代替DB23/230039001—88黑木耳菌種廠建造及黑木耳菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2001-09-30發(fā)布2001-11-30實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范了黑木耳菌種廠建造：丹種(一級(jí)種)分離：母種(級(jí)種)、原種(二級(jí)種)、栽培種(三級(jí)種)制作技術(shù)、菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其檢驗(yàn)方法：菌種的包裝與標(biāo)志等內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)代替(DB.2300B39001—88)黑木菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)簡化了母種(一級(jí)種〉分離技術(shù)，對菌種廠建造、母伸、原種、裁培種制作、菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等.都增加了叫多的先進(jìn)技術(shù)和經(jīng)驗(yàn).具有一定的科學(xué)性和實(shí)用推本標(biāo)準(zhǔn)采納了原標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)鍵內(nèi)容.并參考了1993年林業(yè)部提出，由黑、吉、遼、鄂四省協(xié)作起草小組所寫《黑木耳栽培行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》及《中國食用菌栽培學(xué)等書有美黑本耳栽培部分內(nèi)容，經(jīng)童新修改綜合制定成稿。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省林業(yè)廳提出并歸.本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黑龍江省林業(yè)廳森林經(jīng)營局本際準(zhǔn)主要起草人：單保林、李勝俊、李瑋、劉振華、宋克非本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的版本發(fā)布情況為：DB23η大3-200黑木耳菌種廠建造及黑木耳菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1范圍本際推規(guī)定了黑木耳菌種廣建造及黑木菌種生產(chǎn)裝術(shù)規(guī)程.本標(biāo)準(zhǔn)適用于黑龍江省黑本鈣菌種廣建造及黑木前種生產(chǎn)的單位與個(gè)人2名詞解釋2.1母種：用各種分離方法.經(jīng)純化培養(yǎng)成的純黑華試管游種、級(jí)2.2原種：舅母種接在不屑、谷粒等培養(yǎng)攀上，經(jīng)培養(yǎng)成竹菌體、稱原二級(jí)種)2.3栽培種：55原種護(hù)大蹭殖的菌、稱栽培種(三級(jí)種),2.4無菌操作技術(shù)：艾不帶菌作業(yè)。指操作的空樹、使的水質(zhì)、原特、以及人員操作過程.不準(zhǔn)帶有任：何雜菌2.5培養(yǎng)基：培養(yǎng)黑未耳崗種生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)2.6菌種分離：指食用菌特種(一級(jí)種)的分離、純化培養(yǎng)從紅物、手實(shí)作、菌絲體培養(yǎng)物甲取得純菌種的過程2.7孢子分離法：挑取孢(種子)、獲得純培養(yǎng)物的方!2.8耳片分離法：從具中挑取微絲體級(jí)織、獲得純培養(yǎng)物的方法2.9耳木分離法：又姆窗主分離法、以烈本耳生存的物6泰股·中.得培養(yǎng)物的方法3黑木耳菌種廠建造3.1廠地選擇：設(shè)在遠(yuǎn)離污染源300m以上，空氣新鮮羊，交通方便之處3.2廠內(nèi)條件：有水源、電源、供熱設(shè)備。3.3廠房結(jié)構(gòu)：磚本、轉(zhuǎn)混結(jié)構(gòu)，水泥地19,壁、大鵬丫色、3.4廣房布局：按生產(chǎn)工藝流程，分設(shè)配料究、天菌室、冷雄、緩沖字，拉、培養(yǎng)室、儲(chǔ)春字、試驗(yàn)室，各字既捐連接又騙寓。以!各室平由布局小意圖免圖：(北)滅菌室接種室沖培養(yǎng)室)配料寶試驗(yàn)室然室銷售室(南)圖1廠房平面布局示意圖DB23/T163—20013.5所需技術(shù)設(shè)備：以上各室技術(shù)要求及所需儀器、設(shè)備、用具見表1。表1技術(shù)要求及儀器、設(shè)備表名稱用途技術(shù)要求所需儀器、設(shè)備、用具備注配料室原種、栽培種培養(yǎng)基調(diào)配、分裝上下水道、水泥地而、拌料均勻、衛(wèi)生計(jì)量工具、拌料裝料工具(裝瓶裝袋機(jī))、拌料池(盤)、菌種瓶、塑料袋等作原種、栽培種配料裝料滅菌工培養(yǎng)基滅菌水源、電源、供蒸氣設(shè)備，通風(fēng)、T生高壓蒸氣滅菌鍋或滅菌效果好的十蒸鍋、換氣風(fēng)扇十蒸鍋用磚、水泥砌成冷卻至培養(yǎng)基滅菌后冷卻地面衛(wèi)生、室內(nèi)通風(fēng)、冷卻28℃以下安換氣風(fēng)扇、擺放籃、架冷卻后直入緩沖室供接種緩沖i接種前的隔離室、接種人員更衣、消毒更換白色工作服、帽、穿拖鞋、洗手消毒霧器、消毒藥品柜、拖鞋、毛巾、肥皂、安拉門準(zhǔn)備好盾，入字接種接種室無菌室(不帶菌作業(yè)室)無塵、無雜菌、密閉、肅靜6m2~8m2箱、接種工具、酒精燈、棉花、噴霧器、刀剪消毒藥品、廢物筒接種人員氣接完菌種，不準(zhǔn)中途離崗再入培養(yǎng)工培養(yǎng)菌種成熟能升、降溫、20℃~28℃、通風(fēng)、潔凈、消毒培養(yǎng)架光滑、消毒、測溫計(jì)、通風(fēng)、遮光設(shè)備高，便丁操作儲(chǔ)存空儲(chǔ)存菌種不變質(zhì)通風(fēng)、溫度1℃~5儲(chǔ)存架、換氣風(fēng)扇、遮光降溫設(shè)備、地面撒石灰粉專川試驗(yàn).室母種配料、裝料、良種、分析檢測絕對衛(wèi)生、有水源、電源、藥品柜、儀器拒、恒溫箱、電冰箱、鼎微鏡、天平、超凈工作臺(tái)、酒精燈、衛(wèi)生棉噴霧器、玻璃器Ⅲ、瓷盤、空調(diào)設(shè)備等科研之用4母種4.1母種的分離4.1.1孢子分離法：選當(dāng)年生無雜菌污染耳升晾干，以黑、厚、大為佳：經(jīng)無菌水沖洗兒次，用絲線將耳片腹面向下，另一端掛吊在裝有培養(yǎng)基的三角瓶LI部，加棉栓封11.在25℃~28℃溫箱中，接收抱子并培養(yǎng)成菌絲；經(jīng)鏡檢有鎖狀聯(lián)合后，再經(jīng)純化轉(zhuǎn)管培養(yǎng)即可，(培養(yǎng)基配方見4.2.1)4.1.2耳片分離法：選無雜菌污染、黑厚大鮮耳，經(jīng)無菌水沖洗兒次，在無菌條件下、切取耳肉中間層(髓層)菌肉，接入試管斜面培養(yǎng)基上，在25℃~28℃溫箱中培養(yǎng)長出菌絲體，再經(jīng)純化轉(zhuǎn)管即成。4.1.3耳木分離法：選產(chǎn)耳多、生長快、健壯、無雜菌的耳木晾干后，在無菌條件下，選取帶有菌絲的耳木片，移在平板培養(yǎng)基上，在25℃~28℃下培養(yǎng)，再經(jīng)提純，挑取健上菌絲接在斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成熟后，再擴(kuò)人繁殖。4.2母種的制作2DB23/TY3—20014.2.1培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、KH2PO43g、MgSO41.5g、水1000mL。4.2.2制作方法：馬鈴薯削皮挖去芽眼，稱200g,洗凈切成碎快，入鍋內(nèi)加水1000mL,加熱煮20min(水開后計(jì)時(shí)，切忌煮爛),取出用6層紗布過濾，取其注液：再入鍋煮、補(bǔ)足水1000mL,同時(shí)加入其它配料，邊加熱邊攪拌，使之溶解均勻，趁熱分裝試管中。防止管口沾上汁液，用棉栓封實(shí)管1。每7支～10支用膠皮圈扎成一捆，并在管口部用牛皮紙包好，防止棉栓受潮或脫落。4.2.3滅菌：用手提式高壓鍋，加水至淹沒支架，將試管直立裝入內(nèi)層鍋里，蓋嚴(yán)鍋蓋加熱，當(dāng)氣壓上升到0.035Mpa時(shí)，開排氣閥放冷空氣，待壓力指針下降到0℃,大量冷空氣排盡后、再關(guān)閉排氣氣閥門，繼續(xù)加溫，在115℃(0.069MPa)壓力下，滅菌30min即停止加熱，自然降溫，待指針下降到0℃后，打開鍋蓋，取出試管，趁熱放在桌面橫木棍(棒)上，擺成古試管長度1/3的斜而冷卻備用。4.2.4.1消毒：使用前先用紫外線燈照射接種箱(室)30min,再用2%米蘇兒噴霧降塵后，即可接種(必要時(shí)可用10mL/m3甲醛，加6g高錳酸鉀自燃熏蒸消毒)。4.2.4.2接種準(zhǔn)備：接種人員進(jìn)入緩沖室，更換工作服、帽、穿拖鞋，洗手帽，即可入接種室進(jìn)行接種。4.2.4.3接種方法：將母種和待接試管放進(jìn)接種箱內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈，用75%酒精棉擦洗雙手和接種工具，在燈火上方接種。拔掉棉栓后，用火焰封試管口。先將工具放在燈火上方燒燎片刻，并插入試管口內(nèi)冷卻片刻，迅速挑取一小塊菌絲體，接入另一支試管培養(yǎng)基中間，用火炸燎一下棉栓并封實(shí)管口，再接下一支。如用超凈工作臺(tái)接種，一般開機(jī)后30min,使作業(yè)區(qū)空氣凈化，方可接種、4.2.5培養(yǎng)：將接好種的試管，放入恒溫箱中25℃±I℃培養(yǎng)。4.2.6儲(chǔ)存：將長滿白色菌絲的試管，放入1℃~4℃冰箱中保存。5原種的制作5.1洗凈菌瓶：用小口頸白色透明瓶，先用堿水洗凈，再用清水沖洗控十備川。5.2培養(yǎng)基配方：闊葉木屑79%、新鮮麥麩或米糠20%、碳酸鈣或硫酸鈣1%。含水率60%左有5.3配制方法：清除木屑中雜物、樹皮，再將各種配料混合拌均勻，加水，使料中含水率均達(dá)60%左右。5.4裝瓶：將培養(yǎng)料及時(shí)裝入自瓶中2/3量，下松上緊，中間直扎一孔，加棉栓封瓶口。90min即好。如用常壓鍋，在100℃(上大氣時(shí)，用溫度計(jì)測溫記時(shí)),持續(xù)：7h～8h以上即可。5.6冷卻：搬進(jìn)冷卻室內(nèi)冷卻降溫28℃以下備用。5.7接種：問4.2.4。所不同的是，將母種接入原種瓶培養(yǎng)基中間孔穴里及孔穴口面上，加棉栓塞緊。5.8培養(yǎng)：將原種瓶放在培養(yǎng)室架子上，在25℃~28℃下培養(yǎng)15d～30d。每周檢查1次，淘汰污染者。5.9保存：放入5℃~8℃儲(chǔ)存室內(nèi)，在衛(wèi)生、十燥、無光環(huán)境下保存，6栽培種的制作6.1培養(yǎng)基配方：柯5.2。6.2配制方法：同5.3。6.3裝瓶(或塑料袋)6.3.2裝料量：何瓶(袋)裝0.9kg±0.1kg濕料。6.3.3裝料方法：用裝瓶裝袋機(jī)或人工裝料，壓實(shí)壓平至瓶頸下，中間扎一孔穴到瓶底，加棉栓塞緊。如用塑料袋，裝滿袋后，壓實(shí)壓平到袋子2/3處，中扎…孔接近袋底，上粗下細(xì)，加棉栓或?qū)Ｓ蒙w子封嚴(yán)袋口。DB23/T+63—20016.4滅菌：同5.5。6.5冷卻：同5.6。6.6接種方法：同5.7。所不同的是，原種瓶橫放小木架上，燈火封瓶口，挖出原種2人～3勺，接入瓶子或塑料袋扎眼里及眼上，加棉栓塞緊即可。6.7培養(yǎng)：同5.8。6.8保存：同5.9。7.1.1目測：斜面正面外觀，菌絲潔白，細(xì)毛狀，毛短整齊均勻，無拮抗線，無雜菌污染。長滿斜而時(shí)，背而常生米黃色或茶褐色色素，使培養(yǎng)基染成褐色或暗褐色。但絕對不準(zhǔn)有綠、黃、紅、黑、灰等色霉菌和粘狀細(xì)菌菌落。7.1.2鏡檢：在顯微鏡下觀察，菌絲體無色透明，有分枝和鎖狀聯(lián)合。7.2.1目測：菌絲體純白、整齊、粗壯、培養(yǎng)料內(nèi)外發(fā)育均勻。有時(shí)上方出現(xiàn)菌膜呈微褐色，或瓶內(nèi)出現(xiàn)膠質(zhì)原基，為淡褐色至黑褐色。但不準(zhǔn)有綠、黃、紅、黑、灰、等色的霉菌和粘狀物。培養(yǎng)料緊貼瓶壁，平底無積液，瓶壁完整衛(wèi)生。菌種容量：瓶裝原種為230g±10g。7.2.2鏡檢：菌絲體分枝，交織密集，無色透明，粗細(xì)不勻，有鎖狀聯(lián)合。7.2.3做出耳試驗(yàn)：每批產(chǎn)品隨機(jī)取樣，做出耳試驗(yàn)。檢查菌種出耳質(zhì)量及產(chǎn)耳