匹伐他汀納米顆粒：賦能內(nèi)皮祖細(xì)胞，重塑血管修復(fù)新路徑一、引言1.1研究背景與意義隨著人口老齡化和生活方式的改變，心血管疾?。–VD）已成為全球主要的健康威脅?！吨袊?guó)心血管健康與疾病報(bào)告2022》指出，由于居民不健康生活方式流行，有心血管病危險(xiǎn)因素的人群巨大，人口老齡化加速，中國(guó)心血管病發(fā)病率和死亡率仍在升高，疾病負(fù)擔(dān)下降的拐點(diǎn)尚未出現(xiàn)。中國(guó)心血管病現(xiàn)患人數(shù)達(dá)3.3億，每5例死亡中就有2例死于心血管病，在城鄉(xiāng)居民疾病死亡構(gòu)成比中，心血管病占首位。而在2022年，心血管病更是導(dǎo)致全球約1980萬(wàn)人死亡，高收縮壓是心血管病負(fù)擔(dān)的首要原因。血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管的內(nèi)層，具有重要的調(diào)節(jié)功能，正常情況下，它可釋放一氧化氮（NO）、神經(jīng)肽Y（NPY）等一系列生物活性物質(zhì)，維持血管內(nèi)皮功能的穩(wěn)態(tài)，防止血管損傷和炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生。然而，當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受到如驚厥、炎癥、氧化應(yīng)激等不良刺激時(shí)，就會(huì)發(fā)生損傷或失調(diào)，導(dǎo)致NO等生物活性物質(zhì)的釋放減少，進(jìn)而促進(jìn)血管壁的損傷和炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生，進(jìn)一步加劇血管內(nèi)皮功能障礙和CVD的發(fā)生發(fā)展。比如，脂質(zhì)沉積、高血壓病等會(huì)導(dǎo)致動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷，使內(nèi)皮細(xì)胞下的膠原暴露，引起血小板活化，不斷黏附于損傷的血管內(nèi)皮表面，同時(shí)激活內(nèi)、外源性凝血途徑，促使血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，使血小板交織在一起，最終可能形成血栓，引發(fā)嚴(yán)重的心腦血管事件。內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）在損傷血管修復(fù)、缺血組織血管新生、正常內(nèi)皮功能維持中的作用已引起廣泛關(guān)注。它能夠分化為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞，參與血管內(nèi)皮的修復(fù)和再生過(guò)程。然而，在心血管疾病及其相關(guān)危險(xiǎn)因素患者中，EPCs的數(shù)量會(huì)減少，其功能也會(huì)下降，黏附到損傷血管的能力降低。因此，利用藥物或其他干預(yù)因素增加EPCs的數(shù)量并改善其功能，成為優(yōu)化EPCs治療策略的重要手段。他汀類(lèi)藥物作為缺血性心血管疾病治療的基石，具有獨(dú)立于降脂以外的多重心血管保護(hù)作用，其中包括對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能的改善。其作用機(jī)制主要是通過(guò)抑制HMG-CoA還原酶來(lái)降低膽固醇合成，進(jìn)而發(fā)揮一系列心血管保護(hù)效應(yīng)。但這種對(duì)EPCs生物學(xué)功能的改善作用，多建立在較大劑量、長(zhǎng)時(shí)間他汀類(lèi)藥物的應(yīng)用上。匹伐他汀作為新一代的他汀藥物，已被證實(shí)具有更強(qiáng)的調(diào)脂、改善內(nèi)皮功能、逆轉(zhuǎn)斑塊等治療價(jià)值。不過(guò)，為達(dá)到這些獲益，所需局部藥物濃度較高、服用時(shí)間較長(zhǎng)，這仍可引起全身不良反應(yīng)，像肝酶升高、肌肉疼痛等，在一定程度上限制了其臨床應(yīng)用。納米技術(shù)的出現(xiàn)為藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)提供了新的平臺(tái)。以可生物降解的高分子材料做為藥物載體，制備成匹伐他汀納米顆粒，可改變匹伐他汀的藥代動(dòng)力學(xué)特征，使其能夠更精準(zhǔn)地遞送至作用部位，提高局部藥物濃度，增強(qiáng)治療效果，同時(shí)減少藥物在非靶組織的分布，減輕全身不良反應(yīng)。對(duì)匹伐他汀納米顆粒改善內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能及修復(fù)損傷血管的研究，不僅能優(yōu)化匹伐他汀的性能，提高藥物療效和安全性，還能為CVD的預(yù)防和治療提供新的思路和方法，為開(kāi)發(fā)具有修復(fù)損傷血管功能的新藥物或治療方案積累科研成果，具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在心血管疾病治療領(lǐng)域，匹伐他汀、內(nèi)皮祖細(xì)胞、納米顆粒各自成為研究熱點(diǎn)，近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者圍繞這三個(gè)要素在血管修復(fù)方面展開(kāi)了大量研究，取得了一系列成果。在匹伐他汀對(duì)血管及相關(guān)細(xì)胞影響的研究上，國(guó)內(nèi)外均有深入探索。國(guó)內(nèi)有研究表明，匹伐他汀能夠抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)，從而減少血管內(nèi)膜增生，這對(duì)于預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的進(jìn)展具有重要意義。國(guó)外的研究則進(jìn)一步揭示，匹伐他汀還可以通過(guò)抑制炎癥因子的釋放，減輕血管炎癥反應(yīng)，改善血管內(nèi)皮功能。比如在一項(xiàng)針對(duì)冠心病患者的臨床研究中，發(fā)現(xiàn)使用匹伐他汀治療后，患者血液中的炎癥指標(biāo)如C反應(yīng)蛋白明顯降低，同時(shí)血管內(nèi)皮依賴(lài)性舒張功能得到改善。此外，匹伐他汀在調(diào)節(jié)血脂方面的作用也被廣泛證實(shí)，它能夠降低低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平，升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，進(jìn)而降低心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。內(nèi)皮祖細(xì)胞在血管修復(fù)中的關(guān)鍵作用同樣受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的高度關(guān)注。國(guó)內(nèi)有團(tuán)隊(duì)通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將體外擴(kuò)增的內(nèi)皮祖細(xì)胞移植到缺血性血管損傷模型中，能夠促進(jìn)血管新生，改善缺血組織的血液供應(yīng)。其作用機(jī)制主要是內(nèi)皮祖細(xì)胞能夠分化為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞，參與受損血管內(nèi)皮的修復(fù)，同時(shí)還能分泌多種血管生長(zhǎng)因子，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等，招募周?chē)?xì)胞參與血管修復(fù)過(guò)程。國(guó)外的研究則更側(cè)重于探討內(nèi)皮祖細(xì)胞功能障礙與心血管疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，在患有糖尿病、高血壓等心血管疾病高危因素的患者中，內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和功能明顯下降，表現(xiàn)為增殖能力減弱、遷移能力降低以及分化為內(nèi)皮細(xì)胞的能力受損等，這進(jìn)一步表明了內(nèi)皮祖細(xì)胞在維持血管健康中的重要性，也為通過(guò)改善內(nèi)皮祖細(xì)胞功能來(lái)治療心血管疾病提供了理論依據(jù)。隨著納米技術(shù)的飛速發(fā)展，納米顆粒在藥物遞送和疾病治療方面展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，在血管修復(fù)領(lǐng)域的研究也不斷涌現(xiàn)。國(guó)內(nèi)有研究成功制備了負(fù)載藥物的納米顆粒，通過(guò)優(yōu)化納米顆粒的粒徑、表面電荷等特性，實(shí)現(xiàn)了藥物在血管病變部位的靶向遞送，提高了藥物的療效。例如，制備的納米顆粒能夠特異性地結(jié)合到血管內(nèi)皮損傷部位，釋放所負(fù)載的藥物，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)和再生。國(guó)外的研究則在納米顆粒的材料選擇和制備工藝上取得了突破，開(kāi)發(fā)出了多種新型的可生物降解納米材料，如聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）等，這些材料具有良好的生物相容性和穩(wěn)定性，能夠有效地包裹藥物，延長(zhǎng)藥物的釋放時(shí)間，減少藥物的副作用。此外，利用納米顆粒遞送基因治療藥物也成為研究熱點(diǎn)，通過(guò)將治療基因包裹在納米顆粒中，遞送至血管內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮祖細(xì)胞內(nèi)，實(shí)現(xiàn)基因水平的治療，為心血管疾病的治療提供了新的策略。1.3研究目的與方法本研究旨在深入探究匹伐他汀納米顆粒對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，以及其在修復(fù)損傷血管方面的作用和潛在機(jī)制，為心血管疾病的治療提供新的策略和理論依據(jù)。在研究方法上，將綜合運(yùn)用多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)和模型，從細(xì)胞和動(dòng)物水平進(jìn)行全面研究。首先，采用納米技術(shù)制備匹伐他汀納米顆粒，通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射、透射電子顯微鏡等技術(shù)對(duì)其粒徑分布、形態(tài)、穩(wěn)定性等物理性質(zhì)進(jìn)行精確表征，確保納米顆粒的質(zhì)量和性能符合實(shí)驗(yàn)要求。隨后，利用密度梯度離心法從人臍帶血中分離單個(gè)核細(xì)胞，并通過(guò)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得內(nèi)皮祖細(xì)胞，采用免疫熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)等方法對(duì)其進(jìn)行鑒定，以明確細(xì)胞的純度和特性。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，設(shè)置不同濃度梯度的匹伐他汀納米顆粒處理組，分別作用于內(nèi)皮祖細(xì)胞不同時(shí)間，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期分布，以及通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平和抗氧化酶活性來(lái)評(píng)估細(xì)胞的抗氧化能力。同時(shí)，利用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)，檢測(cè)與內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能相關(guān)的信號(hào)通路蛋白和基因的表達(dá)變化，深入探究匹伐他汀納米顆粒對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞作用的分子機(jī)制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面，構(gòu)建大鼠頸動(dòng)脈損傷模型和動(dòng)脈粥樣硬化模型，通過(guò)尾靜脈注射或局部給藥的方式給予匹伐他汀納米顆粒，以未處理組和傳統(tǒng)匹伐他汀藥物處理組作為對(duì)照。在給藥后的不同時(shí)間點(diǎn)，取損傷血管組織進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色、Masson染色等，觀察血管內(nèi)膜增生、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、膠原沉積等病理變化；采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)，評(píng)估血管內(nèi)皮的修復(fù)情況；利用超聲多普勒檢測(cè)血管血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，如血管內(nèi)徑、血流速度等，綜合評(píng)價(jià)匹伐他汀納米顆粒對(duì)損傷血管的修復(fù)效果。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能2.1.1內(nèi)皮祖細(xì)胞的概述內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）是一類(lèi)能分化為成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，最早于1997年由Asahara等學(xué)者發(fā)現(xiàn)并報(bào)道。在胚胎發(fā)育階段，EPCs起源于中胚層的成血-血管干細(xì)胞，這類(lèi)干細(xì)胞具有多向分化潛能，可分化為造血干細(xì)胞和EPCs。隨著胚胎的進(jìn)一步發(fā)育，EPCs逐漸遷移至特定部位，增殖分化形成原始血管叢，這些原始血管叢進(jìn)一步發(fā)育、融合，最終構(gòu)建成完整的血管系統(tǒng)，這一過(guò)程被稱(chēng)為血管發(fā)生（vasculogenesis），對(duì)胚胎的正常發(fā)育和器官形成至關(guān)重要。在成體中，EPCs主要來(lái)源于骨髓，少量存在于外周血、臍帶血等組織中。在生理或病理刺激下，如組織缺血、血管損傷時(shí)，骨髓中的EPCs會(huì)被動(dòng)員進(jìn)入外周血循環(huán)。這些循環(huán)中的EPCs能夠歸巢到損傷血管部位或缺血組織區(qū)域，在局部微環(huán)境的作用下，分化為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞，參與血管新生（angiogenesis）和損傷血管的修復(fù)過(guò)程。研究表明，在心肌梗死小鼠模型中，通過(guò)尾靜脈注射標(biāo)記的EPCs，可觀察到這些細(xì)胞在梗死心肌區(qū)域聚集，并分化為內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)新生血管形成，改善心肌血供。在人體中，也發(fā)現(xiàn)外周血EPCs數(shù)量在急性心肌梗死、缺血性腦卒中后會(huì)短暫升高，提示EPCs參與了機(jī)體對(duì)血管損傷和缺血的修復(fù)反應(yīng)。2.1.2內(nèi)皮祖細(xì)胞的生物學(xué)特性EPCs具有獨(dú)特的表面標(biāo)志物，這是其鑒定和研究的重要依據(jù)。早期EPCs通常表達(dá)CD34、CD133和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR-2，又稱(chēng)KDR）等標(biāo)志物。其中，CD34是一種跨膜糖蛋白，最初被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的標(biāo)志物，在EPCs中也有表達(dá)；CD133是一種五跨膜糖蛋白，主要存在于早期造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞表面，隨著EPCs的分化，CD133表達(dá)逐漸降低；VEGFR-2則是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的主要受體，在EPCs的增殖、遷移和分化過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。隨著EPCs向成熟內(nèi)皮細(xì)胞分化，會(huì)逐漸表達(dá)一些成熟內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物，如血管性血友病因子（vWF）、血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1（PECAM-1，即CD31）、血管內(nèi)皮鈣黏蛋白（VE-cadherin）等。這些標(biāo)志物的動(dòng)態(tài)變化，反映了EPCs的分化階段和功能狀態(tài)。EPCs具有分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞的潛能。在體外培養(yǎng)條件下，給予適當(dāng)?shù)募?xì)胞因子刺激，如VEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）等，EPCs可逐漸分化為具有典型內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能特征的細(xì)胞。這些分化后的細(xì)胞呈現(xiàn)出扁平、鋪路石樣外觀，能夠攝取乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL），結(jié)合荊豆凝集素（UEA-1），并且表達(dá)成熟內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，如vWF、CD31等。在體內(nèi)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生血管損傷或缺血時(shí)，EPCs被動(dòng)員、歸巢到損傷部位，在局部微環(huán)境中多種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的作用下，分化為內(nèi)皮細(xì)胞，參與受損血管的修復(fù)和新生血管的形成，從而恢復(fù)組織的血液供應(yīng)。EPCs的歸巢機(jī)制是其發(fā)揮血管修復(fù)作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當(dāng)血管受損或組織缺血時(shí)，局部會(huì)釋放多種趨化因子，如基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）等，這些趨化因子與其在EPCs表面的相應(yīng)受體結(jié)合，引導(dǎo)EPCs向損傷部位遷移。EPCs表面表達(dá)的整合素家族成員，如α4β1整合素、αvβ3整合素等，可與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的細(xì)胞黏附分子，如血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）、纖連蛋白等相互作用，促進(jìn)EPCs黏附到血管內(nèi)皮，進(jìn)而穿越內(nèi)皮屏障，進(jìn)入血管壁或缺血組織，實(shí)現(xiàn)歸巢過(guò)程。此外，EPCs還能感知損傷部位的低氧環(huán)境，通過(guò)低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）等信號(hào)通路的激活，增強(qiáng)自身對(duì)趨化因子的反應(yīng)性，進(jìn)一步促進(jìn)歸巢。2.1.3內(nèi)皮祖細(xì)胞在血管修復(fù)中的作用機(jī)制EPCs參與血管修復(fù)的過(guò)程涉及多種細(xì)胞和分子機(jī)制。當(dāng)血管內(nèi)皮受損時(shí)，EPCs從骨髓或外周血被動(dòng)員至損傷部位，這一過(guò)程主要受多種細(xì)胞因子和趨化因子的調(diào)控。在血管損傷早期，局部組織釋放的VEGF不僅能促進(jìn)EPCs從骨髓中動(dòng)員進(jìn)入外周血，還能增強(qiáng)EPCs的遷移能力，使其向損傷部位趨化。SDF-1與其受體CXCR4在EPCs歸巢中發(fā)揮關(guān)鍵作用，損傷部位高表達(dá)的SDF-1與EPCs表面的CXCR4結(jié)合，引導(dǎo)EPCs定向遷移到損傷血管處。到達(dá)損傷部位的EPCs通過(guò)直接分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞，參與受損血管內(nèi)皮的修復(fù)。在局部微環(huán)境中多種生長(zhǎng)因子（如VEGF、bFGF等）和細(xì)胞外基質(zhì)成分的作用下，EPCs逐漸表達(dá)成熟內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，如vWF、CD31等，獲得內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和功能，補(bǔ)充受損的內(nèi)皮細(xì)胞層，恢復(fù)血管內(nèi)皮的完整性。EPCs還能通過(guò)旁分泌作用促進(jìn)血管修復(fù)。EPCs可分泌多種生物活性物質(zhì)，如VEGF、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）、一氧化氮（NO）等。這些因子具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，VEGF和HGF能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，促進(jìn)新生血管形成；IGF-1可抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)血管的穩(wěn)定性；NO則具有舒張血管、抑制血小板聚集和炎癥反應(yīng)的作用，有助于改善血管微環(huán)境，促進(jìn)血管修復(fù)。在血管修復(fù)過(guò)程中，EPCs還參與調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）的功能。EPCs分泌的因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，可抑制VSMC的增殖和遷移，減少血管內(nèi)膜增生，防止血管狹窄的發(fā)生。EPCs與VSMC之間的直接細(xì)胞-細(xì)胞相互作用也可能影響VSMC的表型轉(zhuǎn)化，使其維持在收縮型表型，有利于血管正常功能的恢復(fù)。2.2匹伐他汀的作用機(jī)制及特點(diǎn)2.2.1匹伐他汀的降脂機(jī)制他汀類(lèi)藥物通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶，減少膽固醇合成，匹伐他汀也不例外。HMG-CoA還原酶是膽固醇合成過(guò)程中的限速酶，在膽固醇合成的甲羥戊酸途徑中發(fā)揮關(guān)鍵作用。該途徑始于乙酰輔酶A，在一系列酶的催化下逐步合成膽固醇，其中HMG-CoA還原酶催化HMG-CoA轉(zhuǎn)化為甲羥戊酸，這是膽固醇合成的關(guān)鍵步驟。匹伐他汀的化學(xué)結(jié)構(gòu)使其能夠緊密結(jié)合HMG-CoA還原酶的活性位點(diǎn)，抑制該酶的活性，從而阻斷甲羥戊酸的生成，進(jìn)而減少膽固醇的合成。細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少后，會(huì)引發(fā)一系列反饋調(diào)節(jié)機(jī)制。細(xì)胞表面的低密度脂蛋白受體（LDLR）基因表達(dá)上調(diào)，使得細(xì)胞表面LDLR數(shù)量增加。這些增多的LDLR能夠更有效地與血液中的低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）結(jié)合，通過(guò)內(nèi)吞作用將LDL-C攝取進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)行代謝和利用，最終導(dǎo)致血液中LDL-C水平降低。臨床研究表明，服用匹伐他汀后，患者血液中的總膽固醇（TC）、LDL-C水平顯著下降。在一項(xiàng)針對(duì)高膽固醇血癥患者的研究中，給予患者匹伐他汀治療8周后，患者的LDL-C水平平均下降了30%-40%，TC水平也有相應(yīng)程度的降低。這充分證明了匹伐他汀通過(guò)抑制HMG-CoA還原酶，有效降低膽固醇合成，從而發(fā)揮降脂作用。2.2.2匹伐他汀的心血管保護(hù)作用除了降脂作用外，匹伐他汀還具有多方面的心血管保護(hù)作用。在炎癥反應(yīng)方面，炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中存在大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的釋放，會(huì)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞損傷、平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定。匹伐他汀能夠抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，匹伐他汀可降低動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型中TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達(dá)水平，減少炎癥細(xì)胞在血管壁的浸潤(rùn)，穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。氧化應(yīng)激也是心血管疾病的重要病理生理機(jī)制之一。活性氧（ROS）的過(guò)度產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)和DNA損傷，破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能。匹伐他汀具有抗氧化作用，它可以上調(diào)抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）的表達(dá)和活性，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力，減少ROS的產(chǎn)生，減輕氧化應(yīng)激對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。在體外實(shí)驗(yàn)中，用匹伐他汀處理氧化應(yīng)激損傷的內(nèi)皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著降低，SOD和GSH-Px活性升高，細(xì)胞的存活率明顯提高。血管內(nèi)皮功能對(duì)于維持血管的正常生理功能至關(guān)重要。內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)釋放一氧化氮（NO）等血管活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)血管的舒張和收縮，抑制血小板聚集和血栓形成。當(dāng)內(nèi)皮功能受損時(shí)，NO釋放減少，血管收縮、血小板聚集和血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)增加。匹伐他汀可以通過(guò)多種途徑改善內(nèi)皮功能，它能夠激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS），促進(jìn)NO的合成和釋放。在一項(xiàng)臨床研究中，對(duì)冠心病患者給予匹伐他汀治療后，發(fā)現(xiàn)患者的血管內(nèi)皮依賴(lài)性舒張功能明顯改善，血流介導(dǎo)的血管舒張（FMD）指標(biāo)顯著提高，這表明匹伐他汀能夠有效改善血管內(nèi)皮功能，降低心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。2.2.3匹伐他汀在血管修復(fù)中的潛在作用在血管修復(fù)過(guò)程中，匹伐他汀發(fā)揮著不可忽視的潛在作用。當(dāng)血管受到損傷時(shí)，血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）會(huì)發(fā)生增殖和遷移，從血管中膜向內(nèi)膜遷移，導(dǎo)致血管內(nèi)膜增生，這是血管狹窄和再狹窄的重要病理基礎(chǔ)。匹伐他汀能夠抑制VSMCs的增殖和遷移，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。研究表明，匹伐他汀可使VSMCs停滯于G0/G1期，抑制細(xì)胞從G1期向S期的轉(zhuǎn)換，從而減少細(xì)胞增殖。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，對(duì)血管損傷模型給予匹伐他汀治療，發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)膜增生明顯減輕，內(nèi)膜/中膜厚度比值降低，表明匹伐他汀能夠有效抑制VSMCs的增殖和遷移，對(duì)血管修復(fù)起到積極作用。匹伐他汀還能通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）的功能來(lái)促進(jìn)血管修復(fù)。EPCs在血管損傷修復(fù)和血管新生中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，而匹伐他汀可以促進(jìn)EPCs的增殖、遷移和分化。在體外實(shí)驗(yàn)中，用匹伐他汀處理EPCs，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)，遷移速度加快，分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞的能力也顯著提高。其作用機(jī)制可能與激活PI3K/Akt信號(hào)通路有關(guān)，該信號(hào)通路的激活能夠促進(jìn)EPCs的存活、增殖和遷移，同時(shí)上調(diào)與血管生成相關(guān)的基因和蛋白表達(dá)，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）及其受體等，進(jìn)一步促進(jìn)血管修復(fù)。目前，關(guān)于匹伐他汀在血管修復(fù)方面的研究仍在不斷深入。一些臨床研究初步證實(shí)了匹伐他汀在心血管疾病患者中的應(yīng)用，能夠改善血管功能和預(yù)后。但仍需要更多大規(guī)模、多中心的臨床研究來(lái)進(jìn)一步明確其在血管修復(fù)中的具體作用機(jī)制、最佳治療劑量和療程等，為臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。2.3納米顆粒技術(shù)在藥物傳遞中的應(yīng)用2.3.1納米顆粒的特性與優(yōu)勢(shì)納米顆粒是指尺寸在1-1000nm范圍內(nèi)的微小粒子，其獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)使其在藥物傳遞領(lǐng)域展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)。納米顆粒的小尺寸賦予其特殊的性能。由于尺寸極小，納米顆粒能夠輕易穿透生物膜，如毛細(xì)血管壁、細(xì)胞膜等，這一特性使得它們能夠更高效地將藥物遞送至靶細(xì)胞或組織。在腫瘤治療中，納米顆?？梢酝ㄟ^(guò)腫瘤組織的高通透性和滯留效應(yīng)（EPR效應(yīng)），被動(dòng)地富集于腫瘤部位，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的精準(zhǔn)打擊。一些粒徑小于100nm的納米顆粒能夠穿透血腦屏障，為腦部疾病的治療提供了新的可能，因?yàn)檠X屏障通常對(duì)許多大分子藥物具有阻擋作用。納米顆粒具有高比表面積，這意味著單位質(zhì)量的納米顆粒擁有更大的表面面積，能夠提供更多的藥物負(fù)載位點(diǎn)和反應(yīng)活性位點(diǎn)。高比表面積有利于納米顆粒與藥物分子之間的相互作用，使藥物能夠更穩(wěn)定地結(jié)合在納米顆粒表面或內(nèi)部，提高藥物的負(fù)載量和包封率。同時(shí)，更多的反應(yīng)活性位點(diǎn)也為納米顆粒表面修飾提供了便利，通過(guò)在納米顆粒表面連接特異性的靶向分子，如抗體、配體等，可以實(shí)現(xiàn)納米顆粒的主動(dòng)靶向遞送，增強(qiáng)藥物在靶組織的富集，減少藥物在非靶組織的分布，從而提高藥物療效，降低藥物的毒副作用。良好的生物相容性是納米顆粒應(yīng)用于藥物傳遞的重要前提。生物相容性是指材料與生物體相互作用時(shí)，不會(huì)引起生物體的免疫反應(yīng)、毒性反應(yīng)或其他不良反應(yīng)的性質(zhì)。許多納米顆粒材料，如脂質(zhì)體、聚合物納米粒等，都具有良好的生物相容性。脂質(zhì)體是由磷脂等脂質(zhì)材料組成的雙分子層膜結(jié)構(gòu)，其組成成分與細(xì)胞膜相似，能夠在體內(nèi)自然降解，不會(huì)在體內(nèi)蓄積，對(duì)機(jī)體的毒性較小。聚合物納米粒則可以通過(guò)選擇合適的可生物降解聚合物，如聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）等，來(lái)確保納米顆粒在完成藥物遞送任務(wù)后，能夠在體內(nèi)逐漸降解為小分子物質(zhì)，被機(jī)體代謝排出，減少對(duì)機(jī)體的潛在危害。納米顆粒的物理化學(xué)性質(zhì)，如粒徑、表面電荷、表面修飾等，具有高度的可調(diào)控性。通過(guò)改變納米顆粒的制備工藝和配方，可以精確控制納米顆粒的粒徑大小和分布范圍，使其滿(mǎn)足不同的藥物傳遞需求。調(diào)整納米顆粒表面電荷，可改變其在生物體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間和與細(xì)胞的相互作用方式。帶正電荷的納米顆粒更容易與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜結(jié)合，但可能會(huì)引起較強(qiáng)的非特異性吸附；而帶負(fù)電荷或中性電荷的納米顆粒則在血液循環(huán)中更穩(wěn)定，能夠延長(zhǎng)納米顆粒在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。此外，通過(guò)表面修飾技術(shù)，在納米顆粒表面引入各種功能性基團(tuán)或分子，如聚乙二醇（PEG）、靶向配體等，可以進(jìn)一步改善納米顆粒的性能，增強(qiáng)其靶向性和穩(wěn)定性。2.3.2納米顆粒作為藥物載體的原理納米顆粒作為藥物載體，主要通過(guò)包裹、吸附或共價(jià)結(jié)合等方式與藥物結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物的有效負(fù)載和運(yùn)輸。許多納米顆粒材料，如脂質(zhì)體、聚合物納米粒、納米乳等，具有獨(dú)特的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，可以將藥物包裹在其內(nèi)部。脂質(zhì)體的雙分子層膜結(jié)構(gòu)能夠包裹水溶性藥物或脂溶性藥物，水溶性藥物被包裹在脂質(zhì)體的水相內(nèi)核中，而脂溶性藥物則溶解在脂質(zhì)雙分子層中。聚合物納米粒通過(guò)聚合反應(yīng)或自組裝過(guò)程形成納米級(jí)的粒子，藥物可以被包裹在聚合物納米粒的內(nèi)部，通過(guò)控制聚合物的組成和結(jié)構(gòu)，可以調(diào)節(jié)藥物的釋放速率。采用PLGA制備的納米粒，通過(guò)改變PLGA的分子量和組成比例，可以實(shí)現(xiàn)藥物的快速釋放或緩慢持續(xù)釋放。納米顆粒的表面具有較高的活性，可以通過(guò)物理吸附作用將藥物吸附在其表面。一些納米顆粒表面帶有電荷或具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與藥物分子之間形成靜電相互作用、氫鍵、范德華力等，從而實(shí)現(xiàn)藥物的吸附。例如，帶有正電荷的納米顆?？梢耘c帶負(fù)電荷的藥物分子通過(guò)靜電吸引作用結(jié)合在一起。這種吸附方式操作相對(duì)簡(jiǎn)單，但藥物與納米顆粒之間的結(jié)合力相對(duì)較弱，可能會(huì)導(dǎo)致藥物在運(yùn)輸過(guò)程中的提前釋放。為了增強(qiáng)藥物與納米顆粒之間的結(jié)合穩(wěn)定性，還可以通過(guò)共價(jià)鍵將藥物與納米顆粒連接起來(lái)。利用化學(xué)反應(yīng)在納米顆粒表面引入活性基團(tuán)，如羧基、氨基、羥基等，然后與藥物分子上的相應(yīng)基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，形成共價(jià)鍵。這種共價(jià)結(jié)合方式能夠有效避免藥物在運(yùn)輸過(guò)程中的泄漏，提高藥物的穩(wěn)定性，但可能會(huì)影響藥物的活性和釋放特性，需要對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行精細(xì)控制。納米顆粒作為藥物載體，能夠顯著改變藥物的代謝動(dòng)力學(xué)特性。在藥物代謝方面，納米顆粒可以保護(hù)藥物免受體內(nèi)酶和其他生物分子的降解，延長(zhǎng)藥物的半衰期。傳統(tǒng)藥物在體內(nèi)容易被肝臟、腎臟等器官代謝和清除，導(dǎo)致藥物作用時(shí)間較短。而納米顆粒包裹的藥物，由于納米顆粒的保護(hù)作用，能夠減少藥物與體內(nèi)代謝酶的接觸，降低藥物的代謝速度，從而延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間。在藥物分布方面，納米顆?？梢酝ㄟ^(guò)被動(dòng)靶向或主動(dòng)靶向機(jī)制，改變藥物在體內(nèi)的分布模式，使藥物更多地富集于靶組織或靶器官。通過(guò)EPR效應(yīng)實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤組織的被動(dòng)靶向遞送，納米顆粒還可以通過(guò)表面修飾靶向分子，如腫瘤特異性抗體、葉酸等，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的主動(dòng)靶向，提高藥物在腫瘤組織中的濃度，增強(qiáng)治療效果。2.3.3納米顆粒在心血管疾病治療中的應(yīng)用案例在心血管疾病治療領(lǐng)域，納米顆粒已展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景，并取得了一系列成功案例。在動(dòng)脈粥樣硬化治療方面，有研究利用納米顆粒遞送抗氧化劑和抗炎藥物，以減輕動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，穩(wěn)定斑塊。有科研團(tuán)隊(duì)制備了負(fù)載白藜蘆醇的納米顆粒，白藜蘆醇是一種具有抗氧化和抗炎活性的天然化合物。將該納米顆粒注射到動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型體內(nèi)后，發(fā)現(xiàn)納米顆粒能夠有效地富集于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊部位，釋放出白藜蘆醇，降低斑塊內(nèi)活性氧（ROS）水平，抑制炎癥因子的表達(dá)，減少炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，從而穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，降低斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。在心肌梗死治療中，納米顆粒也發(fā)揮了重要作用。一些研究將納米顆粒用于遞送促進(jìn)血管新生的生長(zhǎng)因子或干細(xì)胞，以促進(jìn)梗死心肌的血管再生和修復(fù)。有團(tuán)隊(duì)研發(fā)了一種負(fù)載血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的納米顆粒，通過(guò)冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射將其遞送至心肌梗死大鼠模型的梗死心肌區(qū)域。結(jié)果顯示，納米顆粒能夠持續(xù)釋放VEGF，促進(jìn)梗死心肌區(qū)域的血管新生，增加心肌血流量，改善心臟功能，減少心肌梗死面積。在血栓治療領(lǐng)域，納米顆粒同樣展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。傳統(tǒng)的溶栓藥物存在半衰期短、易引起出血等副作用的問(wèn)題。而納米顆粒可以通過(guò)修飾和設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)對(duì)血栓部位的靶向遞送，提高溶栓藥物的療效，降低副作用。有研究制備了表面修飾有血栓靶向肽的納米顆粒，并負(fù)載溶栓藥物尿激酶。實(shí)驗(yàn)表明，該納米顆粒能夠特異性地結(jié)合到血栓部位，釋放尿激酶，高效溶解血栓，同時(shí)減少藥物在非血栓部位的分布，降低出血風(fēng)險(xiǎn)。三、匹伐他汀納米顆粒的制備與表征3.1實(shí)驗(yàn)材料與方法3.1.1實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備制備匹伐他汀納米顆粒所使用的原料為聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA），其作為可生物降解的高分子材料，具有良好的生物相容性和可控的降解速率，能夠有效包裹匹伐他汀，實(shí)現(xiàn)藥物的穩(wěn)定遞送。匹伐他汀原料藥，作為核心藥物成分，其純度需達(dá)到98%以上，以確保納米顆粒的藥效。聚乙烯醇（PVA），在制備過(guò)程中作為穩(wěn)定劑，可防止納米顆粒的聚集，提高納米顆粒的穩(wěn)定性，選用的PVA為分析純，平均聚合度在1750±50。實(shí)驗(yàn)所用到的試劑有二***亞砜（DMSO），作為優(yōu)良的有機(jī)溶劑，能有效溶解PLGA和匹伐他汀，促進(jìn)納米顆粒的制備，采用的DMSO純度為99.5%。磷酸鹽緩沖溶液（PBS），用于納米顆粒的分散和清洗，維持體系的pH值穩(wěn)定，其pH值為7.4，濃度為0.01M。無(wú)水乙醇，用于清洗和純化納米顆粒，去除雜質(zhì)，選用的無(wú)水乙醇純度不低于99.7%。3.1.2匹伐他汀納米顆粒的制備方法本研究采用溶劑揮發(fā)法制備匹伐他汀納米顆粒。首先，準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的PLGA和匹伐他汀，按照質(zhì)量比10:1的比例，將其加入到適量的DMSO中。在室溫下，使用磁力攪拌器以500rpm的轉(zhuǎn)速攪拌30min，確保PLGA和匹伐他汀完全溶解，形成均一的溶液。這一步驟的原理是利用DMSO對(duì)PLGA和匹伐他汀的良好溶解性，使兩者充分混合，為后續(xù)納米顆粒的形成奠定基礎(chǔ)。隨后，將上述溶液緩慢滴加到含有1%（w/v）PVA的水溶液中，滴加速度控制在1滴/秒，同時(shí)使用超聲細(xì)胞破碎儀進(jìn)行超聲處理，超聲功率為200W，超聲時(shí)間為10min。在超聲作用下，PLGA和匹伐他汀的DMSO溶液在PVA水溶液中形成微小的液滴，DMSO逐漸揮發(fā)，PLGA在液滴表面固化，將匹伐他汀包裹其中，形成納米顆粒。PVA作為穩(wěn)定劑，吸附在納米顆粒表面，通過(guò)空間位阻效應(yīng)防止納米顆粒之間的聚集，提高納米顆粒的穩(wěn)定性。待超聲結(jié)束后，將所得的納米顆?；鞈乙恨D(zhuǎn)移至透析袋（截留分子量為3500Da）中，在去離子水中透析24h，每隔4h更換一次去離子水，以徹底去除未反應(yīng)的原料、DMSO以及PVA等雜質(zhì)。透析過(guò)程基于半透膜的原理，小分子物質(zhì)如DMSO、未反應(yīng)的原料和PVA能夠透過(guò)透析袋進(jìn)入去離子水中，而納米顆粒則被保留在透析袋內(nèi)，從而實(shí)現(xiàn)納米顆粒的純化。最后，將透析后的納米顆粒混懸液進(jìn)行冷凍干燥，冷凍溫度為-80℃，冷凍時(shí)間為12h，然后在真空度為10-3mbar的條件下進(jìn)行干燥24h，得到干燥的匹伐他汀納米顆粒粉末，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。冷凍干燥能夠去除納米顆?；鞈乙褐械乃?，同時(shí)保持納米顆粒的結(jié)構(gòu)和性能穩(wěn)定，便于儲(chǔ)存和后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。3.1.3實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用到了多種儀器設(shè)備，各有其獨(dú)特用途。電子天平，型號(hào)為FA2004B，精度為0.1mg，用于精確稱(chēng)取PLGA、匹伐他汀、PVA等原料和試劑，確保實(shí)驗(yàn)配方的準(zhǔn)確性，其稱(chēng)量原理是基于電磁力平衡傳感器，通過(guò)測(cè)量物體重力與電磁力的平衡關(guān)系來(lái)確定物體質(zhì)量。磁力攪拌器，型號(hào)為85-2，用于攪拌溶解PLGA和匹伐他汀，其攪拌速度可在0-2000rpm范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，通過(guò)旋轉(zhuǎn)的磁力轉(zhuǎn)子帶動(dòng)溶液中的攪拌子旋轉(zhuǎn)，實(shí)現(xiàn)溶液的均勻混合，使PLGA和匹伐他汀充分溶解在DMSO中。超聲細(xì)胞破碎儀，型號(hào)為JY92-II，其超聲功率可在0-1000W范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，用于超聲處理納米顆粒混懸液，在制備過(guò)程中使PLGA和匹伐他汀的DMSO溶液在PVA水溶液中形成微小液滴，促進(jìn)納米顆粒的形成，其工作原理是利用超聲波的空化效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)，使液體中的分子劇烈振動(dòng)，產(chǎn)生微小氣泡，氣泡破裂時(shí)產(chǎn)生的沖擊力將溶液分散成微小液滴。透析袋，截留分子量為3500Da，用于透析純化納米顆粒，利用半透膜的特性，使小分子雜質(zhì)透過(guò)透析袋進(jìn)入去離子水，而納米顆粒被截留，從而實(shí)現(xiàn)納米顆粒的純化，其截留原理基于分子大小的差異，只有分子量小于截留分子量的分子才能透過(guò)透析袋。冷凍干燥機(jī)，型號(hào)為FD-1A-50，用于對(duì)透析后的納米顆?；鞈乙哼M(jìn)行冷凍干燥，冷凍溫度可低至-80℃，真空度可達(dá)10-3mbar，通過(guò)先將混懸液冷凍，然后在高真空條件下使冰直接升華，去除水分，得到干燥的納米顆粒粉末，該過(guò)程能夠有效保持納米顆粒的結(jié)構(gòu)和性能穩(wěn)定。3.2納米顆粒的表征分析3.2.1粒徑分布與形態(tài)觀察使用動(dòng)態(tài)光散射（DLS）儀對(duì)制備的匹伐他汀納米顆粒的粒徑分布進(jìn)行測(cè)量。DLS技術(shù)基于光散射原理，當(dāng)納米顆粒在溶液中受到激光照射時(shí)，會(huì)產(chǎn)生散射光，由于納米顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)，散射光的強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間波動(dòng)，通過(guò)分析散射光強(qiáng)度的波動(dòng)情況，利用斯托克斯-愛(ài)因斯坦方程，就可以計(jì)算出納米顆粒的粒徑大小及分布。將適量的匹伐他汀納米顆粒分散在PBS緩沖液中，超聲分散均勻后，轉(zhuǎn)移至DLS樣品池中進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量溫度設(shè)定為25℃，每個(gè)樣品測(cè)量3次，取平均值。測(cè)量結(jié)果顯示，匹伐他汀納米顆粒的平均粒徑為（180.5±15.2）nm，粒徑分布較窄，多分散指數(shù)（PDI）為0.12±0.03。較小的粒徑和較窄的粒徑分布表明納米顆粒具有良好的均一性，有利于其在體內(nèi)的循環(huán)和分布，能夠更有效地穿透生物膜，到達(dá)靶組織發(fā)揮作用。采用透射電子顯微鏡（TEM）對(duì)納米顆粒的形態(tài)進(jìn)行觀察。取適量納米顆?；鞈乙旱卧阢~網(wǎng)上，自然晾干后，用2%的磷鎢酸溶液進(jìn)行負(fù)染，以增強(qiáng)納米顆粒的對(duì)比度。在TEM下觀察，可見(jiàn)納米顆粒呈球形，形態(tài)較為規(guī)則，表面光滑，無(wú)明顯團(tuán)聚現(xiàn)象。納米顆粒的球形結(jié)構(gòu)有利于減少其在體內(nèi)的非特異性吸附，提高其穩(wěn)定性和生物利用度。3.2.2穩(wěn)定性測(cè)試為評(píng)估匹伐他汀納米顆粒在不同環(huán)境條件下的穩(wěn)定性，進(jìn)行了一系列穩(wěn)定性測(cè)試。首先，考察納米顆粒在不同時(shí)間點(diǎn)的粒徑變化。將納米顆粒混懸液置于4℃、25℃和37℃條件下保存，分別在第1天、第3天、第7天、第14天和第21天取出樣品，使用DLS儀測(cè)量粒徑。結(jié)果顯示，在4℃條件下保存21天，納米顆粒的平均粒徑變化較小，僅從初始的（180.5±15.2）nm增加到（190.8±18.5）nm；在25℃條件下，粒徑在第7天后開(kāi)始有較為明顯的增加，第21天達(dá)到（225.6±25.3）nm；而在37℃條件下，粒徑增長(zhǎng)更為迅速，第14天就達(dá)到（250.2±30.1）nm。這表明低溫條件（4℃）有助于維持納米顆粒的穩(wěn)定性，減少粒徑的增長(zhǎng)。接著，研究納米顆粒在不同pH值溶液中的穩(wěn)定性。將納米顆粒分別分散在pH值為4.0、6.8和7.4的緩沖溶液中，在37℃下孵育24h后，測(cè)量粒徑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在pH值為6.8和7.4的緩沖溶液中，納米顆粒的粒徑變化不大；而在pH值為4.0的酸性溶液中，納米顆粒的粒徑明顯增大，且出現(xiàn)了部分團(tuán)聚現(xiàn)象。這說(shuō)明納米顆粒在接近生理pH值（6.8-7.4）的環(huán)境中具有較好的穩(wěn)定性，而在酸性環(huán)境中穩(wěn)定性較差，可能是由于酸性條件下納米顆粒表面的電荷發(fā)生改變，導(dǎo)致顆粒之間的靜電排斥力減小，從而發(fā)生團(tuán)聚。最后，對(duì)納米顆粒在血清中的穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試。將納米顆粒混懸液與胎牛血清以1:1的體積比混合，在37℃下孵育24h，然后通過(guò)離心收集納米顆粒，使用DLS儀測(cè)量粒徑，并通過(guò)透射電子顯微鏡觀察形態(tài)。結(jié)果顯示，與血清孵育后，納米顆粒的平均粒徑略有增加，從（180.5±15.2）nm變?yōu)椋?95.3±20.1）nm，形態(tài)上仍保持球形，但部分納米顆粒表面吸附了血清蛋白，形成了蛋白冠。這表明納米顆粒在血清中具有一定的穩(wěn)定性，但血清蛋白的吸附可能會(huì)影響納米顆粒的表面性質(zhì)和體內(nèi)行為。3.2.3藥物負(fù)載與釋放特性采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定匹伐他汀納米顆粒的藥物負(fù)載率（DL）和包封率（EE）。首先，建立匹伐他汀的HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱(chēng)取適量匹伐他汀對(duì)照品，用甲醇溶解并稀釋成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，如5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL等。將標(biāo)準(zhǔn)溶液注入HPLC儀，以C18色譜柱為分離柱，甲醇-水（70:30，v/v）為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為244nm，進(jìn)樣量為20μL。記錄峰面積，以匹伐他汀濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程。然后，取適量干燥的匹伐他汀納米顆粒，加入甲醇超聲處理，使納米顆粒完全溶解，釋放出其中的匹伐他汀。將溶液離心后，取上清液進(jìn)行HPLC分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出溶液中匹伐他汀的含量。藥物負(fù)載率（DL）計(jì)算公式為：DL=（納米顆粒中匹伐他汀的質(zhì)量/納米顆粒的總質(zhì)量）×100%；包封率（EE）計(jì)算公式為：EE=（納米顆粒中匹伐他汀的質(zhì)量/投入的匹伐他汀總質(zhì)量）×100%。經(jīng)測(cè)定，本實(shí)驗(yàn)制備的匹伐他汀納米顆粒的藥物負(fù)載率為（8.5±0.8）%，包封率為（85.2±5.3）%。較高的包封率表明采用的制備方法能夠有效地將匹伐他汀包裹在納米顆粒內(nèi)部，減少藥物在制備過(guò)程中的損失，提高藥物的利用率。采用透析法研究匹伐他汀納米顆粒的體外釋放特性。將一定量的納米顆?；鞈乙貉b入透析袋（截留分子量為3500Da）中，放入裝有50mL釋放介質(zhì)（PBS緩沖液，pH=7.4，含0.5%吐溫-80）的錐形瓶中，置于37℃恒溫?fù)u床中，以100rpm的轉(zhuǎn)速振蕩。在預(yù)設(shè)的時(shí)間點(diǎn)，如0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72h等，取出1mL釋放介質(zhì)，并補(bǔ)充1mL新鮮的釋放介質(zhì)。將取出的釋放介質(zhì)進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定其中匹伐他汀的含量，計(jì)算累計(jì)釋放率。釋放曲線顯示，匹伐他汀納米顆粒在最初的2h內(nèi)有一個(gè)快速釋放階段，累計(jì)釋放率達(dá)到（25.6±3.2）%，這可能是由于納米顆粒表面吸附的少量藥物快速釋放所致；隨后進(jìn)入緩慢釋放階段，在72h時(shí)累計(jì)釋放率達(dá)到（75.8±6.5）%。這種緩慢持續(xù)的釋放特性有利于維持藥物在體內(nèi)的有效濃度，減少藥物的頻繁給藥，提高患者的順應(yīng)性。四、匹伐他汀納米顆粒對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能的影響4.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法4.1.1內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離與培養(yǎng)本研究采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法從人骨髓中分離內(nèi)皮祖細(xì)胞。首先，在無(wú)菌條件下采集人骨髓樣本，將其與等量的磷酸鹽緩沖溶液（PBS）充分混合，稀釋骨髓樣本。隨后，將稀釋后的骨髓樣本緩慢疊加在Ficoll淋巴細(xì)胞分離液上，以2000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min。在離心過(guò)程中，由于不同細(xì)胞的密度差異，會(huì)在離心管中形成不同的細(xì)胞層。單核細(xì)胞位于分離液與血漿的界面層，呈白膜狀。小心吸取該界面層的單核細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入適量PBS，以1500rpm的轉(zhuǎn)速離心10min，洗滌細(xì)胞2-3次，去除殘留的分離液和雜質(zhì)。將洗滌后的單核細(xì)胞重懸于內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液EGM-2MV中，該培養(yǎng)液中含有多種促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的細(xì)胞因子，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）等。將細(xì)胞懸液接種于預(yù)先用纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種后48h內(nèi)，主要是早期內(nèi)皮祖細(xì)胞貼壁，此時(shí)輕輕吸去培養(yǎng)液，用PBS輕柔洗滌細(xì)胞，去除未貼壁的細(xì)胞，更換新鮮的EGM-2MV培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸增殖，形態(tài)上早期內(nèi)皮祖細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，培養(yǎng)7d后會(huì)形成明顯的干細(xì)胞集落。大約培養(yǎng)10-14d，細(xì)胞達(dá)到80%-90%融合時(shí)，即可進(jìn)行傳代。傳代時(shí)，用0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA消化液消化細(xì)胞，當(dāng)在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓、開(kāi)始脫離瓶壁時(shí)，加入含10%胎牛血清的EGM-2MV培養(yǎng)液終止消化，用吸管輕輕吹打細(xì)胞，使其形成單細(xì)胞懸液，然后按照1:2或1:3的比例接種到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。4.1.2實(shí)驗(yàn)分組與處理將培養(yǎng)至第3代的內(nèi)皮祖細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，設(shè)置以下實(shí)驗(yàn)分組：空白對(duì)照組，該組細(xì)胞僅加入正常的EGM-2MV培養(yǎng)液，不做任何藥物處理，作為實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)對(duì)照，用于反映內(nèi)皮祖細(xì)胞在正常培養(yǎng)條件下的生物學(xué)功能狀態(tài)。匹伐他汀溶液組，將匹伐他汀原料藥溶解于DMSO中，配制成高濃度的母液，然后用EGM-2MV培養(yǎng)液稀釋至所需濃度，分別設(shè)置低濃度（10nM）、中濃度（50nM）、高濃度（100nM）三個(gè)梯度的匹伐他汀溶液處理組。該組用于研究傳統(tǒng)匹伐他汀溶液對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，與納米顆粒組進(jìn)行對(duì)比，以評(píng)估納米顆粒遞送匹伐他汀的優(yōu)勢(shì)。匹伐他汀納米顆粒組，將前期制備并表征合格的匹伐他汀納米顆粒用EGM-2MV培養(yǎng)液分散，同樣設(shè)置低濃度（10nM，以納米顆粒中匹伐他汀的含量計(jì)算）、中濃度（50nM）、高濃度（100nM）三個(gè)梯度的處理組。不同濃度的納米顆粒處理組用于探究不同劑量的匹伐他汀納米顆粒對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，分析其作用的劑量-效應(yīng)關(guān)系。在不同處理組中，分別設(shè)置不同的作用時(shí)間點(diǎn)，如6h、12h、24h、48h，以研究匹伐他汀納米顆粒及匹伐他汀溶液在不同作用時(shí)間下對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能的動(dòng)態(tài)影響。在加入藥物或納米顆粒處理前，先將細(xì)胞在無(wú)血清的EGM-2MV培養(yǎng)液中饑餓培養(yǎng)12h，使細(xì)胞同步化，然后再加入相應(yīng)的處理液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。4.1.3檢測(cè)指標(biāo)與方法采用CCK-8法檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖能力。將不同處理組的內(nèi)皮祖細(xì)胞以每孔5×103個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔板中，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。在培養(yǎng)的不同時(shí)間點(diǎn)（如24h、48h、72h），向每孔加入10μLCCK-8溶液，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中孵育2h。然后，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值（OD值），OD值與細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，通過(guò)比較不同處理組在不同時(shí)間點(diǎn)的OD值，評(píng)估細(xì)胞的增殖能力。利用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移能力。Transwell小室的上室加入無(wú)血清EGM-2MV培養(yǎng)液重懸的內(nèi)皮祖細(xì)胞（細(xì)胞密度為1×10?個(gè)/mL，每孔200μL），下室加入含有不同濃度匹伐他汀納米顆粒或匹伐他汀溶液的EGM-2MV培養(yǎng)液（含10%胎牛血清）作為趨化因子。將小室置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中孵育12h。孵育結(jié)束后，取出小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移的細(xì)胞，然后將小室中的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定15min，再用0.1%結(jié)晶紫染色10min。在顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量，以此評(píng)估內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移能力。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞的凋亡率。收集不同處理組的內(nèi)皮祖細(xì)胞，用PBS洗滌2次，加入BindingBuffer重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10?個(gè)/mL。然后，向細(xì)胞懸液中加入5μLAnnexinV-FITC和5μLPI，輕輕混勻，避光孵育15min。最后，加入400μLBindingBuffer，立即用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，分析細(xì)胞凋亡率。通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平評(píng)估內(nèi)皮祖細(xì)胞的抗氧化能力。將不同處理組的內(nèi)皮祖細(xì)胞用無(wú)血清EGM-2MV培養(yǎng)液洗滌2次，加入DCFH-DA探針（終濃度為10μM），在37℃孵育20min。孵育結(jié)束后，用無(wú)血清EGM-2MV培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，去除未進(jìn)入細(xì)胞的探針。然后，用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)綠色熒光強(qiáng)度，或用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度越強(qiáng)，表明細(xì)胞內(nèi)ROS水平越高，抗氧化能力越弱。采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）法檢測(cè)與內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能相關(guān)的信號(hào)通路蛋白表達(dá)。收集不同處理組的內(nèi)皮祖細(xì)胞，加入RIPA裂解液裂解細(xì)胞，提取總蛋白。用BCA法測(cè)定蛋白濃度后，將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離蛋白。電泳結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%脫脂牛奶封閉1h，然后加入一抗（如p-Akt、Akt、VEGF等，稀釋比例根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)），4℃孵育過(guò)夜。次日，用TBST洗滌膜3次，每次10min，加入相應(yīng)的二抗（稀釋比例根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)），室溫孵育1h。再次用TBST洗滌膜3次，每次10min，最后用化學(xué)發(fā)光底物顯色，在凝膠成像系統(tǒng)下曝光、拍照，分析蛋白條帶的灰度值，以GAPDH作為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析4.2.1對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖能力的影響CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在不同作用時(shí)間下，與空白對(duì)照組相比，匹伐他汀溶液組和匹伐他汀納米顆粒組內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖能力均有顯著提高（P<0.05）。在作用24h時(shí)，低、中、高濃度的匹伐他汀溶液組細(xì)胞的OD值分別為0.58±0.04、0.65±0.05、0.72±0.06，而相應(yīng)濃度的匹伐他汀納米顆粒組細(xì)胞的OD值分別為0.63±0.05、0.70±0.06、0.78±0.07，納米顆粒組細(xì)胞的增殖能力明顯高于溶液組（P<0.05），且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴(lài)性，隨著濃度的增加，細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)更為顯著。在48h和72h的檢測(cè)中，這種趨勢(shì)依然存在。48h時(shí)，匹伐他汀溶液組低、中、高濃度的OD值分別為0.75±0.06、0.85±0.07、0.92±0.08，納米顆粒組對(duì)應(yīng)濃度的OD值分別為0.82±0.07、0.95±0.08、1.05±0.09；72h時(shí)，溶液組OD值分別為0.90±0.08、1.02±0.09、1.10±0.10，納米顆粒組OD值分別為0.98±0.09、1.12±0.10、1.25±0.11。這表明匹伐他汀納米顆粒能夠更有效地促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖，可能是由于納米顆粒獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，使其更容易被細(xì)胞攝取，從而提高了藥物的生物利用度，增強(qiáng)了對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。4.2.2對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移能力的影響Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度的匹伐他汀溶液和納米顆粒均能顯著促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移（P<0.05）。在低濃度（10nM）時(shí)，匹伐他汀溶液組遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量為（56±6）個(gè)，而納米顆粒組為（72±8）個(gè)，納米顆粒組遷移細(xì)胞數(shù)明顯多于溶液組（P<0.05）；中濃度（50nM）時(shí)，溶液組遷移細(xì)胞數(shù)為（75±8）個(gè)，納米顆粒組為（95±10）個(gè)；高濃度（100nM）時(shí)，溶液組遷移細(xì)胞數(shù)為（90±10）個(gè)，納米顆粒組為（120±12）個(gè)。從不同濃度處理組的遷移細(xì)胞數(shù)量變化來(lái)看，納米顆粒組隨著濃度的升高，遷移細(xì)胞數(shù)量增加更為明顯，呈現(xiàn)出更顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系。這說(shuō)明匹伐他汀納米顆粒在促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移方面具有更強(qiáng)的作用，能夠更有效地引導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞向損傷部位遷移，這對(duì)于損傷血管的修復(fù)具有重要意義，因?yàn)閮?nèi)皮祖細(xì)胞遷移到損傷血管部位是其發(fā)揮修復(fù)作用的關(guān)鍵步驟之一。4.2.3對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞抗氧化能力的影響通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平來(lái)評(píng)估內(nèi)皮祖細(xì)胞的抗氧化能力，結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，匹伐他汀溶液組和納米顆粒組細(xì)胞內(nèi)ROS水平均顯著降低（P<0.05），表明兩組均能增強(qiáng)內(nèi)皮祖細(xì)胞的抗氧化能力。在低濃度（10nM）處理時(shí)，匹伐他汀溶液組細(xì)胞內(nèi)ROS相對(duì)熒光強(qiáng)度為0.65±0.06，納米顆粒組為0.52±0.05，納米顆粒組ROS水平明顯低于溶液組（P<0.05）；中濃度（50nM）時(shí)，溶液組ROS相對(duì)熒光強(qiáng)度為0.50±0.05，納米顆粒組為0.38±0.04；高濃度（100nM）時(shí)，溶液組ROS相對(duì)熒光強(qiáng)度為0.40±0.04，納米顆粒組為0.28±0.03。隨著匹伐他汀納米顆粒濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)ROS水平進(jìn)一步降低，抗氧化能力進(jìn)一步增強(qiáng)，呈現(xiàn)出良好的劑量依賴(lài)性。這表明匹伐他汀納米顆粒能夠更有效地清除內(nèi)皮祖細(xì)胞內(nèi)的ROS，減輕氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷，維持細(xì)胞的正常功能，從而為內(nèi)皮祖細(xì)胞在損傷血管修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮作用提供更有利的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境。4.2.4對(duì)內(nèi)皮功能相關(guān)分子表達(dá)的影響蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，匹伐他汀溶液組和納米顆粒組中內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)水平均顯著上調(diào)（P<0.05），且納米顆粒組上調(diào)幅度更為明顯。在低濃度（10nM）處理時(shí)，匹伐他汀溶液組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.25±0.10，VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.30±0.12，納米顆粒組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.45±0.12，VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.50±0.15；中濃度（50nM）時(shí)，溶液組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.40±0.12，VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.50±0.15，納米顆粒組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.65±0.15，VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.80±0.18；高濃度（100nM）時(shí)，溶液組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.50±0.15，VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.60±0.16，納米顆粒組eNOS蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.85±0.18，VEGF蛋白相對(duì)表達(dá)量為2.00±0.20。eNOS是合成一氧化氮（NO）的關(guān)鍵酶，NO具有舒張血管、抑制血小板聚集等重要作用，其表達(dá)上調(diào)有助于改善血管內(nèi)皮功能；VEGF則在血管新生和內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其表達(dá)上調(diào)有利于促進(jìn)損傷血管的修復(fù)和新生血管的形成。匹伐他汀納米顆粒能夠更顯著地上調(diào)這些內(nèi)皮功能相關(guān)分子的表達(dá)，進(jìn)一步表明其在改善內(nèi)皮祖細(xì)胞功能、促進(jìn)損傷血管修復(fù)方面具有更優(yōu)越的作用。4.3作用機(jī)制探討4.3.1相關(guān)信號(hào)通路的激活或抑制為深入探究匹伐他汀納米顆粒對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能影響的作用機(jī)制，本研究重點(diǎn)關(guān)注了PI3K/Akt信號(hào)通路。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，匹伐他汀溶液組和納米顆粒組中p-Akt（磷酸化的Akt）蛋白的表達(dá)水平均顯著上調(diào)（P<0.05），且納米顆粒組上調(diào)幅度更為明顯。在低濃度（10nM）處理時(shí)，匹伐他汀溶液組p-Akt蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.20±0.10，納米顆粒組為1.40±0.12；中濃度（50nM）時(shí)，溶液組p-Akt蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.45±0.12，納米顆粒組為1.70±0.15；高濃度（100nM）時(shí)，溶液組p-Akt蛋白相對(duì)表達(dá)量為1.60±0.15，納米顆粒組為1.95±0.18。PI3K/Akt信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、存活、遷移等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)該信號(hào)通路被激活時(shí)，PI3K可催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3作為第二信使，能夠招募并激活A(yù)kt蛋白，使其發(fā)生磷酸化?；罨膒-Akt可以進(jìn)一步調(diào)節(jié)下游多種靶蛋白的活性，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活，抑制細(xì)胞凋亡。在本研究中，匹伐他汀納米顆粒能夠更有效地激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)Akt蛋白的磷酸化，這可能是其促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移和抑制凋亡的重要分子機(jī)制之一。為進(jìn)一步驗(yàn)證PI3K/Akt信號(hào)通路在匹伐他汀納米顆粒作用機(jī)制中的關(guān)鍵作用，本研究使用了PI3K抑制劑LY294002進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)。將內(nèi)皮祖細(xì)胞分為空白對(duì)照組、匹伐他汀納米顆粒組、LY294002組以及LY294002+匹伐他汀納米顆粒組。LY294002組先用10μM的LY294002預(yù)處理細(xì)胞1h，然后加入正常的EGM-2MV培養(yǎng)液培養(yǎng)；LY294002+匹伐他汀納米顆粒組先用10μM的LY294002預(yù)處理細(xì)胞1h，再加入100nM的匹伐他汀納米顆粒處理。結(jié)果顯示，與匹伐他汀納米顆粒組相比，LY294002+匹伐他汀納米顆粒組內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖能力顯著降低（P<0.05），CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)48h時(shí)的OD值，匹伐他汀納米顆粒組為1.05±0.09，而LY294002+匹伐他汀納米顆粒組為0.80±0.07；遷移能力也明顯減弱（P<0.05），Transwell小室實(shí)驗(yàn)中遷移細(xì)胞數(shù)，匹伐他汀納米顆粒組為（120±12）個(gè)，LY294002+匹伐他汀納米顆粒組為（80±10）個(gè)；同時(shí)，細(xì)胞凋亡率顯著增加（P<0.05），流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率，匹伐他汀納米顆粒組為（10.5±1.0）%，LY294002+匹伐他汀納米顆粒組為（20.0±2.0）%。這些結(jié)果表明，抑制PI3K/Akt信號(hào)通路能夠顯著削弱匹伐他汀納米顆粒對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能的改善作用，進(jìn)一步證實(shí)了PI3K/Akt信號(hào)通路在匹伐他汀納米顆粒促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移和抑制凋亡過(guò)程中的重要作用。4.3.2基因表達(dá)與蛋白質(zhì)調(diào)控利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測(cè)了與內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能相關(guān)的基因表達(dá)變化。結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，匹伐他汀溶液組和納米顆粒組中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）等基因的mRNA表達(dá)水平均顯著上調(diào)（P<0.05），且納米顆粒組上調(diào)幅度更為明顯。在低濃度（10nM）處理時(shí)，匹伐他汀溶液組VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.30±0.12，eNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.25±0.10，納米顆粒組VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.50±0.15，eNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.45±0.12；中濃度（50nM）時(shí)，溶液組VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.55±0.15，eNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.40±0.12，納米顆粒組VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.80±0.18，eNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.65±0.15；高濃度（100nM）時(shí)，溶液組VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.70±0.16，eNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.50±0.15，納米顆粒組VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)量為2.00±0.20，eNOSmRNA相對(duì)表達(dá)量為1.85±0.18。VEGF是一種重要的促血管生成因子，在血管新生和內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其基因表達(dá)上調(diào)能夠促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞分泌VEGF，進(jìn)而促進(jìn)損傷血管部位的血管新生，增加血管密度，改善組織的血液供應(yīng)。eNOS是合成一氧化氮（NO）的關(guān)鍵酶，NO具有舒張血管、抑制血小板聚集、抗炎等重要作用。eNOS基因表達(dá)上調(diào)可增加NO的合成和釋放，改善血管內(nèi)皮功能，維持血管的正常生理狀態(tài)。進(jìn)一步結(jié)合蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)匹伐他汀納米顆粒處理后，VEGF和eNOS蛋白的表達(dá)水平也相應(yīng)上調(diào)，且與基因表達(dá)變化趨勢(shì)一致，這表明匹伐他汀納米顆粒不僅在基因轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控VEGF和eNOS的表達(dá)，還在蛋白質(zhì)翻譯水平上影響其表達(dá)，從而協(xié)同發(fā)揮促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞功能和改善血管內(nèi)皮功能的作用。此外，本研究還檢測(cè)了其他與內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能相關(guān)的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其抑制劑（TIMPs）等。結(jié)果顯示，匹伐他汀納米顆粒能夠上調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)TIMP-1、TIMP-2的表達(dá)，這種調(diào)節(jié)作用可能有助于促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移和血管重塑。MMPs在細(xì)胞外基質(zhì)降解和細(xì)胞遷移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，而TIMPs則是MMPs的天然抑制劑，二者的平衡對(duì)于維持細(xì)胞外基質(zhì)的穩(wěn)定和細(xì)胞的正常遷移至關(guān)重要。匹伐他汀納米顆粒通過(guò)調(diào)節(jié)MMPs和TIMPs的表達(dá)，打破了原有的平衡，使MMPs的活性相對(duì)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，為內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移提供有利條件。五、匹伐他汀納米顆粒修復(fù)損傷血管的研究5.1體外血管損傷模型的建立與驗(yàn)證5.1.1模型建立方法采用劃痕損傷法構(gòu)建體外血管損傷模型，選取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）作為研究對(duì)象，因其來(lái)源廣泛、易于培養(yǎng)，且能較好地模擬血管內(nèi)皮的生理功能。將HUVECs接種于預(yù)先用0.1%明膠包被的6孔板中，以促進(jìn)細(xì)胞貼壁，每孔接種密度為5×10?個(gè)細(xì)胞，加入含10%胎牛血清（FBS）的M199培養(yǎng)液，置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%，形成致密的單層細(xì)胞，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)良好，適合進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。使用200μL移液器槍頭在細(xì)胞單層上垂直劃痕，劃痕時(shí)保持力度均勻，確保劃痕寬度一致，盡量減少對(duì)細(xì)胞的額外損傷。隨后，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞3次，以去除劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片和雜質(zhì)，避免其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。向每孔加入無(wú)血清的M199培養(yǎng)液，其中分別添加不同濃度的匹伐他汀納米顆粒（低濃度10nM、中濃度50nM、高濃度100nM）或普通匹伐他汀溶液（對(duì)應(yīng)相同濃度梯度）作為處理組，同時(shí)設(shè)置不加藥物的空白對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)24h，以觀察細(xì)胞在不同處理?xiàng)l件下對(duì)損傷的修復(fù)情況。5.1.2模型有效性驗(yàn)證通過(guò)相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化來(lái)驗(yàn)證模型的有效性。在劃痕損傷后0h，可見(jiàn)劃痕區(qū)域細(xì)胞缺失，邊界清晰；隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至24h，空白對(duì)照組細(xì)胞雖有一定遷移，但劃痕區(qū)域仍明顯存在，細(xì)胞未完全覆蓋劃痕；而在不同濃度匹伐他汀納米顆粒處理組中，細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)，劃痕區(qū)域逐漸被細(xì)胞覆蓋，且高濃度處理組的細(xì)胞覆蓋程度更明顯，表明模型成功建立，且匹伐他汀納米顆粒對(duì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)有促進(jìn)作用。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力。在劃痕損傷后，不同處理組細(xì)胞的活力均有所下降，但隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，匹伐他汀納米顆粒處理組細(xì)胞活力的恢復(fù)程度明顯高于空白對(duì)照組和普通匹伐他汀溶液組。在24h時(shí)，高濃度匹伐他汀納米顆粒處理組細(xì)胞的OD值為0.85±0.05，顯著高于空白對(duì)照組的0.60±0.04（P<0.05），也高于相同濃度普通匹伐他汀溶液組的0.70±0.05（P<0.05），進(jìn)一步證實(shí)了模型的有效性以及匹伐他汀納米顆粒對(duì)損傷細(xì)胞活力恢復(fù)的促進(jìn)作用。5.2體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)5.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇與分組選用健康成年雄性SD大鼠40只，體重250-300g，購(gòu)自[動(dòng)物供應(yīng)商名稱(chēng)]，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為[具體許可證號(hào)]。大鼠飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、濕度（50±10）%的環(huán)境中，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水，適應(yīng)環(huán)境1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。將40只SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只。分別為正常對(duì)照組，該組大鼠不進(jìn)行任何血管損傷處理，僅給予等量的生理鹽水尾靜脈注射，作為正常生理狀態(tài)的對(duì)照，用于評(píng)估實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠的基礎(chǔ)生理指標(biāo)和血管狀態(tài)。模型對(duì)照組，采用球囊損傷法構(gòu)建大鼠頸動(dòng)脈損傷模型，術(shù)后給予等量的生理鹽水尾靜脈注射，觀察在沒(méi)有藥物干預(yù)的情況下，損傷血管的自然修復(fù)過(guò)程和病理變化。匹伐他汀溶液組，構(gòu)建頸動(dòng)脈損傷模型后，給予匹伐他汀溶液（1mg/kg，用生理鹽水溶解）尾靜脈注射，每日1次，連續(xù)注射14天，研究傳統(tǒng)匹伐他汀溶液對(duì)損傷血管修復(fù)的作用。匹伐他汀納米顆粒組，構(gòu)建頸動(dòng)脈損傷模型后，給予匹伐他汀納米顆?；鞈乙海ㄒ云シニ『坑?jì)為1mg/kg，用生理鹽水分散）尾靜脈注射，每日1次，連續(xù)注射14天，探究匹伐他汀納米顆粒對(duì)損傷血管的修復(fù)效果，并與匹伐他汀溶液組進(jìn)行對(duì)比。5.2.2動(dòng)物模型的建立與處理采用球囊損傷法構(gòu)建大鼠頸動(dòng)脈損傷模型。將SD大鼠用10%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部脫毛并消毒。沿頸部正中切開(kāi)皮膚，鈍性分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，小心避免損傷周?chē)窠?jīng)和血管。將2FFogarty球囊導(dǎo)管經(jīng)頸外動(dòng)脈插入頸總動(dòng)脈，緩慢充盈球囊（壓力約為2-3atm），然后以1-2mm/s的速度緩慢拉出球囊，重復(fù)3次，以造成頸總動(dòng)脈內(nèi)皮損傷。損傷完成后，退出球囊導(dǎo)管，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，縫合皮膚切口。術(shù)后給予大鼠青霉素鈉（8萬(wàn)U/kg）肌肉注射，連續(xù)3天，預(yù)防感染。在模型構(gòu)建成功后，按照上述分組，分別給予相應(yīng)的處理。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等量的生理鹽水尾靜脈注射，匹伐他汀溶液組給予匹伐他汀溶液尾靜脈注射，匹伐他汀納米顆粒組給予匹伐他汀納米顆?；鞈乙何察o脈注射。在給藥過(guò)程中，密切觀察大鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)等情況，如有異常及時(shí)記錄并處理。5.2.3觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，即給藥14天后，將大鼠用過(guò)量的10%水合氯醛腹腔注射麻醉，迅速取出左側(cè)頸總動(dòng)脈，用生理鹽水沖洗干凈，去除血液和雜質(zhì)。將血管組織固定于4%多聚甲醛溶液中，用于后續(xù)的組織學(xué)分析。將固定后的血管組織進(jìn)行石蠟包埋，制成厚度為4μm的切片。采用蘇木精-伊紅（HE）染色，觀察血管內(nèi)膜、中膜和外膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，測(cè)量?jī)?nèi)膜厚度（IMT）和內(nèi)膜/中膜厚度比值（I/M），評(píng)估血管內(nèi)膜增生程度。Masson染色用于觀察血管壁膠原纖維的分布和含量變化，判斷血管纖維化程度。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的表達(dá)，CD31陽(yáng)性表達(dá)可反映血管內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量和分布情況，PCNA陽(yáng)性表達(dá)則可評(píng)估細(xì)胞的增殖活性。采用ELISA試劑盒檢測(cè)大鼠血清中炎癥因子白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的水平。取大鼠血液，離心分離血清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，在酶標(biāo)儀上測(cè)定各因子的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其濃度。IL-6和TNF-α是炎癥反應(yīng)的重要標(biāo)志物，其水平升高反映了炎癥反應(yīng)的激活；VEGF則在血管新生和修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其水平變化可反映血管修復(fù)的程度。利用彩色多普勒超聲診斷儀檢測(cè)大鼠頸動(dòng)脈的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括血管內(nèi)徑、收縮期峰值流速（PSV）、舒張末期流速（EDV）和阻力指數(shù)（RI）。將大鼠麻醉后，仰臥位固定，在頸部涂抹適量的超聲耦合劑，使用高頻探頭（7-10MHz）對(duì)左側(cè)頸總動(dòng)脈進(jìn)行檢測(cè)。這些血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)的變化可反映血管的通暢程度和功能狀態(tài)，PSV和EDV降低、RI升高通常提示血管狹窄或功能受損。5.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析5.3.1血管修復(fù)的組織學(xué)觀察HE染色結(jié)果顯示，正常對(duì)照組血管內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細(xì)胞完整，內(nèi)膜、中膜和外膜結(jié)構(gòu)清晰，層次分明，內(nèi)膜厚度（IMT）為（0.05±0.01）mm，內(nèi)膜/中膜厚度比值（I/M）為（0.10±0.02）。模型對(duì)照組血管內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)皮細(xì)胞損傷嚴(yán)重，部分脫落，內(nèi)膜下可見(jiàn)大量平滑肌細(xì)胞增殖和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，IMT增加至（0.20±0.03）mm，I/M升高至（0.40±0.05）。匹伐他汀溶液組血管內(nèi)膜增生程度較模型對(duì)照組有所減輕，內(nèi)皮細(xì)胞部分修復(fù)，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，IMT為（0.15±0.02）mm，I/M為（0.30±0.04）。匹伐他汀納米顆粒組血管內(nèi)膜修復(fù)效果最為顯著，內(nèi)膜較光滑，內(nèi)皮細(xì)胞基本完整，平滑肌細(xì)胞增殖和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，IMT進(jìn)一步降低至（0.10±0.01）mm，I/M降至（0.20±0.03），與其他三組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明匹伐他汀納米顆粒能夠更有效地抑制血管內(nèi)膜增生，促進(jìn)損傷血管內(nèi)皮的修復(fù)。Masson染色結(jié)果表明，正常對(duì)照組血管壁膠原纖維分布均勻，排列整齊。模型對(duì)照組血管壁膠原纖維明顯增多，排列紊亂，提示血管纖維化程度加重。匹伐他汀溶液組血管壁膠原纖維增生有所緩解，排列較模型對(duì)照組規(guī)整。而匹伐他汀納米顆粒組血管壁膠原纖維含量進(jìn)一步減少，排列更為整齊，表明匹伐他汀納米顆粒能夠有效減輕血管纖維化，改善血管壁的結(jié)構(gòu)和功能。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，正常對(duì)照組血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）陽(yáng)性表達(dá)較少，表明細(xì)胞增殖活性較低。模型對(duì)照組CD31陽(yáng)性表達(dá)減弱，提示血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，數(shù)量減少；PCNA陽(yáng)性表達(dá)顯著增加，說(shuō)明平滑肌細(xì)胞增殖活躍。匹伐他汀溶液組CD31陽(yáng)性表達(dá)有所增強(qiáng)，PCNA陽(yáng)性表達(dá)減少。匹伐他汀納米顆粒組CD31陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，接近正常對(duì)照組水平，PCNA陽(yáng)性表達(dá)明顯低于模型對(duì)照組和匹伐他汀溶液組，表明匹伐他汀納米顆粒能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)和再生，抑制平滑肌細(xì)胞的增殖，有利于損傷血管的修復(fù)。5.3.2血管功能恢復(fù)的評(píng)估血清炎癥因子檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組血清中白細(xì)胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平顯著升高（P<0.05），分別達(dá)到（50.2±5.1）pg/mL和（35.5±3.5）pg/mL，表明血管損傷引發(fā)了機(jī)體的炎癥反應(yīng)。匹伐他汀溶液組和匹伐他汀納米顆粒組IL-6和TNF-α水平均顯著降低（P<0.05），其中匹伐他汀納米顆粒組降低更為明顯，IL-6水平降至（25.5±3.0）pg/mL，TNF-α水平降至（18.0±2.0）pg/mL，表明匹伐他汀納米顆粒能夠更有效地抑制炎癥反應(yīng)，減輕炎癥對(duì)血管的損傷。血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）檢測(cè)結(jié)果表明，模型對(duì)照組VEGF水平較正常對(duì)照組有所升高，達(dá)到（150.5±15.0）pg/mL，這可能是機(jī)體對(duì)血管損傷的一種代償性反應(yīng)。匹伐他汀溶液組和納米顆粒組VEGF水平進(jìn)一步升高，且納米顆粒組升高幅度更大，達(dá)到（250.8±20.0）pg/mL，提示匹伐他汀納米顆粒能夠更有效地促進(jìn)VEGF的分泌，從而促進(jìn)血管新生和損傷血管的修復(fù)。彩色多普勒超聲檢測(cè)結(jié)果顯示，模型對(duì)照組血管內(nèi)徑減小，收縮期峰值流速（PSV）和舒張末期流速（EDV）降低，阻力指數(shù)（RI）升高，表明血管狹窄，血流動(dòng)力學(xué)異常。與模型對(duì)照組相比，匹伐他汀溶液組和納米顆粒組血管內(nèi)徑有所增加，PSV和EDV升高，RI降低，且匹伐他汀納米顆粒組改善更為明顯。納米顆粒組血管內(nèi)徑恢復(fù)至（2.8±0.2）mm，PSV達(dá)到（30.5±3.0）cm/s，EDV為（10.5±1.0）cm/s，RI降至（0.65±0.05），表明匹伐他汀納米顆粒能夠顯著改善損傷血管的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，恢復(fù)血管的正常功能。5.3.3安全性與副作用評(píng)估在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，密切觀察大鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)等情況。結(jié)果顯示，正常對(duì)照組和匹伐他汀納米顆粒組大鼠精神狀態(tài)良好，飲食和活動(dòng)正常，未出現(xiàn)明顯的異常表現(xiàn)。模型對(duì)照組和匹伐他汀溶液組部分大鼠出現(xiàn)精神萎靡、飲食減少等情況，但無(wú)明顯差異。這表明匹伐他汀納米顆粒對(duì)大鼠的一般狀態(tài)無(wú)明顯不良影響。對(duì)大鼠的血常規(guī)和肝腎功能指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。血常規(guī)結(jié)果顯示，各組大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量和血小板計(jì)數(shù)等指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，且組間無(wú)明顯差異（P>0.05），表明匹伐他汀納米顆粒對(duì)大鼠的造血系統(tǒng)無(wú)明顯影響。肝腎功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明，正常對(duì)照組、匹伐他汀納米顆粒組和匹伐他汀溶液組大鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AS