ICS65.020.20

CCSB16DB23

黑龍江省地方標準

DB23/T3896—2024

玉米穗腐病抗源鑒定及評價技術(shù)規(guī)程

2024-12-30發(fā)布2025-01-29實施

黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB23/T3896—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》

的規(guī)定起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。

本文件由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院玉米研究所、東北農(nóng)業(yè)大學、中國農(nóng)業(yè)科學院作

物科學研究所。

本文件主要起草人：扈光輝、楊劍飛、樸琳、李永剛、李春輝、李國良、王明泉、付立

新、胡少新、王志國。

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玉米穗腐病抗源鑒定及評價技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了玉米穗腐病抗源鑒定及評價技術(shù)的接種體制備、抗病性鑒定圃設(shè)置、接種、

病情調(diào)查和抗病性評價等要求。

本文件適用于玉米種質(zhì)資源對玉米鐮孢穗腐病的田間抗性鑒定和評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅注日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改單）適用于本文件。

GB4404.1糧食作物種子第1部分：禾谷類

NY/T1248.8玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第8部分：鐮孢穗腐病

DB23/T2154玉米機械化籽粒收獲栽培技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

玉米穗腐病抗源鑒定identificationofresistancesourcetomaizeearrot

利用玉米禾谷鐮孢（Fusariumgraminearum）、擬輪枝鐮孢（Fverticillioides）、亞粘團

鐮孢（F.subglutinans）、層出鐮孢（F.proliferatum）穗腐病混合菌進行人工接種，鑒定挖

掘抗穗腐病種質(zhì)資源。

4接種體制備

4.1鐮孢病原菌分離與致病力測定

4.1.1病原菌分離

取發(fā)生穗腐病的玉米籽粒，置于75%的酒精中浸泡2s～3s，取出后置于濃度為1.5%的

次氯酸鈉中浸泡3min～5min，再經(jīng)無菌水換洗3次，晾干后用無菌剪刀從中間剪開后將其

中一塊組織轉(zhuǎn)移至PDA平板培養(yǎng)基上，置于25℃～27℃環(huán)境中，黑暗培養(yǎng)3d后挑取病原

菌至試管中保存。

4.1.2致病力測定

采用根部接種法根據(jù)柯赫氏法則驗證所分離的鐮孢菌為穗腐病原菌，并確定其具有一定

的致病能力。

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4.2鐮孢病原菌鑒定

采用形態(tài)學和分子生物學技術(shù)確定目標病原菌的所屬種為禾谷鐮孢、擬輪枝鐮孢、亞粘

團鐮孢、層出鐮孢。具體鑒定方法按NY/T1248.8的規(guī)定執(zhí)行。

4.3病原菌的配制

4.3.1培養(yǎng)基的制備

將高粱粒（125g）在沸水中煮20min，然后轉(zhuǎn)移到250mL三角瓶中，121℃濕熱滅菌

45min，完成高粱粒培養(yǎng)基的制備。

按照NY/T1248.8提供的方法制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（Potatodextroseagar

medium，PDA）。

4.3.2禾谷鐮孢孢子懸浮液的配制

將禾谷鐮孢轉(zhuǎn)移至PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取3個～5個擴繁的禾谷鐮孢的菌碟轉(zhuǎn)移到

0.9%～1.5%的無菌鹽水中，每100mL三角瓶裝液量為15ml，28℃～30℃、可見光150lx～

200lx條件下?lián)u床震蕩（150rpm～180rpm）培養(yǎng)96h～120h，雙層紗布過濾后用血球計數(shù)

法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×106孢子/mL，4℃條件下可保存96h。

4.3.3擬輪枝鐮孢孢子懸浮液的配制

將PDA培養(yǎng)基擴繁7d后的擬輪枝鐮孢5個菌碟轉(zhuǎn)移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，

并在26℃、避光條件下培養(yǎng)5d，每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙

層紗布過濾后用血球計數(shù)法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×106孢子/mL，4℃條件下可保存96h。

4.3.4亞粘團鐮孢孢子懸浮液的配制

將PDA培養(yǎng)基擴繁7d后的亞粘團鐮孢5個菌碟轉(zhuǎn)移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，

并在26℃、避光條件下培養(yǎng)5d，每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙

層紗布過濾后用血球計數(shù)法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×106孢子/mL，4℃條件下可保存96h。

4.3.5層出鐮孢孢子懸浮液的配制

將PDA培養(yǎng)基擴繁7d后的層出鐮孢5個菌碟轉(zhuǎn)移至裝有無菌高粱粒的三角瓶中，并

在26℃、避光條件下培養(yǎng)5d，每天搖晃一次三角瓶，然后用無菌水沖洗帶菌高粱粒，雙層

紗布過濾后用血球計數(shù)法調(diào)整孢子懸浮液濃度為2×106孢子/mL，4℃條件下可保存96h。

4.3.6混合孢子懸浮液配制

將禾谷鐮孢、擬輪枝鐮孢、亞粘團鐮孢、層出鐮孢按照4:2:1:0.5體積比將各鐮孢菌孢子

懸浮液混合，4℃條件下可保存48h。

5抗病性鑒定圃設(shè)置

5.1鑒定圃設(shè)計

鑒定圃應(yīng)具有良好的自然發(fā)病環(huán)境，可根據(jù)需要進行排灌。

鑒定種質(zhì)資源按照晚熟、中熟、早熟3個熟期分區(qū)種植，各熟期內(nèi)種質(zhì)資源采取隨機排

列，每隔30行鑒定材料設(shè)置1組已知同熟期抗病、感病對照。對照見附錄表A.1。

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鑒定材料采用單行區(qū)種植，3次重復(fù)，隨機排列，小區(qū)行長5m，行距0.65m，植株密度

為75000株/hm2。

5.2鑒定材料播種

鑒定材料播種時間與大田播種時間相當，也可根據(jù)當年農(nóng)業(yè)生產(chǎn)氣候條件適當調(diào)整播種

期。播種時期按DB23/T2154規(guī)定執(zhí)行。

鑒定材料種子不應(yīng)進行包衣處理，播種方式采用人工點播，每穴點播種子2粒，出苗后

每穴保留1株健康的植株。種子符合GB4404.1標準。

5.3田間管理

田間管理及蟲草害防治與大田生產(chǎn)相同，田間管理過程中不應(yīng)使用殺菌劑。

6接種

6.1接種時期

應(yīng)在玉米雌穗吐絲后3d～5d或花絲長度達5cm～10cm時進行。

6.2接種部位及方法

接種采用花絲通道法，每株選擇上部第1個果穗，利用可定量的連續(xù)注射器，在果穗花

絲通道側(cè)邊插入至通道中空部位，每穗注射接種2mL孢子懸浮液。

接種后常規(guī)田間管理，適度保持田間大氣濕度。

7病情調(diào)查

7.1調(diào)查時間

在鑒定材料進入完熟期時進行調(diào)查。

7.2調(diào)查方法

采收接種的雌穗，去除苞葉后調(diào)查每個接種果穗發(fā)病面積，并進行分級統(tǒng)計。病情分級

應(yīng)按附錄表A.2執(zhí)行。

記錄每份鑒定材料的總株數(shù)和各發(fā)病級別株數(shù)。

8抗病性評價

8.1抗病性評價方法

根據(jù)不同材料的病情級別，計算每份鑒定材料的平均病情級別，平均病情級別計算公式

見式1。

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