題目：N末端腦利鈉肽前體測(cè)定試劑盒性能評(píng)價(jià)目錄24012_WPSOffice_Level1中文摘要 4英文14104_WPSOffice_Level1摘要 410992_WPSOffice_Level1前言 622714_WPSOffice_Level11材料 630960_WPSOffice_Level21.1樣本 6772_WPSOffice_Level21.2試劑盒 711858_WPSOffice_Level21.3儀器設(shè)備 729364_WPSOffice_Level12.方法 710715_WPSOffice_Level22.1檢測(cè)原理 712786_WPSOffice_Level22.2性能評(píng)價(jià)方案 88633_WPSOffice_Level32.2.1外觀 818484_WPSOffice_Level32.2.2空白限 82434_WPSOffice_Level32.2.3準(zhǔn)確度 99415_WPSOffice_Level32.2.4線性范圍 932029_WPSOffice_Level32.2.5重復(fù)性 932728_WPSOffice_Level32.2.6穩(wěn)定性 931608_WPSOffice_Level32.2.7抗干擾能力 106451_WPSOffice_Level32.2.8臨床樣本比對(duì) 1016927_WPSOffice_Level13結(jié)果 1025912_WPSOffice_Level13.1外觀 1030146_WPSOffice_Level13.2空白限 107251_WPSOffice_Level13.3準(zhǔn)確度 103842_WPSOffice_Level13.4線性范圍 1130460_WPSOffice_Level13.5重復(fù)性 1225964_WPSOffice_Level13.6穩(wěn)定性 1213241_WPSOffice_Level13.7抗干擾能力 145607_WPSOffice_Level13.8樣本比對(duì) 1431307_WPSOffice_Level24.討論 155580_WPSOffice_Level1結(jié)論 1727889_WPSOffice_Level1參考文獻(xiàn) 178055_WPSOffice_Level1致謝 19306_WPSOffice_Level1誠(chéng)信聲明 19目錄23090_WPSOffice_Level1中文摘要 36018_WPSOffice_Level1英文摘要 36010_WPSOffice_Level1前言 514497_WPSOffice_Level11材料與方法 620246_WPSOffice_Level21.1材料 611183_WPSOffice_Level31.1.1樣本 619689_WPSOffice_Level31.1.2試劑盒 616220_WPSOffice_Level21.2方法 613328_WPSOffice_Level31.2.1檢測(cè)原理 618042_WPSOffice_Level31.2.2性能評(píng)價(jià)方案 732662_WPSOffice_Level12結(jié)果 932105_WPSOffice_Level22.1外觀 923022_WPSOffice_Level22.2空白限 93601_WPSOffice_Level22.3準(zhǔn)確度 929059_WPSOffice_Level22.4線性范圍 1028883_WPSOffice_Level22.5重復(fù)性 1114944_WPSOffice_Level22.6穩(wěn)定性 1131218_WPSOffice_Level22.7抗干擾 1320095_WPSOffice_Level22.8樣本比對(duì) 137996_WPSOffice_Level13討論 1426955_WPSOffice_Level1結(jié)論 168186_WPSOffice_Level2參考文獻(xiàn) 168266_WPSOffice_Level1致謝 1718804_WPSOffice_Level1誠(chéng)信聲明 1818963_WPSOffice_Level2N末端腦利鈉肽前體檢測(cè)的意義 189360_WPSOffice_Level2前言： 1919963_WPSOffice_Level11.NT-proBNP簡(jiǎn)介 1932074_WPSOffice_Level12.N末端腦利鈉肽前體檢測(cè) 1910778_WPSOffice_Level13.小結(jié) 2031520_WPSOffice_Level1參考文獻(xiàn) 20目錄TOC\o"1-5"\h\u摘要 3關(guān)鍵詞 3前言 51材料與方法 61.1材料 61.1.1樣本 61.1.2試劑盒 6 61.1.3儀器設(shè)備 61.2方法 61.2.1檢測(cè)原理 61.2.2性能評(píng)價(jià)方案 外觀 膜條寬度 液體移行速度 空白限 準(zhǔn)確度 線性范圍 重復(fù)性 穩(wěn)定性 8 抗干擾能力 0臨床樣本比對(duì) 92結(jié)果 92.1外觀 92.2空白限 92.3準(zhǔn)確度 92.4線性范圍 102.5重復(fù)性 112.6穩(wěn)定性 11 132.7抗干擾 132.8樣本比對(duì) 133討論 14參考文獻(xiàn) 16致謝 17誠(chéng)信聲明 18N末端腦利鈉肽前體檢測(cè)的意義 18參考文獻(xiàn) 2014N末端腦利鈉肽前體測(cè)定試劑盒性能評(píng)價(jià)摘要目的：對(duì)邁克生物股份有限公司自主研發(fā)的N末端腦利鈉肽前體測(cè)定試劑盒進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。方法：對(duì)試劑盒的外觀、空白限、準(zhǔn)確度、線性范圍、重復(fù)性、穩(wěn)定性和、臨床樣本比對(duì)、抗干擾等性能進(jìn)行分析和并對(duì)臨床樣本進(jìn)行比對(duì)評(píng)價(jià)。結(jié)果：空白限≤30.0pg/mL；準(zhǔn)確度相對(duì)偏差均在±15.0％范圍內(nèi)；在100pg/mL～24402pg/mL濃度范圍內(nèi)，r=1；濃度間重復(fù)性變異系數(shù)（CV）均<15.0%；將試劑盒置于37℃熱破壞環(huán)境97天后測(cè)得的空白限≤30pg/mL；準(zhǔn)確度相對(duì)偏差均在±15.0％范圍內(nèi)；在92g/mL～22295ng/mL濃度范圍內(nèi)，r=0.9995；重復(fù)性變異系數(shù)（CV）均<15.0%；樣本中血紅蛋白4g/L、膽紅素600μmol/L、甘油三酯17.6mmol/L時(shí)，干擾率在±15.00%范圍內(nèi)；對(duì)臨床73例血清樣本進(jìn)行測(cè)定，邁克生物的測(cè)定結(jié)果與羅氏對(duì)照試劑盒的測(cè)定結(jié)果相關(guān)性較好，R2=0.877。結(jié)論：邁克生物股份有限公司開發(fā)的N末端腦利鈉肽前體測(cè)定試劑盒，其外觀、空白限、準(zhǔn)確度、線性范圍、重復(fù)性、穩(wěn)定性、抗干擾等性能滿足行業(yè)性能指標(biāo)，檢測(cè)結(jié)果和對(duì)照試劑盒的測(cè)定結(jié)果羅氏公司檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性好，能準(zhǔn)確測(cè)定人血清樣本N末端腦利鈉肽前體濃度，具有很高可靠性。關(guān)鍵詞N末端腦利鈉肽前體；心力衰竭；性能評(píng)價(jià)EvaluationofThePerformanceofN-terminalPro-BrainNatriureticPeptideAssayKitAbstractObjective：ToevaluatetheperformanceofN-terminalpro-brainnatriureticpeptideassaykitdevelopedbymaccura.Methods:Theblanklimit,accuracy,linearrange,repeatability,stability,clinicalsamplecomparisonandanti-jammingabilityofthekitwereanalyzedandevaluated.Results:theblanklimitwas≤30.0pg/mLandtherelativedeviationwaswithin±15.0%.Intherangeof100pg/mL~24402pg/mLconcentration,thecoefficientofvariation(CV)waslessthan15.0%,theblanklimitfor7daysofthermaldestructionat37℃was≤30PG/mL,therelativedeviationswereintherangeof±15.0%,therelativedeviationwaswithin±15.0%,andtherelativedeviationwaswithin±15.0%.Intherangeof92g/mL~22295ng/mLconcentration,r=0.9995,coefficientofvariation(CV)<15.0%,MaccurehasagoodcorrelationwithRoche.,R2was0.877,Serumsamplesfrom73clinicalpatientsweremeasured.Theinterferencerateofhemoglobin4g/L,bilirubin600μmol/Landtriglyceride17.6mmol/Lwaswithin±15.00%.Conclusion:TheN-terminalbrainnatriureticpeptideprecursorassaykitdevelopedbyMaccureCo.,Ltd.meetstheindustryperformanceindexintermsofblanklimit,accuracy,linearrange,repeatability,stability,clinicalsamplecomparisonandanti-jammingcapability.ItcanaccuratelydeterminetheconcentrationofN-terminalbrainnatriureticpeptideprecursorinhumanserumsamples,andhashighreliability.KeywordsN-terminalbrainnatriureticpeptideprecursor;heartfailure;performanceevaluation前言心力衰竭(簡(jiǎn)稱心衰)是一種復(fù)雜的臨床綜合征，生理表現(xiàn)為由心臟結(jié)構(gòu)或功能異常引起的心室充盈或射血能力受損。其主要臨床表現(xiàn)為呼吸困難和全身無力(活動(dòng)受限)，以及液體潴留(肺淤血和外周水腫)。多種心臟病終末期會(huì)演變成心力衰竭，多年來發(fā)病率居高不下，已經(jīng)成為現(xiàn)在醫(yī)生最關(guān)注的疾病之一[1]。據(jù)中國(guó)地區(qū)42家醫(yī)院，對(duì)10714例心衰住院病例回顧性調(diào)查發(fā)現(xiàn)，這些病人的心力衰竭主要是由冠心病引起的，第二個(gè)原因是高血壓，而風(fēng)濕性心臟瓣膜病比例則下降；在各個(gè)年齡段因心力衰竭引起的死亡遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他心血管疾病，其主要死亡原因依次為左心功能衰竭(59％)、心律失常(13％)和猝死(13％)[2]。目前，臨床上主流的診斷方法是診斷左心室增大、左心室收縮末容積量增加及左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）≤40%。根據(jù)心力衰竭診斷的嚴(yán)重程度，NYHA分為四個(gè)級(jí)別，這種方法已成為公認(rèn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。但這種方法存在較多局限性，比如老年患者(≥65歲)生理機(jī)能減退，認(rèn)知功能障礙，且多伴發(fā)其他疾病，易對(duì)該類患者造成誤診；再者就是評(píng)估醫(yī)師主觀意識(shí)也會(huì)對(duì)評(píng)估結(jié)果造成一定影響［3-4］。在2001年的時(shí)候，歐洲心衰指南提出采用NT-proBNP作為心衰診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，在往后的幾年里，多國(guó)研究證實(shí)，依次發(fā)現(xiàn)在不穩(wěn)定和穩(wěn)定的冠狀動(dòng)脈疾病中NT-proBNP是有力且獨(dú)立的預(yù)測(cè)因子，特別是對(duì)于隨后的心力衰竭和死亡[6-8]。對(duì)急性心力衰竭患者進(jìn)行有效治療后，治療后體內(nèi)NT-proBNP含量會(huì)降低，NT-proBNP百分比的變化可作為患者危險(xiǎn)分層的依據(jù)[9-12]。NT-proBNP的診斷靈敏度和特異度均高達(dá)90%以上[13]，這已引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注和重視。當(dāng)通過壓力/拉伸刺激心肌細(xì)胞時(shí)，即當(dāng)心室容積擴(kuò)大并且壓力負(fù)荷增加時(shí)，首先，形成一個(gè)含134個(gè)氨基酸的B型利鈉肽原前體（pre-proBNP），隨后，蛋白酶將N-末端26氨基酸信號(hào)肽切割成108個(gè)氨基酸的B型利尿鈉肽（proBNP）。后者被內(nèi)切核酸酶等摩爾切割成N末端含有76個(gè)氨基酸的NT-proBNP1-76，和一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)含有32個(gè)氨基酸的BNP77-108。心室肌沒有存儲(chǔ)BNP和NT-proBNP的功能，所以兩者主要由心室肌產(chǎn)生并分泌入血。心房肌也可產(chǎn)生一定量的BNP和NT-proBNP，兩者含量都與心力衰竭有關(guān)【14】。但是NT-proBNP存在以下特點(diǎn)，半衰期長(zhǎng)達(dá)90-120min，且NT-proBNP在體外很穩(wěn)定，血液中濃度高（為BNP15-20倍），NT-proBNP水平不受日?；顒?dòng)等因素影響，也不存在日間或日內(nèi)的波動(dòng)，具有良好的重復(fù)性，所以臨床上常用其輔助診斷心力衰竭[15]。目前常用的檢測(cè)方法有全血快速免疫熒光法、POCT法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法和酶免疫分析法。全血快速免疫熒光法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法和酶免疫分析法雖然檢測(cè)結(jié)果十分準(zhǔn)確，但是檢測(cè)時(shí)間卻很長(zhǎng)，而因?yàn)镹T-proBNP檢測(cè)又常在急診室運(yùn)用，所以常常要求檢測(cè)儀器能快速得到出結(jié)果。針對(duì)于這種情況在這些方法中POCT法就具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、便攜性強(qiáng)的特點(diǎn)，但是相對(duì)于化學(xué)發(fā)光免疫分析法來說POCT法對(duì)慢性心衰的漏檢率較高。邁克生物公司自主研發(fā)了POCT法來檢測(cè)NT-proBNP采用的就是POCT法。1材料與方法材料1.1材料樣本本研究共收集了2018年1月-2018年10月期間，成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院和四川省婦幼保健院送檢的73例心衰患者血清樣本。以及數(shù)例正常人血清樣本。試劑盒1.2試劑盒邁克生物股份有限公司N末端腦利鈉肽前體測(cè)定試劑盒（熒光免疫層析法）及配套校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量控制產(chǎn)品，為邁克生物股份有限公司即將推出的產(chǎn)品。羅氏對(duì)比試劑盒腦利鈉肽前體檢測(cè)試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)購(gòu)于羅氏診斷（上海）有限公司。購(gòu)買后入庫存放于凍庫中，2-8℃密閉避光貯存有效期為12個(gè)月，開瓶上機(jī)2-8℃避光貯存可穩(wěn)定7天。其他材料其他材料主要包括公司自配的參考品等具體是什么？參考品和校準(zhǔn)品？。公司自配的參考品保存于-2~-8℃的環(huán)境中，防止質(zhì)其發(fā)生變質(zhì)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在日常使用的過程中，應(yīng)該每天都要在室內(nèi)進(jìn)行質(zhì)量控制的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，通過室內(nèi)質(zhì)量控制來觀察儀器的狀態(tài)，當(dāng)質(zhì)量控制值出現(xiàn)異常時(shí)，在臨床樣本測(cè)試之前根據(jù)質(zhì)量控制規(guī)則重新校正。1.3儀器設(shè)備儀器名稱型號(hào)廠家R01干式熒光免疫分析儀R01邁克生物冰箱BCD-208K/A海爾恒溫烘箱DHG-9145A上海-恒科學(xué)儀器有限公司移液器一套10、100、200、1000ul大龍2.方法2.1檢測(cè)原理該試劑盒使用雙抗體夾心法測(cè)定樣品中人N端前腦鈉肽(NT-proBNP)的水平。用純化的人N端前腦鈉肽(NT-proBNP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，并將含有N-末端前腦利尿鈉肽（NT-proBNP）的樣品依次加入到包被的單克隆抗體的微孔中，然后加入將HRP標(biāo)記的不同抗原決定簇位點(diǎn)的N端前腦鈉肽(NT-proBNP)抗體加入到微孔中，結(jié)合以形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加入底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并通過酸的作用轉(zhuǎn)化成最終的黃色。產(chǎn)物顏色深淺和樣品中的N端前腦鈉肽(NT-proBNP)的含量呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），并從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人N端前腦鈉肽(NT-proBNP)濃度。用以下標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)得對(duì)應(yīng)信號(hào)值，然后獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線用以下標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)好，然后把獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)保存于一個(gè)二維碼之中，下次使用檢測(cè)機(jī)器的時(shí)候直接讀取數(shù)據(jù)就可以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。表1-1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制數(shù)據(jù)以上兩種抗體均為鼠抗N末端腦力鈉肽前體，但是位點(diǎn)不同。校準(zhǔn)點(diǎn)研發(fā)給定濃度（ng/ml）主曲線信號(hào)值（RLU）Cal1801717920Cal240858960Cal320129480Cal410214740Cal551073702.2性能評(píng)價(jià)方案.2.1外觀包裝取本品1盒，在自然光下以矯正視力目視檢查。觀察試劑盒組分應(yīng)該齊全、完整，液體無滲漏；外觀應(yīng)平整，材料附著應(yīng)牢固；反應(yīng)液搖勻后應(yīng)為澄明液體。膜條寬度無結(jié)果從成品試紙中隨機(jī)抽取3人份待測(cè)試紙，撕開包裝袋，取出試紙，用游標(biāo)卡尺檢測(cè)試紙膜條寬度。膜條寬度應(yīng)不小于2.5mm（n=3）。液體移行速度取3人份檢測(cè)卡，將生理鹽水作為樣本按說明說操作步驟進(jìn)行測(cè)定，加樣時(shí)開始用秒表計(jì)時(shí)，樣本移行至觀察窗口上沿停止計(jì)時(shí)，加樣孔至觀察窗上邊緣之間的長(zhǎng)度為爬行距離，計(jì)算液體移行速度。液體移行速度應(yīng)不低于10mm/min（n=3）。計(jì)算公式為：v＝l/t式中：v—液體移行速度；l—試紙卡加樣孔中央位置至觀察窗口上沿之間的距離；t-試紙卡以滴加稀釋液于加樣孔時(shí)開始計(jì)時(shí)，沿反應(yīng)膜移行至觀察窗口上沿所需的時(shí)間。2.2.2空白限用N末端腦利鈉肽前體測(cè)定試劑盒測(cè)定濃度為0ppng/ml的N末端腦利鈉肽前體校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品20次。得出20次測(cè)定結(jié)果的發(fā)光值，計(jì)算其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差SD，把和SD帶入公式得出（+2SD）中求得空白限，所對(duì)應(yīng)的發(fā)光值?？瞻紫薏粦?yīng)根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品與相鄰濃度（0.05pnpg/ml）校準(zhǔn)品（0.05pg/ml）之間的發(fā)光值結(jié)果進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將（