苗選擇：b)每次免疫時，最好選用同一企業(yè)生產(chǎn)的疫苗。飼養(yǎng)管理與衛(wèi)生消毒工作及提高生物安全標準的基礎(chǔ)上，根據(jù)羊群具體情況制定用藥方案。單位/mL青霉素溶液5mL,定容至500mL，倒平板，待培養(yǎng)基凝固后，置4℃保存?zhèn)溆?。A.3TAE電泳緩沖液：Tris4.84g/L,冰乙酸1.142A.58萬國際單位/mL青霉素溶液：取400萬國際單位的青霉素粉劑，溶于50mL雙蒸水中,至完入容器中；未溶解的酚紅繼續(xù)加1MNaOH溶液2mL，重復上述步驟（NaOH溶液總量不可超過6mL78(資料性)綿羊肺炎支原體的分離鑒定B.1綿羊肺炎支原體菌落形態(tài)(10×40)見圖B.1。圖B.1綿羊肺炎支原體菌落形態(tài)(10×40)B.2綿羊肺炎支原體瑞士染色(10×100)見圖B.2。圖B.2綿羊肺炎支原體瑞士染色(10×100)9B.3綿羊肺炎支原體特異性引物PCR電泳圖。標引序號說明：M——DNA分子量標準；1——鼻拭子樣本；