IT/ZZB0261—2017前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14產(chǎn)品分類及用途 25基本要求 26技術(shù)要求 37試驗(yàn)方法 48檢驗(yàn)規(guī)則 5 標(biāo)識(shí)運(yùn)輸貯存和保質(zhì)期610質(zhì)量承諾與服務(wù) 6附錄A（規(guī)范性附錄）最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定方法 7T/ZZB0261—2017本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。請(qǐng)注意本標(biāo)準(zhǔn)文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)有浙江省浙江制造品牌建設(shè)促進(jìn)會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江藍(lán)箭萬(wàn)幫標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)有限公司牽頭組織制訂。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：浙江艾杰斯生物科技有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)參與起草單位：中國(guó)計(jì)量大學(xué)、杭州康源飼料科技有限公司、浙江省畜牧技術(shù)推廣站（排名不分先后）。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：潘宏濤、盧亞萍、陳生紅、潘洪聯(lián)、賈曉龍、劉欣、李奎、朱盛霞、鄭玲、季立新。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江藍(lán)箭萬(wàn)幫標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)有限公司負(fù)責(zé)解釋。T/ZZB0261—20171飼料添加劑溶菌酶本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料添加劑溶菌酶的產(chǎn)品分類及用途、基本要求、技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則及包裝、標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期以及質(zhì)量承諾與服務(wù)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物源經(jīng)發(fā)酵、提取、精制或以溶菌酶為原料復(fù)配載體等工藝制得的飼料添加劑溶2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191—2008包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB1886.257—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑溶菌酶GB4789.2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)的測(cè)定GB4789.4食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB4789.10—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)GB4789.15—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)霉菌和酵母平板計(jì)數(shù)法GB4789.38—2012食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)GB5009.3—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測(cè)定直接干燥法GB5009.4—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測(cè)定食品中總灰分的測(cè)定GB/T5917.1—2008飼料粉碎粒度測(cè)定兩層篩篩分法GB/T6435—2014飼料中水分的測(cè)定直接干燥法GB10648—2013飼料標(biāo)簽GB/T13079—2006飼料中總砷的測(cè)定硼氫化物還原光度法GB/T13080—2004飼料中鉛的測(cè)定原子吸收光譜法GB/T13082飼料中鎘的測(cè)定方法GB/T14699.1飼料采樣NY/T722—2003飼料用酶制劑通則JJF1070定量包裝商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件3.1T/ZZB0261—20172精制產(chǎn)品指發(fā)酵液通過(guò)分離、濃縮提純、干燥后獲得的產(chǎn)品。3.2復(fù)配產(chǎn)品指由精制產(chǎn)品與按比例添加飼料用載體組成的產(chǎn)品。3.3液體產(chǎn)品指發(fā)酵液通過(guò)分離、濃縮提純獲得的產(chǎn)品。4產(chǎn)品分類及用途產(chǎn)品分類及用途見(jiàn)表1。表1產(chǎn)品分類及用途5基本要求5.1原材料5.1.1使用的菌株應(yīng)具有國(guó)家菌株保藏機(jī)構(gòu)提供的鑒定證明；采用6代以內(nèi)的菌株用于實(shí)際生產(chǎn)。5.1.2精制產(chǎn)品、液體產(chǎn)品的所有生產(chǎn)原材料要求應(yīng)符合食品級(jí)及以上。5.1.3復(fù)配產(chǎn)品中所使用的載體要求應(yīng)符合飼料級(jí)及以上。5.2生產(chǎn)技術(shù)5.2.1采用分子生物學(xué)技術(shù)，經(jīng)過(guò)液體深層高密度發(fā)酵、膜分離、精制等，形成規(guī)?；a(chǎn)工藝。5.2.2發(fā)酵過(guò)程選用高靈敏度電極在線監(jiān)測(cè)，并采用智能數(shù)據(jù)采集與監(jiān)視控制系統(tǒng)進(jìn)行技術(shù)參數(shù)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與調(diào)控。5.2.3精制產(chǎn)品的烘干、包裝工序應(yīng)在10000級(jí)潔凈車間內(nèi)完成。液體產(chǎn)品應(yīng)通過(guò)自動(dòng)的灌裝、扎蓋、貼標(biāo)生產(chǎn)線完成。5.2.4產(chǎn)品內(nèi)包裝應(yīng)經(jīng)消毒處理。5.3檢測(cè)能力5.3.1應(yīng)具備產(chǎn)品技術(shù)全項(xiàng)檢測(cè)能力。5.3.2應(yīng)具備產(chǎn)品檢測(cè)的關(guān)鍵設(shè)備：紫外分光光度計(jì)（精度萬(wàn)分之一）、超凈臺(tái)、馬弗爐、恒溫?fù)u床、恒溫水浴箱、液相色譜儀、原子吸收分光光度計(jì)等。T/ZZB0261—201736技術(shù)要求6.1感官指標(biāo)6.1.1固體：白色至淺黃色粉末。6.1.2液體：淺黃色至深棕色液體。6.2理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)————————6.3安全性指標(biāo)安全性指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定。表3安全性指標(biāo)菌落總數(shù)/[CFU/g（mL）]≤霉菌和酵母/[CFU/mg（mL）]≤大腸埃希氏菌/[MPN/g（mL）]≤≤≤≤——6.4凈含量應(yīng)符合國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局第75號(hào)令《定量包裝商品計(jì)量監(jiān)督管理辦法》。T/ZZB0261—201747試驗(yàn)方法7.1感官7.1.1固體：取適量試樣，放置于白瓷盤中，在自然光線下，觀察試樣的色澤和狀態(tài)。7.1.2液體：取適量試樣，放置于錐形瓶中，在自然光線下，觀察試樣的色澤和狀態(tài)。7.2酶活力7.2.1一般規(guī)定依據(jù)GB1886.257—2016附錄A中A.2的規(guī)定調(diào)整如下執(zhí)行。7.2.2精制產(chǎn)品試樣溶液的制備稱取100mg左右試樣，置于燒杯中，加入磷酸緩沖溶液100ml充分溶解，溶液倒入1000ml容量瓶中，再用磷酸緩沖液反復(fù)沖洗燒杯，洗液合并于容量瓶?jī)?nèi)定容。7.2.3復(fù)配產(chǎn)品試樣溶液的制備稱取1g左右試樣，置于燒杯中，加入磷酸緩沖溶液100ml充分溶解（如載體為糠餅粉，需先放入研缽中加入少量磷酸緩沖溶液研磨溶液倒入1000ml容量瓶中，再用磷酸緩沖液反復(fù)沖洗燒杯（研缽洗液合并于容量瓶?jī)?nèi)定容。7.2.4液體產(chǎn)品試樣溶液的制備液體產(chǎn)品不需要提前處理，直接檢測(cè)。7.3抑菌濃度按臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所（CLSI）的“最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定方法”進(jìn)行。具體見(jiàn)附錄A。7.4水分的測(cè)定精制產(chǎn)品按GB5009.3—2016中的第一法規(guī)定進(jìn)行；復(fù)配產(chǎn)品按GB6435-2014中的8.1規(guī)定進(jìn)行。7.5灰分的測(cè)定按GB5009.4—2016中的第一法規(guī)定進(jìn)行。7.6粒度的測(cè)定按GB/T5917—2008中的規(guī)定進(jìn)行。其中：精制產(chǎn)品使用0.30mm標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)篩；復(fù)配產(chǎn)品使用0.59mm試驗(yàn)篩。按GB1886.257—2016中附錄A.3的規(guī)定進(jìn)行。7.8菌落總數(shù)的測(cè)定按GB4789.2中的規(guī)定進(jìn)行。7.9霉菌和酵母計(jì)數(shù)T/ZZB0261—20175按GB4789.15—2016中的規(guī)定進(jìn)行。7.10大腸埃希氏菌的測(cè)定按GB4789.38—2012中的規(guī)定進(jìn)行。7.11沙門氏菌的測(cè)定按GB4789.4中的規(guī)定進(jìn)行。7.12金黃色葡萄球菌的測(cè)定（定性檢驗(yàn)）按GB4789.10—2016中的第一法規(guī)定執(zhí)行。7.13鉛的測(cè)定按GB13080—2004中的規(guī)定進(jìn)行。7.14總砷的測(cè)定按GB/T13079—2006中的6.硼氫化物還原光度法規(guī)定進(jìn)行。7.15鎘的測(cè)定按GB/T13082中的規(guī)定進(jìn)行。7.16凈含量按JJF1070中的規(guī)定執(zhí)行。8檢驗(yàn)規(guī)則8.1組批同一工藝、同一發(fā)酵罐（或同一混合設(shè)備）生產(chǎn)的質(zhì)量均一的產(chǎn)品為一批。8.2取樣與抽樣8.2.1采用適宜的方法保證取樣具有代表性，保證取樣部位和取樣瓶的清潔。對(duì)用于微生物試驗(yàn)的取樣，應(yīng)使用無(wú)菌操作。8.2.2按GB/T14699.1中的規(guī)定執(zhí)行，取樣總量不少于200g（或200ml）。8.3出廠檢驗(yàn)8.3.1產(chǎn)品出廠前，應(yīng)由生產(chǎn)廠的質(zhì)量部門，按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定逐批檢驗(yàn)，并簽發(fā)質(zhì)量合格證的產(chǎn)品，方可出廠。8.3.2出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官、酶活力、水分（固體）、pH值。8.4型式檢驗(yàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目為本標(biāo)準(zhǔn)要求中規(guī)定的全部項(xiàng)目。一般情況下，型式檢驗(yàn)半年進(jìn)行一次。有下列情況之一時(shí)，亦應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)新產(chǎn)品鑒定時(shí)；T/ZZB0261—20176b)產(chǎn)品的工藝、原材料或設(shè)備有較大改變與變化時(shí)；c)正常生產(chǎn)的產(chǎn)品停產(chǎn)3個(gè)月后，重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行抽檢時(shí)。8.5判定規(guī)則8.5.1出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果全部合格，則判定該批產(chǎn)品出廠檢驗(yàn)合格，準(zhǔn)予出廠。若感官、酶活力、水分（固體）、pH值中有一項(xiàng)不合格，則允許進(jìn)行加倍抽樣進(jìn)行復(fù)驗(yàn)，復(fù)檢結(jié)果合格，則判定該批產(chǎn)品合格；若復(fù)檢結(jié)果仍有一項(xiàng)不合格，則判定該批次產(chǎn)品為不合格。8.5.2型式檢驗(yàn)項(xiàng)目全部合格，則判定為型式檢驗(yàn)合格。9包裝、標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸、貯存和保質(zhì)期9.1包裝包裝容器應(yīng)整潔、衛(wèi)生、無(wú)破損，并應(yīng)符合相應(yīng)的規(guī)定。9.2標(biāo)識(shí)包裝上應(yīng)有牢固清晰的標(biāo)識(shí)，內(nèi)容包括：生產(chǎn)廠名、生產(chǎn)（注冊(cè)）地址、產(chǎn)品名稱、產(chǎn)品使用說(shuō)明、商標(biāo)、規(guī)格、凈含量、生產(chǎn)日期、保質(zhì)期、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、生產(chǎn)許可證號(hào)、產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)。包裝儲(chǔ)運(yùn)標(biāo)識(shí)應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定。9.3運(yùn)輸運(yùn)輸工具應(yīng)清潔衛(wèi)生。不應(yīng)與有毒、有害、有腐蝕性和含有異味的物品混裝、混運(yùn)，應(yīng)避免受潮、受壓、日曬雨淋。裝卸時(shí)，應(yīng)輕拿輕放，不得直接鉤扎外包裝。9.4貯存和保質(zhì)期9.4.1本品應(yīng)儲(chǔ)存在通風(fēng)、干燥、避光處，不應(yīng)與有毒有害物質(zhì)混淆。9.4.2在規(guī)定的包裝、貯存條件下，原包裝保質(zhì)期為12個(gè)月。10質(zhì)量承諾與服務(wù)10.1本產(chǎn)品應(yīng)具有可追溯性。10.2產(chǎn)品質(zhì)量有異議的，應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)作出處理響應(yīng)，及時(shí)為用戶提供解決方案。10.3在正常運(yùn)輸、貯存的情況下，在產(chǎn)品保質(zhì)期內(nèi)屬產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題的，應(yīng)提供免費(fèi)退換貨服務(wù)。10.4根據(jù)客戶需求，及時(shí)免費(fèi)提供產(chǎn)品技術(shù)培訓(xùn)，開(kāi)展售后技術(shù)服務(wù)。10.5定期組織相關(guān)人員進(jìn)行跟蹤服務(wù)，及時(shí)了解用戶對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的信息反饋，做到及時(shí)采取措施，及時(shí)整改。T/ZZB0261—20177（規(guī)范性附錄）最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定方法A.1SOP原理不同濃度溶菌酶對(duì)定量穩(wěn)定狀態(tài)的指示菌在一定時(shí)間內(nèi)具有抑制作用，設(shè)置不同抑菌濃度，檢測(cè)指示菌是否大量繁殖（試管清澈或渾濁以判斷當(dāng)前實(shí)驗(yàn)樣品的抑菌能力。A.2儀器培養(yǎng)箱、濾頭（0.22μm）、顯微鏡、搖床、大量試管（具塞）、滅菌鍋、超凈臺(tái)、移液槍等。A.3試劑指示菌樣液、封裝好的培養(yǎng)基、制備好的樣品。A.4操作步驟A.4.1樣品制配A.4.1.1主要設(shè)備培養(yǎng)箱、濾頭（0.22μm）A.4.1.2溶解稱取2g粉樣，用20mL肉湯培養(yǎng)基溶解，在37℃環(huán)境中緩釋并維持1h以上，溶解稀釋倍數(shù)記為A。A.4.1.3過(guò)濾1使用0.22μm濾頭過(guò)濾除菌（室外操作、降低無(wú)菌過(guò)濾操作壓力）。A.4.1.4主動(dòng)稀釋由于樣品抑菌能力太強(qiáng)，需要用肉湯主動(dòng)稀釋，稀釋倍數(shù)記為B。A.4.1.5過(guò)濾2使用0.22μm濾頭過(guò)濾除菌（無(wú)菌操作，濾頭需要包裹滅菌）。A.4.2指示菌制備A.4.2.1主要設(shè)備T/ZZB0261—20178紫外分光光度計(jì)、顯微鏡、搖床。A.4.2.2操作需要在無(wú)菌環(huán)境下，取0.5mL的指示菌接種到50mL肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12h后得到一定濃度的指示菌母液，將該母液用肉湯培養(yǎng)基稀釋m倍，使OD600檢測(cè)值落入0.08～0.1之間，鏡檢計(jì)算得到當(dāng)前的指示菌濃度C（m），然后再稀釋n倍，使C（m）倍的指示菌濃度變成C（n）＝2×106，工作濃度為1×106。A.4.3培養(yǎng)基分裝A.4.3.1設(shè)備移液槍、大量試管、滅菌鍋。A.4.3.2操作準(zhǔn)備10只試管，各試管除第1根試管4.8mL外，其余9根試管均裝液（肉湯培養(yǎng)基）3.0mL，滅菌備A.4.4樣品梯度操作A.4.4.1設(shè)備超凈臺(tái)、移液槍等。A.4.4.2操作操作步驟如下：a)在無(wú)菌環(huán)境下，取制備好的樣品1.2mL加入第一根試管，則一號(hào)管當(dāng)前總體積為（1.2＋4.8=6）mL，移液槍反復(fù)吞吐3次（此處的稀釋倍數(shù)記為C1）；b)吸取第一根試管當(dāng)前混合液3mL進(jìn)入第二根試管，則第二根試管當(dāng)前總體積為（3＋3＝6）mL，移液槍反復(fù)吞吐3次；c)吸取第二根試管當(dāng)前混合液3mL進(jìn)入第三根試管，則第三根試管當(dāng)前總體積為（3＋3＝6）mL，移液槍反復(fù)吞吐3次；d)吸取第三根試管當(dāng)前混合液3mL進(jìn)入第四根試管，則第四根試管當(dāng)前總體積為（3＋3＝6）mL，移液槍反復(fù)吞吐3次；e)以此類推做到第九根試管，第九根試管多余的3mL棄掉；f)第十根試管保持不變，不添加待測(cè)樣品，作為對(duì)照組。），A.4.5指