中草藥在防治海水魚“白點病”的應(yīng)用研究進展前言海水魚“白點病”的病原是刺激隱核蟲，它是一種纖毛類寄生蟲，能夠感染絕大多數(shù)海水硬骨魚類，如卵形鯧鲹、大黃魚、紅鰭東方鲀、石斑魚。在自然條件下，魚體聚集密度小，魚體身上的刺激隱核蟲數(shù)量往往不足以導(dǎo)致魚體患病，但隨著海水養(yǎng)殖業(yè)不斷發(fā)展、養(yǎng)殖技術(shù)不斷提高，人為養(yǎng)殖使魚體充分聚集在一起，魚體聚集密度是自然條件下的數(shù)倍，甚至數(shù)十倍，這為刺激隱核蟲提供了大量的宿主，加快了刺激隱核蟲的生活史，促進了刺激隱核蟲病的爆發(fā)。據(jù)相關(guān)文獻報道，2007-2008年期間，福建省沿海養(yǎng)殖地區(qū)曾爆發(fā)了多次刺激隱核蟲病，造成的后果十分嚴(yán)重，以羅源灣地區(qū)為代表，該地區(qū)有4.3萬網(wǎng)箱里的魚類全部被刺激隱核蟲感染，網(wǎng)箱內(nèi)的魚存活率不到20％，造成了巨大的經(jīng)濟損失。為了減小海水魚“白點病”帶來的經(jīng)濟損失，研究人員進行了相關(guān)的研究、發(fā)現(xiàn)中草藥具有抑殺刺激隱核蟲的效果，可用于養(yǎng)殖魚類病害的防治，但目前關(guān)于中草藥在海水魚“白點病”防治的應(yīng)用研究多數(shù)仍停留在體外篩選階段，體內(nèi)的實驗相對對較少，中草藥抑殺刺激隱核蟲的活性成分鑒定及其活性成分的作用機制研究仍十分欠缺。本文介紹了海水魚“白點病”的病原、危害以及中草藥在防治海水魚“白點病”中的應(yīng)用研究進展，以期為中草藥在防治海水魚“白點病”的后續(xù)研究提供依據(jù)和參考。

2刺激隱核蟲刺激隱核蟲是一種纖毛類寄生蟲，1884年Kerbert在星鯊和角鯊發(fā)現(xiàn)了類似淡水小瓜蟲的蟲體，這次發(fā)現(xiàn)被認(rèn)為是刺激隱核蟲的首次發(fā)現(xiàn)。后來人們在東京帝國大學(xué)漁業(yè)研究所水族館中發(fā)現(xiàn)了一種類似多子小瓜蟲的纖毛蟲類寄生蟲，可以感染45種以上的海水魚類，且引起的病灶很像淡水魚類的多子小瓜蟲病。之后有多位學(xué)者給這種寄生蟲命名，目前科學(xué)界廣泛采用的是1951年Brown的命名Cryptocaryonirritans。刺激隱核蟲也被稱為“咸水小瓜蟲”，主要生活在熱帶、亞熱帶地區(qū)，屬于原生動物門、前口綱、前管目、隱核蟲科、隱核蟲屬。其生活史包括滋養(yǎng)體、包囊前體、包囊和幼蟲四個階段，滋養(yǎng)體時期是營養(yǎng)生長階段，幼蟲感染魚體后，通過纖毛作用寄生在宿主體表或其他部位，如鰓，以宿主的體液、組織碎片或細(xì)胞為食。滋養(yǎng)體生長周期大約為一周，在4-5天的時候生長最旺盛。滋養(yǎng)體成熟后或遇到不良的環(huán)境條件，便會主動脫離宿主，形成自由活動的包囊前體，此時期稱為包囊前期，脫離宿主的時間一般在每天黎明前的黑暗時期。包囊前體纖毛脫落后，慢慢由自由運動狀態(tài)變成靜止?fàn)顟B(tài)，之后粘附在石頭或其他的物體上逐漸形成包囊。包囊在適宜的環(huán)境條件下，經(jīng)過多次不對稱二分裂孵化成新的子代幼體，最后包囊破裂，釋放出子代幼蟲，每個包囊平均產(chǎn)生292個幼蟲。從包囊釋放出的幼蟲在水中不攝食而是快速尋找新的宿主，從而進入下一輪生活史。近些年來，隨著科技的發(fā)展和技術(shù)的進步，我國海水養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展，同樣也出現(xiàn)了許多問題，如養(yǎng)殖環(huán)境惡化、藥物殘留、藥物濫用、水污染以及各種病害爆發(fā)，特別是刺激隱核蟲病的爆發(fā)阻礙了海水養(yǎng)殖業(yè)快速穩(wěn)定的發(fā)展，刺激隱核蟲能夠感染絕大多數(shù)的海水硬骨魚類，對海水養(yǎng)殖業(yè)造成的危害極大，且患病后魚體死亡率極高。據(jù)相關(guān)文獻報道，發(fā)病后石斑魚的死亡率最高達到50%，大黃魚的死亡率最高達75％，卵形鯧鲹的死亡率最高達到100％?；疾◆~體特征十分明顯，病魚體表各處出現(xiàn)許多的“小白點”，由于寄生蟲的刺激魚體發(fā)痛，使魚在石頭或其他物體上摩擦，從而導(dǎo)致魚鱗脫落、充血紅腫、體表潰爛，進而引發(fā)細(xì)菌性感染。刺激隱核蟲對鰓的危害同樣嚴(yán)重，鰓因寄生蟲刺激導(dǎo)致魚體分泌過多的黏液，使得魚體呼吸不暢、食欲大減，身體漸漸消瘦，免疫能力下降，最后導(dǎo)致魚體死亡。3中草藥在防治海水魚“白點病”中的應(yīng)用研究3.1中草藥體外抗刺激隱核蟲研究進展為了防治海水魚“白點病”，促進海水養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn)定發(fā)展，研究人員在尋找防治海水魚“白點病”的方法進行了相關(guān)研究。許多研究人員發(fā)現(xiàn)多種中草藥在體外作用的條件下具有良好抑殺刺激隱核蟲的效果，馬寧等探究了18種中草藥浸出液體外對刺激隱核蟲幼蟲及包囊的殺滅效果，發(fā)現(xiàn)檳榔、辣椒抑殺刺激隱核蟲效果最好，均能在1g/L的濃度下作用一定時間將幼蟲和包囊殺死，大蒜、生姜、蛇床子、百部、川楝子、苦參、烏梅、大黃、枳殼的殺蟲效果較弱,均能在50g/L的濃度下殺死幼蟲和包囊，且作用時間大部分都超過了30分鐘。劉婷婷等探究了15種中草藥體外對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體及幼蟲的殺滅效果，發(fā)現(xiàn)檳榔、苦參、大黃、貫眾在4.55-9.09g/L的濃度下作用一定時間，均能將滋養(yǎng)體、幼蟲殺死，黃芩、川楝子、枳殼在18.18g/L的濃度下作用一定時間，均可以殺死滋養(yǎng)體、幼蟲，對于同一種中草藥來說，殺死滋養(yǎng)體的時間所花費都要高于幼蟲的，說明滋養(yǎng)體比幼蟲更難殺滅。樊海平等研究發(fā)現(xiàn)，苦參、鶴芽草、鴉膽子、蓽澄茄、使君子、苦楝皮這6種中草藥在25-800mg/L對刺激隱核蟲無抑殺作用，貫眾、雙氫青蒿素、苦皮藤素這3種中草藥在25-800mg/L對刺激隱核蟲有抑殺作用，且貫眾對幼蟲的抑殺作用最好，在40mg/L的濃度下作用2小時能100%殺死幼蟲，貫眾濃度越高，殺死幼蟲的所需時間越短；苦皮藤素對幼蟲的抑殺作用一般，濃度要達到200mg/L的條件作用30分鐘，才使得幼蟲死亡率大于50%；雙氫青蒿素對刺激隱核蟲的抑殺作用最弱，在濃度為200mg/L、400mg/L、800mg/L作用3小時，才使得幼蟲的死亡率大于50%，處理的時間小于3小時不能觀察到幼蟲死亡。得出這三種中草藥體外殺滅刺激隱核蟲幼蟲的強弱順序：貫眾>苦皮藤素>雙氫青蒿素。江彪等探究了6種中草藥水提取物對刺激隱核蟲的體外殺滅效果，發(fā)現(xiàn)烏梅、檳榔、貫眾、石榴皮、青蒿、苦參這六種中草藥的水提取物對幼蟲和包囊均具有一定的殺滅作用，其中烏梅、檳榔、貫眾、石榴皮在濃度7.14mg/mL的條件下作用5分鐘，可將幼蟲100%殺死，六種中草藥在濃度7.14-28.57mg/mL均可以殺死包囊，且處理時間越久，對包囊的殺滅效果越好。這些研究表明，中草藥在體外條件作用下具有抑殺刺激隱核蟲效果，且中草藥作用時間越長，對刺激隱核蟲的抑殺作用也越強，對刺激隱核蟲滋養(yǎng)體、幼蟲、包囊的抑殺作用由強到弱的順序為幼蟲、滋養(yǎng)體、包囊，包囊由于具有硬質(zhì)外殼，中草藥難以進入包囊內(nèi)部發(fā)生作用，所以最難殺滅。檳榔、烏梅、貫眾和川楝子這四種中草藥的研究相對較多，在體外條件下都具有較好的抑殺刺激隱核蟲的效果，具有很大的應(yīng)用前景。3.2中草藥對海水魚“白點病”防治效果研究為了將中草藥更好的用于實際病害防治中去，研究人員在中草藥防治海水魚“白點病”方面進行探索，發(fā)現(xiàn)一些中草藥能夠用于防治刺激隱核蟲病。陳章群為防治紅鰭東方鲀的刺激隱核蟲病，用檳榔、苦參、苦楝三種中草藥，每畝(水位平均為1.2米)用量為三種中藥150g，熬成藥湯，然后全池潑灑，每天潑灑1次，連續(xù)潑灑3天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)患病魚體表面的白點消失，魚體恢復(fù)正常，治愈率達90％以上。王忠華等防治網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚刺激隱核蟲病，通過對網(wǎng)箱內(nèi)大黃魚口服復(fù)方中草藥“HD-2”（檳榔、川楝子、綿馬貫眾、大青葉、穿心蓮按一定的重量比混合而成）進行治療試驗，試驗組有A1、A2、B三組，A1和B試驗組口服用量為20g/kg，A2試驗組口服用量為10g/kg，并設(shè)置一對照組?？诜幬镆恢芎螅l(fā)現(xiàn)部分病魚恢復(fù)正常，病情得到控制，A1、A2、B三個試驗組大黃魚的平均死亡數(shù)量均呈下降狀態(tài)，與對照組的差異顯著，三個試驗組的魚體表面和鰓上的寄生蟲數(shù)量也大大減少，表明復(fù)方中草藥“HD-2”可用于刺激隱核蟲病的防治。崔曉翠等為防治大黃魚刺激隱核蟲病，通過對大黃魚藥浴、口服復(fù)方中草藥“HD-2”的藥用方式進行治療試驗，試驗組有A、B、C三組，A組：按20g/kg飼料劑量添加“HD-2”藥粉口服,同時按100mg/L濃度的HD-2”進行藥?。籅組：按20g/kg飼料劑量添加“HD-2”藥粉口服,同時按50mg/L濃度的HD-2”進行藥??；C組：按20g/kg飼料劑量添加“HD-2”藥粉口服,無藥浴，另設(shè)一對照組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A組、B組大黃魚體表“白點”較少，C組略多，對照組魚體體表布滿“白點”；12天后A組不在產(chǎn)生包囊，B組和C組產(chǎn)生少量包囊，D組仍然產(chǎn)生大量包囊；14天后試驗組魚體存活率較高，對照組魚體全部死亡。表明藥用方式不管是口服，還是藥浴，對刺激隱核蟲病都具有防治效果。江彪等探究了在亞致死劑量（30000個/尾）和致死劑量的幼蟲(100000個/尾)攻毒石斑魚后烏梅對其死亡率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，亞致死劑量攻毒石斑魚在烏梅的作用下，魚鰓上的滋養(yǎng)體數(shù)量減小，滋養(yǎng)體逐漸萎縮，與對照組有顯著差異；亞致死劑量攻毒石斑魚后在烏梅的作用下，石斑魚的成活率上升，而對照組的魚體全部死亡。表明烏梅對刺激隱核蟲病有治療作用，可用于刺激隱核蟲病的防治。焦愷強等通過為患病大黃魚口服復(fù)方中草藥“HD-2”來探究其對刺激隱核蟲病的防治效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)口服復(fù)方中草藥“HD-2”試驗組患病大黃魚產(chǎn)生的包囊數(shù)量在減少，而對照組一直在增加；試驗組的患病大黃魚體表、鰓上的“白點”逐漸萎縮變小，體表“白點”數(shù)量在下降，而對照組的“白點”卻越來越多，越長越大，逐漸布滿全身。試驗組的患病魚體逐漸恢復(fù)正常，有較高的存活率，而對照組魚體攝食不正常，免疫力低，死亡率高達83.3%。這些研究表明，中草藥能夠用于病害的防治過程，并且能取得較好的效果。中草藥可以提高患病魚體的存活率，使魚體恢復(fù)攝食，提高魚體免疫力，使魚體表及鰓上的滋養(yǎng)體數(shù)量減少，并且可抑制包囊的產(chǎn)生，避免魚體二次感染。中草藥的用藥方式可通過藥用和口服，口服效果一般高于藥浴的，因為口服可以提高魚體免疫力，抑制患病魚體內(nèi)部的寄生蟲，而藥浴殺滅的大多數(shù)是魚體表的寄生蟲，不能殺滅體內(nèi)的寄生蟲。3.3中草藥抗刺激隱核蟲活性成分鑒定及其作用機制研究進展目前在探究中草藥抗刺激隱核蟲活性成分鑒定及其作用機制方面的應(yīng)用研究較少，只有少量這方面的研究報道。崔曉翠通過給大黃魚投喂復(fù)方中草藥“HD-2”的方式來探究其對大黃魚溶菌酶(LZM)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)等非特異性免疫指標(biāo)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)口服復(fù)方中草藥“HD-2”可使大黃魚體內(nèi)的溶菌酶、總超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶活性升高，再使用藥物后的14-21天酶活性達到最高，表明口服中草藥可提高魚體非特異性免疫酶的活性。江彪等通過給石斑魚投喂含烏梅的飼料來探究烏梅對石斑魚的增重、溶菌酶活性、補體旁路途徑溶血活性的影響，試驗組為投喂含烏梅的飼料，對照組為投喂不同飼料。結(jié)果發(fā)現(xiàn)14天后試驗組的石斑魚增重大于對照組；投喂試驗組的石斑魚溶菌酶活性顯著高于對照組；投喂試驗組的石斑魚補體旁路途徑溶血活性與對照組的無顯著差異。表明烏梅具有一定促生長作用，且能提高魚體溶菌酶的活性。研究發(fā)現(xiàn)，烏梅含有多達24種氨基酸和多種脂類、糖類、甾醇類、生物堿等多種有效成分，對機體免疫功能具有促進作用。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)烏梅所含的琥珀酸、枸櫞酸等也能夠中和分解相應(yīng)的毒素，防止毒素?fù)p傷機體。以上研究表明，中草藥可能通過兩方面來抑殺刺激隱核蟲。一方面，中草藥能夠促進魚體攝食，提高魚體自身免疫力，使得魚體對刺激隱核蟲的抗性增強；另一方面，中草藥本身含有純天然殺蟲物質(zhì)，如生物堿，能夠很好的將刺激隱核蟲殺死。4結(jié)論與展望中草藥在防治海水魚“白點病”方面的研究并不完善，目前研究仍存在多方面的不足：（1）中草藥在防治海水魚“白點病”方面的研究主要是中草藥在體外抑殺刺激隱核蟲的實驗，體內(nèi)實驗很少；（2）中草藥中含有多種成分，但是抗刺激隱核蟲的活性成分人們還不太清楚，其發(fā)揮作用的過程人們也不了解；（3）中草藥在應(yīng)用到實際生產(chǎn)防治病害過程中的毒副作用、藥物殘留及人體健康風(fēng)險評估不全面；（4）其他具有抗刺激隱核蟲的中草藥沒有得到合理開發(fā)。隨著中草藥越來越受到研究人員在防治病害方面的重視，需要開展更多的研究計劃。開展中草藥體內(nèi)抑殺刺激隱核蟲實驗和其他中草藥抑殺刺激隱核蟲實驗，研究清楚中草藥抗刺激隱核蟲活性成分及其作用機制，綜合評估各種中草藥的防治效果，包括中草藥使用后的毒副作用、藥物殘留、環(huán)境污染及對人體危害等方面。

致謝大學(xué)四年時間過得飛快，回想這四年，我心中充滿了感激之情，從我剛開始踏入海南大學(xué)的校門起，就得到了身邊眾人給予的關(guān)心、幫助、激勵與支持。沒有他們，就沒有今天的我，因此，我要向他們表示衷心的感謝！衷心感謝我的指導(dǎo)老師郭偉良教授，感謝他在百忙之中，依舊抽出大量的時間對我的畢業(yè)論文進行指導(dǎo)，從論文的選題開始，郭老師就一直關(guān)注實驗的進展，當(dāng)我在實驗過程中和畢業(yè)論文中遇到困難，也總能及時的得到老師的幫助、支持，讓我一次次在失敗中重拾信心、度過了一個又一個難關(guān)。在此，我要衷心地對郭老師說聲，謝謝！同時還要感謝那些在我完成畢業(yè)論文過程中給予我?guī)椭钠渌蠋?、師兄師姐、舍友和同學(xué)，他們不僅在我遇到困難時給我寶貴的意見，更在我實驗失敗、迷失方向時給予我堅定的信心和勇氣讓我一次次走出困境，走向成功，也讓我學(xué)會了該怎樣去面對學(xué)習(xí)、生活中的遇到的困難。在此，我要衷心地對他們說聲，謝謝！

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