(19)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局(65)同一申請(qǐng)的已公布的文獻(xiàn)號(hào)(73)專(zhuān)利權(quán)人懿奈(上海)生物科技有限公司地址200021上海市靜安區(qū)南京西路818號(hào)808室專(zhuān)利權(quán)人德膚科(上海)生物科技有限公司(72)發(fā)明人鐘燁王勇恒胡璠李欽源葉睿杜樂(lè)(74)專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)天津知川知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙)12249專(zhuān)利代理師陳麗萍A61K8/9789(2017.01)A61K8/60(2006.01)A61K36/40(2006.01)A61K31/7048(2006.01)andpurificationofiridoidglycosidesChromatogrRelatTechnol.2014,第36卷(第8期),983-999.andpurificationofiridoidglycosidesChromatogrRelatTechnol.2014,第36卷(第8期),983-999.審查員李小晶一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物及其制本發(fā)明提供一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物及其制備方法、應(yīng)用，涉及植物天然產(chǎn)物技術(shù)領(lǐng)域。所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物包括為10%~12%。本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物具有優(yōu)異的抗炎作用，并能促進(jìn)皮膚緊致度、減少皺紋，可廣泛用于化妝品及護(hù)膚品制備。本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物的制備方法通過(guò)乙醇萃取與酶解處理高效提取山茱萸果中6821.一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物包括莫諾苷、馬錢(qián)子苷、獐牙菜苷，其中莫諾苷的含量為10%~12%,馬錢(qián)子苷的含量為10%~30%,獐牙菜苷的含量為2%~6%;所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物采用如下方法制備：(1)將乙醇溶液調(diào)節(jié)pH值至4~5的范圍后加入山茱萸果，混合均勻得到待提取混合物；(2)向所述待提取混合物中加入包含果膠酶和纖維素酶的復(fù)合酶，進(jìn)行梯度溫度酶解；酶解完成后經(jīng)滅酶、分離及濃縮得到粗品提取物；所述梯度溫度酶解包括在45~55℃下保持0.5~1.5h,隨后在65~75℃保持0.5~1.5h;所述復(fù)合酶中果膠酶與纖維素酶的質(zhì)量比為1:(1~3);所述復(fù)合酶的添加量為所述山茱萸果質(zhì)量的0.3%~0.5%;(3)所述粗品提取物經(jīng)柱層析得到所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物；所述步驟(3)采用聚酰胺層析柱層析純化，上樣流速為0.5~10倍柱體積/小時(shí)，0.5~10倍柱體積純化水洗脫，洗脫流速為0.5~10倍柱體積/小時(shí)，于上樣開(kāi)始收集純化水洗脫液并濃縮，得到所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物的pH范圍為2.5~6.5;所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物的相對(duì)密度為3.根據(jù)權(quán)利要求1所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述乙醇溶液的濃度為60%~80%;和/或，所述乙醇溶液與山茱萸果的料液比為1:(8~15)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物，其特征在于，所述滅酶操作的溫度為85~95℃,滅酶時(shí)間為至少20min;和/或，所述步驟(2)中的分離操作在40~50℃下進(jìn)行；和/或，所述濃縮操作為濃縮器濃縮或旋蒸濃縮。5.一種權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物在制備抗衰老的化妝品中的應(yīng)用。3一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物及其制備方法、應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及植物天然產(chǎn)物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物背景技術(shù)[0002]環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物是一類(lèi)具有雙重生物活性的有機(jī)物，既對(duì)某些植物物種起防御作用，如地黃屬植物中環(huán)烯醚萜苷類(lèi)對(duì)尖鐮孢菌的防御反應(yīng)，也對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生多種藥理作用，等生物活性，是許多中藥的有效成分。由于環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)的特殊性，無(wú)法通過(guò)化學(xué)合成大批量生產(chǎn)，因此從植物中提取是獲取這類(lèi)化合物的主要方式。[0003]山茱萸(CornusofficinalisSieb.etZucc.,CO)是山茱萸科(Cornaceae.)山西、四川等地。據(jù)中國(guó)藥典記載秋末初果皮變紅時(shí)采收果實(shí)，用文火烘或置沸水中略燙后，及時(shí)除去果核，干燥即可；山茱萸中含有多種環(huán)烯醚萜類(lèi)成分(如莫諾苷、馬錢(qián)苷等)且含量較為豐富。[0004]莫諾苷是一種環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，在接骨木屬植物、白花敗醬屬植物、山茱萸果屬植物中都有分布。關(guān)于莫諾苷的研究涉及多方面技術(shù)領(lǐng)域：有研究發(fā)現(xiàn)莫諾苷可減少神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激、減少神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，同時(shí)也具有促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞增殖、遷移的作用，更深入的研究發(fā)現(xiàn)其具有改善神經(jīng)疼痛的效果。作為一種潛在的藥物分子，莫諾苷在肝臟、心臟疾病治療過(guò)程中通過(guò)其減少炎癥因子釋放而發(fā)揮抗炎效果；同時(shí)在糖尿病的治療方面，具有減少糖基化反應(yīng)，減少內(nèi)皮細(xì)胞頭痛行的效果，也具有通過(guò)調(diào)節(jié)糖的攝入來(lái)起到降血糖的效果；在與骨相關(guān)的疾病治療過(guò)程中，促進(jìn)骨髓細(xì)胞的增殖來(lái)抑制骨細(xì)胞的凋亡。[0005]在皮膚科學(xué)領(lǐng)域/化妝品領(lǐng)域，環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物成分因其良好的水溶性，顯著的抗炎作用被認(rèn)為是一類(lèi)具有綜合優(yōu)勢(shì)的舒緩成分。莫諾苷作為一種比較具有特色的環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，目前在皮膚科學(xué)和化妝品領(lǐng)域研究結(jié)果還是集中在抗炎、促進(jìn)細(xì)胞增殖等方面，而在皮膚科學(xué)層面的研究?jī)H涉及到了頭皮防脫方面，仍具有廣闊的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。發(fā)明內(nèi)容[0006]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明公開(kāi)一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物及其制備方法、應(yīng)用，本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物中莫諾苷的含量達(dá)到了10%以上，體現(xiàn)出顯著的增加皮膚緊致度、減少皺紋的效果。[0007]為了實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，一方面，本發(fā)明提出一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物，所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物包括莫諾苷、馬錢(qián)子苷、獐牙菜苷，其中莫諾苷的含量為4[0008]本發(fā)明研發(fā)團(tuán)隊(duì)通過(guò)大量探索實(shí)驗(yàn)及分析發(fā)現(xiàn)，上述技術(shù)方案富含莫諾苷的山茱萸果提取物可通過(guò)參與到膠原的降解過(guò)程、基質(zhì)金屬蛋白激活過(guò)程、以及視黃酸代謝以及炎癥因子相關(guān)通路以發(fā)揮緊致抗皺的功效，可將富含莫諾苷的上述山茱萸果提取物應(yīng)用于抗炎和/或抗衰老的化妝品或護(hù)膚品中，這是現(xiàn)有技術(shù)中未公開(kāi)的。[0009]進(jìn)一步地，所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物中馬錢(qián)子苷的含量為10%~30%、獐牙菜苷的含量為2%~6%,本發(fā)明實(shí)施例示出了所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物的抗皺功效。[0010]進(jìn)一步地，所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物的pH范圍為2.5~6.5;[0011]更進(jìn)一步地，所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物的相對(duì)密度為1.025~1.125。[0012]另一方面，本發(fā)明提出了一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物的制備方法，該方法[0013](1)將乙醇溶液調(diào)節(jié)pH值至4~5的范圍后加入山茱萸果，混合均勻得到待提取混合[0014](2)向所述待提取混合物中加入包含果膠酶和纖維素酶的復(fù)合酶，進(jìn)行梯度溫度酶解；酶解完成后經(jīng)滅酶、分離及濃縮得到粗品提取物；所述梯度溫度酶解包括在45~55℃下保持0.5~1.5h,隨后在65~75℃保持0.5~1.5h;[0015](3)所述粗品提取物經(jīng)柱層析得到所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物。[0016]上述技術(shù)方案通過(guò)乙醇的萃取分離、結(jié)合特定的酶解處理以分解細(xì)胞壁，有利于提高山茱萸果活性組分的提取率；此外，上述技術(shù)方案通過(guò)調(diào)節(jié)體系的pH值并采用梯度溫度進(jìn)行酶解，可獲得莫諾苷含量更高的山茱萸果粗品提取物，進(jìn)一步通過(guò)柱層析提純使得本發(fā)明技術(shù)方案可獲得莫諾苷含量在10%以上的山茱萸果提取物。[0017]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述乙醇溶液的濃度可選為60%~80%,可選60%、65%、70%、75%、80%,但不限于所列舉的范圍，上述數(shù)值范圍內(nèi)其他未列舉的數(shù)值同樣適用于本發(fā)明，適宜的乙醇濃度有助于打破山茱萸果的細(xì)胞壁，使其蘊(yùn)含的活性組分更容易溶出。在本發(fā)明的一些可選示例中，所述乙醇溶液的濃度可選為60%。需注意，本發(fā)明所述乙醇溶液的濃度為體積分?jǐn)?shù)濃度。[0018]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述乙醇與山茱萸果的料液比可選為1:(8~15),比如未列舉的數(shù)值同樣適用于本發(fā)明，通過(guò)乙醇與山茱萸果用量的優(yōu)化可提高山茱萸果中活性組分的提取效率，同時(shí)可降低乙醇的投入。在本發(fā)明的一些可選示例中，所述乙醇與山茱萸果的料液比可選為1:10。需注意，本發(fā)明所述料液比為質(zhì)量體積比；本發(fā)明所用乙醇溶液可在后續(xù)分離操作中回收并循環(huán)套用。[0019]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述復(fù)合酶的添加量可選為所述山茱萸果質(zhì)量的0.3%未列舉的數(shù)值同樣適用于本發(fā)明，添加合適用量的復(fù)合酶可有效地分解細(xì)胞壁，提高萃取[0020]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述復(fù)合酶中果膠酶與纖維素酶的質(zhì)量比可選為1:(11.28、1:3,但不限于所列舉的范圍，上述數(shù)值范圍內(nèi)其他未列舉的數(shù)值同樣適用于本發(fā)明；基于大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，特定配比的復(fù)合酶可在山茱萸果提取中發(fā)揮更佳的酶解效果。在5本發(fā)明的可選示例中，所述復(fù)合酶中果膠酶與纖維素酶的質(zhì)量比為1:1。[0021]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述滅酶操作的溫度可選為85~95℃,可選85℃、86℃、圍內(nèi)其他未列舉的數(shù)值同樣適用于本發(fā)明；滅酶時(shí)間可選為至少20min,可選20min、25min、列舉的數(shù)值同樣適用于本發(fā)明，本發(fā)明中通過(guò)提升體系溫度進(jìn)行滅酶操作，無(wú)需額外添加化學(xué)試劑即可快速高效地終止酶活性，同時(shí)也可防止提取物中的有效成分被酶進(jìn)一步分[0022]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述步驟(2)中的分離操作可選在40~50℃下進(jìn)行，可未列舉的數(shù)值同樣適用于本發(fā)明，在實(shí)際工藝過(guò)程中，可選在滅酶操作完成后將體系的溫度降低至40~50℃以保持提取物中組分的活性，可選通過(guò)離心操作收集濾液，并棄除濾渣。[0023]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述濃縮操作可選為濃縮器濃縮或旋蒸濃縮，具體操作過(guò)程中，將分離操作得到的濾液加入濃縮器中進(jìn)行濃縮得到上清液，所述上清液即為粗品提取物。本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員可選將分離操作得到的濾液分批次進(jìn)行濃縮，比如分為3~5次進(jìn)行濃縮以提高濃縮操作的效率，在實(shí)際操作中可根據(jù)需要選擇分批濃縮的次數(shù)。[0024]在本發(fā)明的進(jìn)一步示例中，所述步驟(3)采用聚酰胺層析柱層析純化，上樣流速為0.5-10倍柱體積/小時(shí)，0.5-10倍柱體積純化水洗脫，洗脫流速為0.5-10倍柱體積/小時(shí)，于上樣開(kāi)始收集純化水洗脫液并濃縮，得到所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物。[0025]需注意，本發(fā)明還包括對(duì)山茱萸果藥材的初步處理。具體地，可選將山茱萸果藥材[0026]本發(fā)明實(shí)施例示出采用上述制備富含莫諾苷的山茱萸果提取物的制備方法所制得山茱萸果提取物中莫諾苷的含量在10%以上。本發(fā)明進(jìn)一步的探索實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了其優(yōu)異的[0027]另一方面，本發(fā)明提出了上述富含莫諾苷的山茱萸果提取物以及采用上述制備方法制得的富含莫諾苷的山茱萸果提取物在制備化妝品或護(hù)膚品中的應(yīng)用。[0028]進(jìn)一步地，所述化妝品或護(hù)膚品為抗炎和/或抗衰老的化妝品或護(hù)膚品。[0029]更進(jìn)一步地，所述化妝品或護(hù)膚品為預(yù)防或改善皺紋的化妝品或護(hù)膚品。[0030]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物相比純品莫諾苷具有更佳抗炎作用，且能夠促進(jìn)提升皮膚緊致度、減少皺紋，可廣泛用于化妝品及護(hù)膚品制備。本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物的制備方法通過(guò)乙醇萃取與酶解處理高效提取山茱萸果中的活性組分、結(jié)合柱層析得到莫諾苷富集的山茱萸果提取物；本發(fā)明制備方法流程簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)。附圖說(shuō)明[0031]構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分的說(shuō)明書(shū)附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：[0032]圖1示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物的210nm紫外吸收6[0033]圖2示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物的254nm紫外吸收[0034]圖3示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物緊致抗皺靶點(diǎn)交集[0035]圖4示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物緊致抗皺靶點(diǎn)蛋白metalloproteinase-1,中文全稱(chēng)為基質(zhì)金屬蛋白酶1;TP53的全稱(chēng)為Cellulartumor蛋白酶13;SIRT1的全稱(chēng)為NAD-dependentproteindeacetylasesirtuin-1,中文全稱(chēng)為煙酰胺腺嘌呤二核苷酸依賴(lài)性蛋白去乙酰化酶sirtuin-1;RARB的全稱(chēng)為RetinoicacidC;P2RX7的全稱(chēng)為P2Xpurinoceptor7,中文全稱(chēng)為P2X嘌呤受體7;GLB1的全稱(chēng)為Beta-dehydrogenase,中文全稱(chēng)為甘油醛-3-磷酸脫氫酶；PTGS2的全稱(chēng)為ProstaglandinG/Hsynthase2,中文全稱(chēng)為前列腺素G/H合成酶2;PTPN2的全稱(chēng)為T(mén)yrosine-protein稱(chēng)為Retinoicacidreceptorgamma,中文全稱(chēng)為視黃酸受體G;HSD11B2的全稱(chēng)為11-為HypoxanthinePhosphoribosyltrans[0037]圖6示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物Reactome通路富集[0038]圖7示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物與莫諾苷抗炎功效[0039]圖8示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物與莫諾苷對(duì)彈性蛋7茱萸提取物-0.5%及同濃度莫諾苷純品進(jìn)行比較(“*”代表p<0.05,“**”代表p<0.01;“***”代表p<0.001);誤差棒代表3個(gè)重復(fù)樣品平均值±均方差；[0040]圖9示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物與莫諾苷對(duì)視黃酸受體RARB表達(dá)的對(duì)比圖；注：空心圓代表樣品重復(fù)次數(shù)(三個(gè)空心圓即代表該樣品在對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)中重復(fù)了3次),“>*”和“#”代表顯著性分析，“”代表和空白對(duì)照組和實(shí)施例1-山茱萸提取物-0.5%及同濃度莫諾苷純品進(jìn)行比較(“”代表p<0.05,***”代表p<0.001);誤差線(xiàn)誤差棒代表3個(gè)重復(fù)樣品平均值±均方差；[0041]圖10示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物對(duì)TGF-β的促進(jìn)作用；注：空心圓代表樣品重復(fù)次數(shù)(三個(gè)空心圓即代表該樣品在對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)中重復(fù)了3次),“*”和“#”代表顯著性分析，“”代表和空白對(duì)照組和不同濃度實(shí)施例1-山茱萸提取物誤差棒代表3個(gè)重復(fù)樣品平均值±均方差；[0042]圖11示出本發(fā)明實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物對(duì)III型膠原的促進(jìn)作用；注：空心圓代表樣品重復(fù)次數(shù)(三個(gè)空心圓即代表該樣品在對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)中重復(fù)了3差線(xiàn)誤差棒代表3個(gè)重復(fù)樣品平均值±均方差。具體實(shí)施方式[0043]為了便于理解本發(fā)明，下面將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述，給出了本發(fā)明的較佳實(shí)施例。但應(yīng)當(dāng)理解為這些實(shí)施例僅僅是用于更詳細(xì)說(shuō)明之用，而不應(yīng)理解為用以任何形式限制本發(fā)明，即并不意于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。[0044]除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明創(chuàng)造所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。以下實(shí)施例中所用的試驗(yàn)試劑，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)生化試劑；實(shí)施例[0045]一種富含莫諾苷的山茱萸果提取物的制備方法，具體包括以下步驟：[0046](1)稱(chēng)取山茱萸果藥材(產(chǎn)地：陜西秦嶺),液比稱(chēng)取1Kg60%乙醇，調(diào)節(jié)pH至5后投入提取罐中；再加入山茱萸果粉末，攪拌混合均勻得到待提取混合物。[0047](2)向待提取混合物中加入山茱萸果干重0.5%的果膠酶和纖維素酶，其中果膠酶8與纖維素酶的質(zhì)量比為1:1;先恒溫50℃循環(huán)提取1h,再升溫至70℃提取1h;隨后升溫至90℃滅酶30min得到粗提液；再降溫至50℃,將粗提液放出至儲(chǔ)液桶中；將粗提液進(jìn)行離心，收集濾液并棄除濾渣；將濾液分3次加入濃縮器中濃縮，隨后離心得到粗實(shí)施例中循環(huán)提取是指通過(guò)攪拌、搖晃等操作促進(jìn)物料與溶劑充分接觸的操作。[0048](3)將粗品提取物用純水稀釋?zhuān)尤胙b有特制的聚酰胺填料層析柱進(jìn)行層析，再用純水洗脫；將收集的洗脫液加入濃縮器中濃縮3次，隨后離心得到富含莫諾苷的山茱萸果提取物。所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物的pH值為2.5~6.5,相對(duì)密度為1.025~1.125。[0050]本實(shí)施例所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物可作為化妝品級(jí)別原料，但在化妝萸果提取物核心組分之一的莫諾苷進(jìn)行了標(biāo)定，作為主要的質(zhì)量參考物質(zhì)。基于此，本實(shí)施例檢測(cè)了所制得山茱萸果提取物中的莫諾苷含量；具體測(cè)定方法如下：180μL50%甲醇-水稀釋10倍。(2)取10μL稀釋后的倍。(3)用注射器吸取200μL的上清液，加入內(nèi)標(biāo)(L-2-氯苯丙氨酸),渦旋震蕩10s,轉(zhuǎn)移到[0052]2、本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-ESI-MS/MS分析方法，對(duì)目標(biāo)代謝物進(jìn)行定性定量檢測(cè)，具體分析條件和分析方法如下：(1)色譜方法包括進(jìn)樣量：5μL;流動(dòng)相：A(0.1%甲酸-水溶液),B(乙腈);流速：0.35mL/min;(2)梯度洗脫方法(GradientElutionProcedures):0minA/B(95:5,V/V),1.0minA/B(95:5,V/V),3minA/B(10:90,V/V),4.5min4.51minA/B(95:5,V/V),5minA/B(95:5,V/V);(3)質(zhì)譜方法包括氣簾氣：55(psi);碰撞5500V;負(fù)離子噴霧電壓：-4500V;離子源溫度：500℃;柱溫：40℃;噴霧氣(Gas1):50(psi);[0053]經(jīng)測(cè)定，實(shí)施例1所制得所述富含莫諾苷的山茱萸果提取物中樣品1-1的莫諾苷的含量為10%,樣品1-2的莫諾苷質(zhì)量含量為10.9%,樣品1-3的莫諾苷含量為11%。[0054]進(jìn)一步地，本實(shí)施例測(cè)試了實(shí)施例1所制備富含莫諾苷的山茱萸果提取物的功效。[0056]借助高分辨率液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀對(duì)實(shí)施例1的樣品1-1所制備富含莫諾苷的山茱萸果提取物進(jìn)行全成分分析，以識(shí)別出莫諾苷以外的其他成分。具體分析步驟如下：g/mL),渦旋震蕩1min;冰水浴超聲提取20min;離心10min(14000rpm,4℃);取200μL上清液裝入帶內(nèi)襯管的LC-MS進(jìn)樣小瓶中進(jìn)行分析。[0059]1.2液相色譜-質(zhì)譜條件[0060]本次實(shí)驗(yàn)的分析儀器為ACQUITYUPLCI-ClassHF超高效液相串聯(lián)QE高分辨質(zhì)譜儀組成的液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。9時(shí)間0525480055[0065]質(zhì)譜條件：[0066]離子源：HESI;樣品質(zhì)譜信號(hào)采集分別采用正負(fù)離子掃描模式。數(shù)據(jù)采集模式：表2參數(shù)負(fù)離子噴霧電壓(伏)毛細(xì)管溫度(℃)輔助氣體加熱器溫度(℃)鞘氣流速(任意單位)輔助氣體流速(任意單位)8質(zhì)量范圍(質(zhì)荷比)全掃描模式下最高分辨率母離子碎裂后產(chǎn)生的子離子分析時(shí)的分辨率離子碎裂的標(biāo)準(zhǔn)化碰撞能量[0068]本實(shí)施例中對(duì)實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物進(jìn)行全成分分析鑒定，包括：1)通過(guò)分析測(cè)定210nm(結(jié)果如圖1)和254nm(結(jié)果如山茱萸果提取物含有皂苷類(lèi)成分以及苯環(huán)、雙鍵等基本結(jié)構(gòu)；2)基于高精準(zhǔn)的質(zhì)譜分析和自建標(biāo)準(zhǔn)品化合物數(shù)據(jù)庫(kù)等技術(shù)平臺(tái)，對(duì)山茱萸果提取物的全成分進(jìn)行定性分析，以峰面積為半定量依據(jù)(相對(duì)含量依據(jù)),得到核心組成馬錢(qián)子苷，獐牙菜苷的相對(duì)含量。[0071]將上述全成分的所得化合物以mol2格式收集藥物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并借助http://www.swisstargetprediction.ch)數(shù)據(jù)庫(kù)并將屬性設(shè)置為“Homosapiens”以得到山茱萸果提取物全成分潛在靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)結(jié)果，然后對(duì)所獲得的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行除重匯總。[0072]2.2抗皺靶點(diǎn)的挖掘與核心靶點(diǎn)的篩選[0073]將“1”項(xiàng)中的數(shù)據(jù)和內(nèi)部梳理皮膚抗皺相關(guān)靶點(diǎn)上傳至互聯(lián)網(wǎng)在線(xiàn)Venny2.1.0工具平臺(tái)(https://b.csic.es/tools/ven-ny/),獲取共同靶點(diǎn)并繪制Venn圖(如圖3)。[0074]2.3蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖(PPI)構(gòu)建[0075]STRING數(shù)據(jù)庫(kù)()是一個(gè)在線(xiàn)檢索已知的蛋白互作關(guān)系的數(shù)據(jù)庫(kù)，將山茱萸果提取物交集到的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入其中，設(shè)定生物種類(lèi)為“Homosapiens”且交互分?jǐn)?shù)>0.9并隱藏游離節(jié)點(diǎn)，以構(gòu)建出蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)并下載其tsv格式文件(結(jié)果如圖4)。[0077]將交集篩選得到的靶點(diǎn)輸入到Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行GO和KEGG功能富集分析，[0078]結(jié)合圖3、圖4,基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)工具以及內(nèi)部自建皮膚靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)，最終在山茱萸的靶點(diǎn)等。從靶點(diǎn)預(yù)測(cè)分析上可以看出本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物可表現(xiàn)出潛在[0079]隨后對(duì)篩選出的21個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行GO和Reactome功能富集分析以識(shí)別靶點(diǎn)間參與調(diào)節(jié)的過(guò)程和關(guān)聯(lián)的相關(guān)通路。由圖5可知，GO富集分析反映本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物會(huì)參與到視黃酸的代謝、細(xì)胞外基質(zhì)的降解、膠原的合成等生物過(guò)程；參與包含膠原在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)的合成；參與基質(zhì)金屬蛋白酶活性、核轉(zhuǎn)錄受體活性等分子功能。如圖6所示，緊致抗皺靶點(diǎn)通路富集分析結(jié)果可知，本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物會(huì)通過(guò)參與到膠原的降解過(guò)程、基質(zhì)金屬蛋白激活過(guò)程、以及視黃酸代謝以及炎癥因子相關(guān)通路來(lái)發(fā)揮緊致抗皺的功效。[0081]具體地，取指數(shù)生長(zhǎng)期的人原代成纖維細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，以1.0～1.2×105cells/mL的密度將細(xì)胞接種于6孔板上，培養(yǎng)終體積為2mL,用含10%胎牛血清的培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁。吸棄上清，每孔更換為新鮮制備的不同濃度的受試物(無(wú)血清)。收集細(xì)[0082]3.1實(shí)施例1的樣品1-1富含莫諾苷的山茱萸果提取物與莫諾苷的功效對(duì)比[0083]1)本實(shí)施例中對(duì)比了實(shí)施例1富含莫諾苷的山茱萸果提取物與同濃度莫諾苷的抗11炎功效，結(jié)果如圖7所示。由圖7可證實(shí)，本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物在抗炎功效(具體表現(xiàn)為對(duì)炎癥因子IL-6的抑制作用)意外地優(yōu)于純品莫諾苷，其抑制率為56.33%,而純品莫諾苷的抑制率為51.25%。[0084]需注意，本實(shí)施例中同濃度是指實(shí)施例1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物中的莫諾苷濃度與莫諾苷純品樣品的濃度一致。該現(xiàn)象說(shuō)明采用本發(fā)明提取物制備工藝，所制得山茱萸果提取物在保留了莫諾苷抗炎功效的前提下，其他成分協(xié)同提升莫諾苷的抗炎[0085]2)本實(shí)施例中對(duì)比了實(shí)施例1的樣品1-1富含莫諾苷的山茱萸果提取物與莫諾苷[0086]通過(guò)前期探索實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，莫諾苷在抗衰方向的功效是有局限的，圖8和圖9也驗(yàn)證了該發(fā)現(xiàn)：莫諾苷在成纖維細(xì)胞中沒(méi)有展現(xiàn)對(duì)彈性蛋白Elastin及視黃酸受體RARB的改善作用，但是實(shí)施例1樣品1-1所制得富含莫諾苷的山茱萸果提取物展現(xiàn)出比較好的改善作用，其改善率分別為106.8%(Elastin)和552.2%(RARB)。因此，本發(fā)明實(shí)施例1的樣品1-1富含莫諾苷的山茱萸果提取物不僅富集了莫諾苷含量、提升了莫諾苷抗炎功效，同時(shí)也實(shí)現(xiàn)了莫諾苷本身不具備的抗衰功效，相比單純的莫諾苷具有更廣闊的使用價(jià)值。[0087]3.2本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物對(duì)ECM的改善作用[0088]TGF-β(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β)是皮膚中膠原蛋白合成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子之一，它通過(guò)經(jīng)型膠原蛋白是皮膚結(jié)構(gòu)的重要組成部分，能夠增加皮膚的彈性和緊致度，從而減少皺紋的[0089]TGF-β作為皮膚抗衰老護(hù)膚的重要目標(biāo)分子，通過(guò)促進(jìn)膠原生成、抑制其降解、調(diào)控細(xì)胞增殖與分化來(lái)改善皮膚的光滑度和彈性。本實(shí)施例發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物對(duì)TGF-β具有很好的促進(jìn)作用(如圖10所示);同時(shí)，對(duì)TGF-β調(diào)控的下游蛋白的表達(dá)測(cè)試結(jié)果發(fā)現(xiàn)，富含莫諾苷的山茱萸果提取物可顯著促進(jìn)III型膠原(COL-III)的表達(dá)(如圖11所示)。[0090]以上實(shí)施例證實(shí)了本發(fā)明富含莫諾苷的山茱萸果提取物可通過(guò)調(diào)控TGF-β信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)對(duì)ECM結(jié)構(gòu)的改善和重塑，促進(jìn)皮膚緊致度、減少皺紋的發(fā)生，可廣泛用于化妝品或護(hù)膚品制備中。[0091]此外，本發(fā)明還通過(guò)設(shè)置對(duì)比例1,探索了富含莫諾苷的山茱萸果提取物的制備方法的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。[0093]對(duì)比例1.1[0094]一種山茱萸果提取物的制備方法，本對(duì)比例制備方法所用原料及參數(shù)控制與實(shí)施例1相同，不同之處在于不包括步驟(3)。按照此工藝條件平行制備3個(gè)樣品，依次命名為樣[0095]對(duì)比例1.2[0096]一種山茱萸果提取物的制備方法，本對(duì)比例制備方法所用原料及參數(shù)控制與實(shí)施例1相同，不同之處在于步驟(2)未加入所述復(fù)合酶。按照此工藝條件平行制備3個(gè)樣品，依[0097]對(duì)比例1.3[0098]一種山茱萸果提取物的制備方法，本對(duì)比例制備方法所用原料及參數(shù)控制與實(shí)施例1相同，不同之處在于步驟(1)采用等體積的純水代替乙醇溶液。按照此工藝條件平行制[0099]對(duì)比例1.4[0100]一種山茱萸果提取物的制備方法，具體包括以下步驟：稱(chēng)取山茱萸果藥材(產(chǎn)地：罐中，加入山茱萸果粉末，攪拌混合均勻；隨后恒溫50℃循環(huán)提取1h,再升溫至70℃提取1h。降溫至40-50℃,將粗提液放出至儲(chǔ)液桶中。將粗提液進(jìn)行離心，收集濾液得到山茱萸果