IICSCS01.040.65

CCSB04TB

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/NAIA×××-××××

枸杞原漿中類胡蘿卜素的測定

高效液相色譜法

DeterminationofcarotenoidsinWolfberryPulp

—Highperformanceliquidchromatography

××××-××-××發(fā)布××××-××-××實(shí)施

寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會發(fā)布

枸杞原漿中類胡蘿卜素的測定

高效液相色譜法

1范圍

本文件規(guī)定了枸杞原漿中類胡蘿卜素成分的高效液相色譜測定方法。

本文件適用于枸杞原漿中類胡蘿卜素成分：玉米黃質(zhì)、β-胡蘿卜素、β-隱黃素棕櫚酸酯、

玉米黃素雙棕櫚酸酯含量的測定，其他枸杞制品中類胡蘿卜素含量的測定也可以參考本方法。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所

有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要規(guī)定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣中類胡蘿卜素成分采用二氯甲烷提取，用0.1%BHT無水乙醇溶液稀釋并定容，微

孔濾膜過濾，高效液相色譜法測定，外標(biāo)法定量。

5試劑與材料

除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

5.1無水乙醇（C2H5OH）：色譜純。

5.2甲醇（CH3OH）：色譜純。

5.3乙腈（CH3CN）：色譜純。

5.4二氯甲烷（CH2Cl2）：色譜純。

5.5玉米黃質(zhì)（zeaxanthin，CAS號144-68-3）；β-胡蘿卜素（β-carotene，CAS號

7235-40-7）；β-隱黃素棕櫚酸酯（β-cryptoxanthinpalmitate，CAS號6081-47-6）；玉米

黃素雙棕櫚酸酯（zeaxanthindipalmitate，CAS號144-67-2）。純度≥95%，或經(jīng)國家

認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

5.60.1%BHT無水乙醇溶液：稱取0.1g二丁基羥基甲苯（BHT），以100mL無水乙醇

溶解，混勻。

5.7標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.7.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液

避光操作。分別準(zhǔn)確稱取適量的玉米黃質(zhì)、β-胡蘿卜素、β-隱黃素棕櫚酸酯、玉米黃

素雙棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.01mg），用二氯甲烷溶解，分別配制成300μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)

儲備溶液，-20℃下保存。

5.7.2標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

避光操作。分別取類胡蘿卜素物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，以0.1%BHT無水乙醇溶液（5.6）

作為溶劑，稀釋制成含玉米黃質(zhì)0.6μg/mL、β-胡蘿卜素0.3μg/mL、β-隱黃素棕櫚酸酯

3μg/mL、玉米黃素雙棕櫚酸酯80μg/mL的混合溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，-20℃下保存。

5.8濾膜：0.45μm，有機(jī)相。

5.9離心管：50mL，塑料。

6儀器與設(shè)備

6.1高效液相色譜儀（配紫外檢測器）。

6.2分析天平，感量0.00001g。

6.3超聲波清洗器。

6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。

6.5渦旋混合器。

6.6超純水機(jī)。

6.70.45μm濾膜，有機(jī)相。

7分析步驟

7.1試樣提取

取枸杞原漿樣品，搖勻，準(zhǔn)確稱取5g（精確至0.0001g），于50mL離心管中，精密

加入二氯甲烷20mL，以3000r/min渦旋混勻5min，再以4000r/min離心10min，取下層

溶液，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液2mL，置5mL量瓶中，用0.1%BHT無水乙醇

（5.6）稀釋至刻度，搖勻，待測定。

7.2液相色譜參考條件

a）色譜柱：YMCC30色譜柱5μm，4.6mm×250mm，或性能相當(dāng)者；

b）柱溫：25℃；

c）流速：1.0mL/min；

d）進(jìn)樣量：20μL；

e）波長：450nm

e）流動相：A相為甲醇：乙腈：水（81:14:5），B相為二氯甲烷，梯度洗脫條件見表

1；

表1梯度洗脫表

時間(min)流速(mL/min)VA(%)VB(%)

0.001.07030

20.001.05050

48.001.05050

50.001.07030

55.001.07030

7.3測定

取標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液分別注入液相色譜儀，測定相應(yīng)的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色

譜峰的保留時間和峰面積，對試樣溶液的色譜峰根據(jù)保留時間進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。平行

測定兩次。

7.4空白試驗(yàn)

除不加入試樣外，其他過程與試樣處理相同。

8結(jié)果計算和表達(dá)

結(jié)果按式（1）計算：

CVn

X……（1）

m

式中：

X——試樣中被測組分含量，單位為微克每克（μg/g）；

C——試樣溶液中被測物的濃度，單位為毫克每毫升（μg/mL）；

V——試樣提取體積，單位為毫升（mL）；

n——稀釋倍數(shù)；

m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。

測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

9精密度

在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的10%。

10色譜圖

色譜圖見附錄A。

附錄A

（資料性）

玉米黃質(zhì)、β-胡蘿卜素、β-隱黃素棕櫚酸酯、玉米黃素雙棕櫚酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖

A.1，試樣溶液色譜圖見圖A.2。

圖A.1玉米黃質(zhì)、