導(dǎo)論1.1選題背景蘋果原產(chǎn)地位于中西亞和歐洲等區(qū)域，是薔薇科落葉果樹(shù)，在全球近百個(gè)國(guó)家均有種植。蘋果因果實(shí)碩大，口感宜人，富含多種營(yíng)養(yǎng)成分和功能性成分且熱量低，受到了全球消費(fèi)者歡迎，它在水果市場(chǎng)中占有一席之地，是世界四大水果之一。蘋果參與的國(guó)際貿(mào)易有鮮食和加工2種形式。中國(guó)蘋果產(chǎn)業(yè)起步時(shí)間較晚，但發(fā)展很迅速，產(chǎn)量與消費(fèi)水平均在世界前列。中國(guó)蘋果進(jìn)行人工栽培是從十九世紀(jì)末煙臺(tái)引進(jìn)國(guó)外優(yōu)良蘋果品種開(kāi)始的，上世紀(jì)90年代，我國(guó)蘋果種植面積和產(chǎn)量開(kāi)始躍居世紀(jì)首位，1999年產(chǎn)量高達(dá)21萬(wàn)噸，占全球總量的30%，之后產(chǎn)量和全球占比穩(wěn)步上升，2017年，產(chǎn)量達(dá)4388萬(wàn)噸，超過(guò)全球產(chǎn)量58%，2010年以來(lái)，我國(guó)年人均鮮蘋果消費(fèi)量13kg，是世界水平8kg的1.6倍以上[1-2]。近年來(lái)，為了防止病蟲害影響農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量，農(nóng)藥在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的使用正變得越來(lái)越普遍，然而使用不合理就會(huì)造農(nóng)藥成在食品中的累積，從而導(dǎo)致其殘留量超標(biāo)，引起農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和安全問(wèn)題，環(huán)境和食品的污染問(wèn)題也在世界范圍內(nèi)越來(lái)越突出，嚴(yán)重危害了人類的生存和發(fā)展。1.2選題目的與意義近年來(lái)，國(guó)家加強(qiáng)了對(duì)水果和蔬菜中殺菌劑的監(jiān)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，水果和蔬菜中12種殺菌劑的監(jiān)測(cè)在2016年開(kāi)展，并逐年擴(kuò)大監(jiān)測(cè)的殺菌劑種類[3]。檢測(cè)農(nóng)藥殘留的技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)是確保食品質(zhì)量和安全的重要支持，只有積極優(yōu)化和采用先進(jìn)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)，才能有效推動(dòng)食品的安全消費(fèi)。目前蘋果所使用的殺菌劑品種中用量占市場(chǎng)份額較大的苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯能夠?yàn)樵撟魑锏募?xì)菌、真菌病害起到防治的作用，造福人類社會(huì)，但是也會(huì)對(duì)我們賴以生存的環(huán)境和我們的人體健康造成危害。在我國(guó)制定的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)中，苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯在蘋果上的最大殘留限量值（MRL）均為0.5mg/kg[4]，因此，對(duì)甲氧基丙烯酸酯類和三唑類殺菌劑殘留量的檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化具有十分重要的意義。1.3國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在我國(guó)，農(nóng)藥主要分為五類：有機(jī)殺蟲劑、有機(jī)殺螨劑、有機(jī)殺菌劑、有機(jī)除草劑和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。其中，有機(jī)殺菌劑主要包括二硫代氨基甲酸酯類、二甲酰亞胺類、苯并咪唑類、酞酰亞氨類、有機(jī)磷類、苯基酰胺類、甾醇生物合成抑制劑等。人體受到有機(jī)農(nóng)藥的污染，主要是通過(guò)食物鏈富集作用最終進(jìn)入人體，有機(jī)農(nóng)藥對(duì)人體的危害主要體現(xiàn)在三種形式上：急性中毒、慢性中毒以及“三致”危害[5]。急性中毒通常會(huì)引起大量個(gè)體死亡，所帶來(lái)的危害和影響最為嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為肌肉痙攣、惡心、嘔吐、腹瀉、視力減退以及呼吸困難等。慢性農(nóng)藥中毒不易被發(fā)現(xiàn)，因?yàn)橐恍┌Y狀類似于一般的疲勞和頭痛，并且經(jīng)常被忽視。如果長(zhǎng)時(shí)間食用含有農(nóng)藥的食物，農(nóng)藥會(huì)在人體內(nèi)積累，對(duì)人體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。殘留的有機(jī)農(nóng)藥中有一些藥物會(huì)引起基因突變或者染色體畸變，對(duì)人體造成潛在危害。2017年的“毒大蔥”事件相信不少人到現(xiàn)在仍心有余悸，農(nóng)殘超標(biāo)再次博得輿論頭條，也讓大眾對(duì)其恐慌空前高漲。大蒜、韭菜、櫻桃、蘋果、梨、芹菜、西紅柿、豆角等瓜果蔬菜總是都居于農(nóng)殘超標(biāo)的名單前列。吡唑醚菌酯是一種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，它是一類低毒、高效、廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑，幾乎所有真菌引起的疾病，如銹病、白粉病、霜霉病等均有較理想的防治效果，可用于各種蔬菜和水果，如蘋果、番茄、葡萄和馬鈴薯的莖、葉噴霧、土壤和種子處理。苯醚甲環(huán)唑是一種三唑類殺菌劑[6]，是甾醇脫甲基化抑制劑，具有高效、廣譜、低毒、用量低的特點(diǎn)，其內(nèi)吸性極強(qiáng)。它能夠抑制麥角甾醇的生物合成，麥角甾醇是細(xì)胞膜的重要組成部分，在細(xì)胞膜的通透性中起著重要的作用。除此之外，還會(huì)破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)功能，從而達(dá)到殺菌目的，對(duì)蔬菜和水果的紋枯病、銹病、早疫病、葉斑病、黑星病、白粉病等具有良好的保護(hù)和治療作用，具有持效期長(zhǎng)，與其他殺菌劑無(wú)交互抗性，不污染農(nóng)產(chǎn)品，不傷害天敵的優(yōu)點(diǎn)[7-8]。隨著現(xiàn)代分析化學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法也得到了迅速發(fā)展。目前用于檢測(cè)吡唑醚菌酯殘留的方法有LC、GC、LC-MS/MS和GC-MS[9-10]，國(guó)外有一種通過(guò)使用免疫親和柱結(jié)合液相色譜檢測(cè)果汁中吡唑醚菌酯的方法。吡唑醚菌酯殘留的檢測(cè)方法根據(jù)基質(zhì)特性、儀器檢測(cè)條件和目標(biāo)要求而變化。乙腈是樣品提取過(guò)程中最常用的提取溶劑。使用C18、PSA或GCB作為填料的SPE（固相萃取）已經(jīng)被廣泛使用，并且使用雙柱進(jìn)行凈化的效果優(yōu)于單柱的效果。目前用于苯醚甲環(huán)唑殘留檢測(cè)的技術(shù)主要是氣相色譜法、高效液相色譜法和其他方法，如質(zhì)譜法、表面增強(qiáng)拉曼光譜和酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)[11]，目前用于苯醚甲環(huán)唑殘留檢測(cè)的方法主要是采用質(zhì)譜法，但是質(zhì)譜法對(duì)于復(fù)雜基質(zhì)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。從當(dāng)前的發(fā)展趨勢(shì)來(lái)看，采用串聯(lián)質(zhì)譜法建立苯醚甲環(huán)唑殘留檢測(cè)方法，開(kāi)展苯醚甲環(huán)唑殘留精準(zhǔn)篩查已成為研究的重點(diǎn)。對(duì)殺菌劑進(jìn)行前處理的技術(shù)包括固相萃取、固相微萃取、凝膠色譜及QuEChERS[11]等。目前，QuEChERS(quick，easy，cheap，effective，rugged，safe)前處理技術(shù)結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜是快速分析殺菌劑多殘留的發(fā)展趨勢(shì)[12-13]。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(highperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry，HPLC-MS/MS)是一種高效率、高特異性和高靈敏度的普適性方法，最明顯的優(yōu)點(diǎn)是它可以大大縮短儀器分析時(shí)間[14-16];目前，樣品前處理和儀器條件選擇都存在優(yōu)缺點(diǎn)，對(duì)于同時(shí)檢測(cè)蘋果中的苯醚甲環(huán)唑以及吡唑醚菌酯兩種農(nóng)藥的殘留量的報(bào)道還很少。1.4研究?jī)?nèi)容通過(guò)QuEChERS凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和GB/T20768-2008檢測(cè)蘋果中吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑這兩種農(nóng)藥殘留。該研究旨在使用QuEChERS進(jìn)行樣品前處理，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)分析，從而能夠建立和優(yōu)化同時(shí)檢測(cè)蘋果中苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯殘留量的方法，為監(jiān)測(cè)蔬菜和水果中的農(nóng)藥殘留提供方法支持，減少甲氧基丙烯酸酯類和三唑類殺菌劑殘留引起的食品安全問(wèn)題。2材料與方法2.1試驗(yàn)材料與試劑2.1.1材料蘋果樣品購(gòu)自太原市小店區(qū)美特好超市，去果柄，用刀式研磨儀攪碎，于－18℃下密封保存，標(biāo)明標(biāo)記，備用。2.1.2試劑苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品，99.9%，Dr.EhrenstorferGmbH吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%，Dr.EhrenstorferGmbH乙腈：HPLC，>99.9%，TediaCompany，Inc，USA甲醇：LC-MS，>99.9%，默克股份兩合公司，德國(guó)甲苯：HPLC，>99.9%，TediaCompany，Inc，USA甲酸：fisherchemical，>88%，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司乙酸銨：色譜純，>99.0%，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所氯化鈉：A.R.,>99.0%，北京化工廠純凈水：WatsonsWater屈臣氏飲用水廣州屈臣氏食品飲料有限公司2.2主要儀器與設(shè)備凈化管：2mL離心管，內(nèi)裝25mgPSA、25mgC18，島津技邇（上海）商貿(mào)有限公司離心管：50mL，CORNING，CorningIncorporated，MadeinChina濾膜：NY，0.22μm×13mm，島津技邇（上海）商貿(mào)有限公司注射器：A3型1mL，江西青山堂醫(yī)療器械有限公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，RE-52A,上海亞榮生化儀器廠氮吹儀，WD-12，杭州奧盛儀器有限公司串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用儀：HPLCI-ClassXEVOTQ-SMicro，WaterscorporationUSA天平：0.1mg，BS210S，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司天平：0.1g，CAP8201，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司天平：0.1g，TP6101，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司刀式研磨儀：GM300，RetschGmbH，HaanGermany離心機(jī)：Centrifuge5804R，EppendorfGermany離心機(jī)：Centrifuge5424R，EppendorfGermany多管渦旋混合儀：TBOYSMULTI.TUBEVORTEXER945066，TroemnerLLC快速混勻器：XK80-A，江蘇新康醫(yī)療器械有限公司2.3溶液配制4mmol/L乙酸銨甲醇溶液（含0.1%甲酸）：準(zhǔn)確稱取0.308g乙酸銨至1000mL容量瓶中，加入1mL甲酸，用甲醇定容至刻度線，搖勻，備用。4mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸）：準(zhǔn)確稱取0.308g乙酸銨至1000mL容量瓶中，加入1mL甲酸，用水稀釋定容至刻度線，搖勻，備用。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取10.0mg（精確至0.1mg）的苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，溶解于乙腈，定容至10mL容量瓶中，此溶液濃度為1000μg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；≤-18℃冷凍保存，有效期6個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：量取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用乙腈稀釋成至濃度為100μg/mL、10μg/mL（2個(gè)月有效期）、1μg/mL、0.1μg/mL（現(xiàn)配現(xiàn)用）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.4試驗(yàn)方法2.4.1提取和凈化2.4.1.1GB/T20769-2008國(guó)標(biāo)方法準(zhǔn)確稱取20.0g蘋果樣品于80mL具塞離心管中，加入40.0mL乙腈，并以15000r/min的轉(zhuǎn)速勻漿1min，加5g氯化鈉，繼續(xù)勻漿1min，再于8000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min。取20ml上清液，水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至1ml（水浴溫度為40℃），等待凈化。將無(wú)水硫酸鈉裝入Sep-PakVac柱中，加入量約為柱高的2cm,并置于固定架上，固定架下端接有雞心瓶。在加入樣品之前用4ml乙腈+甲苯（3+1）預(yù)先洗柱，等到液面至硫酸鈉的頂端時(shí)，將樣品濃縮液快速轉(zhuǎn)移到凈化柱上，并用新的雞心瓶代替接收。然后每次用2ml乙腈+甲苯（3+1）洗滌樣液瓶，洗滌3次，并將洗滌液轉(zhuǎn)移到柱中。在柱上加上50ml注液器，用25ml乙腈+甲苯（3+1）洗脫苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯，再合并到雞心瓶中，在40℃水浴中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)濃縮，濃縮至0.5ml。用氮吹儀將濃縮液吹干，迅速加入1ml的乙腈+水（3+2），混勻，通過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定[16]。2.4.1.2QuEChERS-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法將10.0g蘋果樣品準(zhǔn)確稱取至量程為50mL的具塞離心管中，加入10.0mL乙腈以及5.0g氯化鈉，于2500r/min渦旋振蕩提取10min，再于8000r/min下離心5min。吸上清液1.5mL加入裝有25mgPSA、25mgC18的2mL離心管，2500r/min渦旋分散固相萃取3min，5000r/min離心2min，上清液過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜后，吸0.5mL加0.5mL水，混勻，待液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。2.4.2儀器檢測(cè)2.4.2.1液相色譜條件色譜柱：WatersACQUITYHPLCBEHC18，50mm×2.1mm，1.7μm，SN：02973711115141；柱溫：40℃；樣品盤溫度：15℃；流速：0.3mL/min；進(jìn)樣量：5μL；流動(dòng)相采用梯度模式，具體梯度洗脫條件參數(shù)見(jiàn)表2-1。表2-1梯度洗脫條件參數(shù)表t/min流速(mL/min)A%B%0.00.390101.00.390101.10.310903.00.310903.10.390105.00.39010注：流動(dòng)相A:4mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸）流動(dòng)相B:4mmol/L乙酸銨甲醇溶液（含0.1%甲酸）2.4.2.2質(zhì)譜條件以正離子模式掃描兩種200μg/L的吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液，確定化合物的母離子，并選擇具有較強(qiáng)豐度和較小干擾的兩個(gè)子離子作為定性和定量離子，吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑2種殺菌劑質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2-2。表2-2質(zhì)譜條件表名稱保留時(shí)間(min)定性離子對(duì)(M/Z)定量離子對(duì)(M/Z)Dwells（s）錐孔電壓（V）碰撞能量(V)吡唑醚菌酯2.11388.0/163.1-0.0813028388.0/194.0388.0/194.00.0813010苯醚甲環(huán)唑2.16406.0/110.9-0.0813760406.0/251.0406.0/251.00.0813725離子源：電噴霧離子源ESI；掃描方式：正離子掃描；毛細(xì)管電壓：3.5KV；DesolvationTemp(℃)：300；Desolvation（L/Hr）：800；碰撞氣體：氬氣，純度>99.999%；檢測(cè)方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）2.4.3定性測(cè)定在相同的實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定樣品時(shí)，如果檢測(cè)出的色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品一致，并且在扣除背景后的樣品檢測(cè)質(zhì)譜圖中，存在所選的離子，并且所選擇的離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)樣品的離子豐度比相一致（相對(duì)豐度＞50％，允許±20％偏差；相對(duì)豐度＞20％～50％，允許±25％偏差；相對(duì)豐度＞10％～20％，允許±30％偏差；相對(duì)豐度≤10％，允許±50％偏差），則可以確定樣品中含有這種農(nóng)藥。2.4.4定量測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行定量測(cè)定的方法為外標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法。為了減少基質(zhì)對(duì)定量測(cè)定結(jié)果的影響，應(yīng)選擇基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并確保所檢測(cè)的樣品中該種農(nóng)藥的響應(yīng)值符合儀器的線性范圍。2.4.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制：準(zhǔn)確稱取苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0.1mg)，用乙腈（液譜級(jí)）溶解并定容至10.0ml，以制配成標(biāo)準(zhǔn)母液。用蘋果空白對(duì)照樣品溶液，配制成0.0025、0.005、0.01、0.05、0.1、0.25mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)樣5μL，分別以苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。2.4.6添加回收率試驗(yàn)分別取已制備好并經(jīng)檢測(cè)不含目標(biāo)化合物的蘋果樣品，并加入一定量的苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，放置30min以上，按照“2.4.1”的方法進(jìn)行提取和凈化，根據(jù)“2.4.2”的條件測(cè)定回收率并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。在蘋果中苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯的添加水平為0.01、0.1、0.5mg/kg，每個(gè)濃度重復(fù)5次。2.4.7結(jié)果計(jì)算按式（1）計(jì)算試樣中苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯殘留量：(1)式中：X——樣品中苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的測(cè)定液中苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——測(cè)定液定容體積，單位為毫升（mL）；f——樣品稀釋倍數(shù)；m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）。測(cè)定結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。3結(jié)果與分析3.1提取和凈化條件優(yōu)化由于水果基質(zhì)復(fù)雜，所以在提取殺菌劑時(shí)，通常伴隨著色素和糖類等提取物，易產(chǎn)生干擾和基質(zhì)效應(yīng)，通過(guò)采用GB/T20769-2008和QuEChERS-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法兩種實(shí)驗(yàn)方法比較樣品前處理技術(shù)，發(fā)現(xiàn)國(guó)標(biāo)所用固相萃取法所需設(shè)備繁雜，操作步驟繁瑣耗時(shí)長(zhǎng)，需要?jiǎng)驖{、濃縮、換相，提取液乙腈用量40mL；而采用QuEChERS方法凈化樣品，所需的設(shè)備也較為簡(jiǎn)單，提取液乙腈用量10mL，基質(zhì)分散萃取后即可進(jìn)樣，減少環(huán)境污染、節(jié)約經(jīng)濟(jì)成本;單個(gè)樣品預(yù)處理時(shí)間小于15min，可有效去除極性有機(jī)酸、脂類、糖類、蛋白質(zhì)、類胡蘿卜素和葉綠素等，結(jié)果回收率十分滿意，且操作快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)、高效、可靠、安全。故選擇QuEChERS方法凈化樣品。3.2方法線性范圍以各殺菌劑的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。濃度x（μg/mL）與響應(yīng)值y(峰面積）呈線形相關(guān)：苯醚甲環(huán)唑y=2E+0.7x+30729R2=0.9996吡唑醚菌酯y=7E+0.7x+175275R2=0.9994結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與其相對(duì)應(yīng)的色譜峰峰面積在所選定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，可以用來(lái)進(jìn)行樣品中吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑的定量分析。線性方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3-1、表3-2和圖3-1、圖3-2,標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)附錄1。表3-1苯醚甲環(huán)唑在蘋果中的響應(yīng)值序號(hào)濃度mg/L峰面積或峰高123平均值10.00255348551322507825186320.0051001879808510303810043730.0119381221358420715220484940.0510437471079156976552103315250.1191337719126351930521191884460.254695811465903847329234695924表3-2吡唑醚菌酯在蘋果中的響應(yīng)值序號(hào)濃度mg/L峰面積或峰高123平均值10.002522975422211022077522421320.00542776042724842703742734830.0183560885925085165984883940.05414248241545034068391412179250.1777153577845447803377778648560.2518650226185902441847937418573281圖3-1苯醚甲環(huán)唑蘋果標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3-2吡唑醚菌酯蘋果標(biāo)準(zhǔn)曲線3.3回收率3.3.1正確度正確度通過(guò)添加回收率試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)。按2.4.1描述進(jìn)行前處理，進(jìn)行加標(biāo)回收。QuEChERS凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和國(guó)標(biāo)方法的平均回收率分別在75%～97%和91%～97%之間。符合《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》（NY/T788-2018）的要求[18]。結(jié)果見(jiàn)表3-3、表3-4。具體參數(shù)參見(jiàn)附錄2，色譜圖見(jiàn)附錄3。表3-3QuEChERS-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯添加回收率農(nóng)藥名稱添加濃度mg/kg回收率（%）RSD（%）12345平均值苯醚甲環(huán)唑0.0198949795989620.189979999989640.57370758080756吡唑醚菌酯0.0196969995989710.1919698100999740.58281818283821表3-4GB/T20769-2008方法苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯添加回收率農(nóng)藥名稱添加濃度mg/kg回收率（%）RSD（%）12345平均值苯醚甲環(huán)唑0.019410099969793100.59487988198918吡唑醚菌酯0.019710110298919840.596989897989713.3.2精密度精密度的衡量標(biāo)準(zhǔn)是添加回收率試驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。在上述添加回收率試驗(yàn)中，QuEChERS凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和GB/T20769-2008方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在1%～6%和1%～10%之間。符合《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》（NY/T788-2018）的要求[17]，結(jié)果見(jiàn)表3。3.4定量限10倍信噪比(S/N)計(jì)算定量限(limitofquantification,LOQ)。我國(guó)已制定苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯在蘋果上的MRL值均為0.5mg/kg,兩種方法對(duì)兩種農(nóng)藥的定量限為0.01mg/kg。4結(jié)論通過(guò)在QuEChERS方法中選擇萃取劑的類型，以及對(duì)凈化劑PSA、C18種類和用量的選擇，優(yōu)化超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜最佳條件，建立了用QuEChERS凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)蘋果中吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑2種殺菌劑，該方法是高通量、快速分析的方法。結(jié)果表明：在0.0025～0.25mg/kg范圍內(nèi),吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑的質(zhì)量濃度與相對(duì)應(yīng)的峰面積間呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為均大于0.99。定量限(LOQ)在0.01mg/kg；QuEChERS凈化-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法在0.01、0.1、0.5mg/kg3個(gè)添加水平下，平均添加回收率在75%～97%之間。而GB/T20769-2008國(guó)標(biāo)方法在0.01、0.5mg/kg2個(gè)添加水平下的平均添加回收率則在91%～98%之間，兩種方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別在1%～6%和1%～10%之間。該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確度高、成本低廉，可用于同時(shí)檢測(cè)蘋果中吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑在蘋果上的殘留量。并且，此方法有高通量、對(duì)基體干擾少、能高效率萃取、分析速度快、操作放便簡(jiǎn)單、溶劑消耗少、成本低等特點(diǎn)，滿足現(xiàn)如今的發(fā)展對(duì)食物中殘留檢測(cè)的高通量和高效率要求，有利于保護(hù)人民群眾身體健康，對(duì)維護(hù)食品安全有著重要意義。

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致謝時(shí)光飛逝，在象牙塔的這四年轉(zhuǎn)眼間就要畫上句號(hào)?；厥姿哪陼r(shí)光中的點(diǎn)點(diǎn)滴滴，心中倍感幸福和充實(shí)。這篇畢業(yè)論文的撰寫，讓我感受到努力是一種幸福，心中也不禁泛起波瀾，感慨良多。感謝我的母校山西工商學(xué)院，是它給我提供了良好的學(xué)習(xí)環(huán)境；感謝我的導(dǎo)師—張持晨教授和指導(dǎo)老師—王媛媛老師，在我論文的寫作過(guò)程中，不論是選題方向、論文框架還是細(xì)節(jié)修改，他們都給予了我耐心的指導(dǎo)，提出了許多寶貴的意見(jiàn)與建議，使我能夠順利完成論文的寫作；感謝我的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師—王霞老師，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，王老師就像一位慈祥的母親，在指導(dǎo)我們實(shí)驗(yàn)的同時(shí)，不忘記關(guān)心我們的生活；感謝我的父母，是他們?cè)诒澈竽姆瞰I(xiàn)與支持，才讓我毫無(wú)后顧之憂，能全身心投入到本篇論文的撰寫中來(lái)；感謝四年以來(lái)授課的各位老師，是他們的兢兢業(yè)業(yè)的教導(dǎo)，才使我掌握了諸多食品質(zhì)量與安全的相關(guān)知識(shí)。此外，我最要感謝的是旅游與酒店管理學(xué)院院長(zhǎng)王麗娟，她對(duì)我嚴(yán)厲的教誨和無(wú)微不至的關(guān)愛(ài)，是我完成此篇論文最大的動(dòng)力。在此，誠(chéng)懇地請(qǐng)各位老師對(duì)我論文中的缺陷批評(píng)指正，使我在未來(lái)的工作中能及時(shí)完善論文的不足之處。最后，我要向百忙之中抽時(shí)間參加我論文答辯的各位老師表示衷心的感謝！ 附錄1基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖0.0025mg/kg添加濃度0.005mg/kg添加濃度0.01mg/kg添加濃度0.05mg/kg添加濃度0.1mg/kg添加濃度0.25mg/kg添加濃度注：bzmjz:吡唑醚菌酯bmjhz:苯醚甲環(huán)唑附錄2殘留試驗(yàn)添加回收率計(jì)算表農(nóng)藥介質(zhì)（g）添加濃度mg/kg編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)濃度(μg/ml)標(biāo)準(zhǔn)峰面積樣品峰面積濃縮倍數(shù)樣品含量mg/kg回收率%平均回收率%標(biāo)準(zhǔn)偏差%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差%苯醚甲環(huán)唑蘋果10g0.01G110.005701416881120.0098989622G126591120.009494G136780720.009797G146646420.009595G156886720.0098980.1G160.0572692164637620.089899644G1770633220.09797G1871838120.09999G1971824520.09999G2071433820.098980.5G210.254672805339870820.36737556G22324783820.3570G23349609420.3775G24374043120.4080G25372382420.4080殘留試驗(yàn)添加回收率計(jì)算表農(nóng)藥介質(zhì)（g）添加濃度mg/kg編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)濃度(μg/ml)標(biāo)準(zhǔn)峰面積樣品峰面積濃縮倍數(shù)樣品含量mg/kg回收率%平均回收率%標(biāo)準(zhǔn)偏差%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差%吡唑醚菌酯蘋果10g0.01G110.00530888729786220.0096969711G1229640020.009696G1330463320.009999G1429465320.009595G1530198720.0098980.1G160.053139673285104820.0919197440969609898G19312560520.100100G20310984920.099990.5G210.25185342481520669220.41828211G221499919820.4081G231495957320.40