pcr培訓考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.PCR反應的基本步驟不包括（）A.變性B.復性C.延伸D.轉錄答案：D2.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化DNA合成D.A和C答案：D3.PCR反應體系中不需要的成分是（）A.模板DNAB.dNTPC.引物D.氨基酸答案：D4.引物設計時，其長度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B5.PCR反應中，變性溫度一般為（）A.55℃B.72℃C.94-95℃D.4℃答案：C6.以下哪種物質可以作為PCR的模板（）A.蛋白質B.多糖C.DNAD.脂肪答案：C7.復性溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃答案：B8.延伸時間主要取決于（）A.模板長度B.引物長度C.Taq酶活性D.dNTP濃度答案：A9.PCR技術的發(fā)明人是（）A.孟德爾B.摩爾根C.穆利斯D.沃森答案：C10.進行PCR實驗時，使用的微量離心管最好是（）A.普通塑料的B.經過滅菌處理的C.隨意的D.玻璃的答案：B二、多項選擇題（每題2分，共20分）1.以下屬于PCR應用領域的有（）A.基因克隆B.疾病診斷C.法醫(yī)鑒定D.物種進化研究答案：ABCD2.PCR反應體系包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP答案：ABCD3.設計引物時需要考慮的因素有（）A.引物長度B.引物的Tm值C.引物的GC含量D.引物的特異性答案：ABCD4.PCR實驗可能出現的問題有（）A.擴增產物條帶模糊B.無擴增產物C.出現非特異性擴增D.擴增產物大小與預期不符答案：ABCD5.提高PCR特異性的方法有（）A.優(yōu)化引物設計B.調整反應條件C.增加模板量D.使用高保真酶答案：ABD6.關于Taq酶，正確的說法是（）A.具有5'→3'聚合酶活性B.具有3'→5'外切酶活性C.擴增效率高D.耐高溫答案：ACD7.PCR反應的循環(huán)次數通常取決于（）A.模板濃度B.引物濃度C.擴增片段長度D.實驗目的答案：ACD8.以下哪些可以作為PCR的模板來源（）A.血液B.組織C.糞便D.口腔黏膜答案：ABCD9.進行PCR實驗時，需要注意的事項有（）A.防止交叉污染B.準確配制反應體系C.控制反應溫度和時間D.正確選擇引物答案：ABCD10.影響PCR擴增效率的因素有（）A.模板質量B.引物質量C.Taq酶活性D.dNTP濃度答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共20分）1.PCR可以擴增任意長度的DNA片段。（）答案：錯誤2.Taq酶沒有3'→5'外切酶活性，所以保真性相對較低。（）答案：正確3.引物的特異性只取決于其長度。（）答案：錯誤4.PCR反應中，復性溫度越高越好。（）答案：錯誤5.模板DNA的純度不影響PCR擴增結果。（）答案：錯誤6.增加dNTP的濃度一定能提高PCR擴增效果。（）答案：錯誤7.PCR技術只能用于擴增已知序列的DNA片段。（）答案：錯誤8.實驗中使用的槍頭可以重復使用。（）答案：錯誤9.PCR反應體系中的緩沖液主要作用是維持反應體系的酸堿度。（）答案：正確10.只要引物設計正確，PCR實驗就一定能成功。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述PCR的基本原理。答案：PCR以模板DNA、引物、dNTP、Taq酶等為原料，經過高溫變性使雙鏈DNA解開為單鏈，低溫復性讓引物與模板結合，中溫延伸由Taq酶催化合成新的DNA鏈，通過多次循環(huán)實現特定DNA片段的大量擴增。2.引物設計的基本原則有哪些？答案：長度15-30bp，GC含量40%-60%，Tm值在55-80℃，上下游引物Tm差值不超過5℃，避免引物自身或引物間形成二級結構，具有特異性，不與非目標序列互補。3.導致PCR出現非特異性擴增的原因有哪些？答案：引物設計不合理，與非目標序列互補；反應條件不當，如復性溫度過低、循環(huán)次數過多；模板復雜或有雜質；Taq酶活性過高或酶量過多等。4.如何保證PCR實驗結果的準確性？答案：優(yōu)化引物設計，保證其特異性；確保模板質量和純度；準確配制反應體系；嚴格控制反應溫度、時間和循環(huán)次數；做好實驗環(huán)境清潔，防止交叉污染。五、討論題（每題5分，共20分）1.在實際PCR實驗中，如果出現無擴增產物的情況，應該從哪些方面進行排查和解決？答案：從模板看，檢查質量、濃度，是否降解；引物方面，確認設計、濃度、是否失效；Taq酶查看活性、量是否足夠；反應條件如溫度、時間、循環(huán)次數是否合適，試劑是否污染等，逐步排查解決。2.討論PCR技術在疾病診斷領域的優(yōu)勢和局限性。答案：優(yōu)勢是靈敏度高、特異性強、快速，能檢測微量病原體。局限性在于易污染出現假陽性，對實驗條件和操作人員要求高，儀器設備較貴，對未知病原體檢測受限。3.請討論如何進一步提高PCR技術的性能，如提高擴增效率和保真性。答案：優(yōu)化引物設計提高特異性，使用高保真酶提高保真性；優(yōu)化反應體系，如調整各成分濃度；改進儀器設備精準控制溫度等條件；采