ICS65.020.01

CCSB20

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T3349—2024

飼用燕麥草中性洗滌纖維瘤胃液體外240

小時(shí)降解率的測(cè)定

Amethodtoassess240-hruminalinvitroneutraldetergentfiber

degradabilityoftheforageoathay

2024-02-23發(fā)布2024-03-23實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T3349—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC19)歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)中心、內(nèi)蒙古大青山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局、內(nèi)蒙

古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院、內(nèi)蒙古草業(yè)技術(shù)創(chuàng)新中心有限公司、包頭職業(yè)技術(shù)學(xué)院、鄂爾多斯市農(nóng)牧業(yè)科

學(xué)研究院、內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、呼和浩特市園林建設(shè)服務(wù)中心、內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)

技術(shù)推廣中心。

本文件主要起草人：李寧、聶竹彥、金鹿、王博、張春華、李勝利、楊鼎、薩初拉、劉威、劉利、

寶華、張崇志、胡曉曉、付樂(lè)、李文婷、張躍華、桑丹、娜美日嘎、趙英、蔡婷。

I

DB15/T3349—2024

飼用燕麥草中性洗滌纖維瘤胃液體外

240小時(shí)降解率的測(cè)定

1范圍

本文件規(guī)定了飼用燕麥草240h體外消化率測(cè)定方法的試劑和溶液、儀器和設(shè)備、樣品、分析步驟

和結(jié)果計(jì)算。

本文件適用于不同生長(zhǎng)期、不同品種的飼用燕麥草中性洗滌纖維瘤胃液體體外240h降解率的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T3358.1統(tǒng)計(jì)學(xué)詞匯及符號(hào)第1部分：一般統(tǒng)計(jì)術(shù)語(yǔ)與用于概率的術(shù)語(yǔ)

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T14699.1飼料采樣

GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備

DB15/T1583牧草中aNDFom的測(cè)定

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

中性洗滌纖維neutraldetergentfiber

用中性洗滌劑去除飼草中的脂肪、淀粉、蛋白質(zhì)和糖類(lèi)等成分后，殘留的不溶解物質(zhì)的總稱(chēng)。

飼用燕麥草中性洗滌纖維體外降解率thedegradabilityofneutraldetergentfiberofoat

invitro

瘤胃液體外降解的飼用燕麥草中中性洗滌纖維含量占飼用燕麥草原樣中中性洗滌纖維含量的百分

比。

4試劑和溶液

試劑和溶液

4.1.1如無(wú)特別說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，所用水一律指GB/T6682中三級(jí)水。

1

DB15/T3349—2024

4.1.2丙酮（CH3COCH3）。

4.1.3磷酸氫二鉀（KH2PO4）。

4.1.4七水硫酸鎂（MgSO4·7H2O）。

4.1.5氯化鈉（NaCl）。

4.1.6二水氯化鈣（CaCl2·2H2O）。

4.1.7尿素（CO(NH2)2）。

4.1.8碳酸鈉（Na2CO3）。

4.1.9九水硫化鈉（Na2S·9H2O）。

4.1.10乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2Na2O8）。

4.1.11四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）。

4.1.12十二烷基硫酸鈉（C12H25NaSO4）。

4.1.13乙二醇乙醚（C4H10O2）。

4.1.14無(wú)水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。

試劑配制

4.2.1緩沖液A的配制

緩沖液A的配制參見(jiàn)附錄A。

4.2.2緩沖液B的配制

緩沖液B的配制參見(jiàn)附錄B。

4.2.33%十二烷基硫酸鈉（中性洗滌劑）溶液配制

稱(chēng)取18.60g乙二胺四乙酸二鈉和6.80g四硼酸鈉加入到100mL燒杯中，加少量水加熱溶解后，再

加入30.00g十二烷基硫酸鈉和20mL乙二醇乙醚。稱(chēng)取4.65g無(wú)水磷酸氫二鈉，置于另一燒杯中，加少

量水，微微加熱溶解后倒入第一個(gè)燒杯中，稀釋至1000mL。

5儀器和設(shè)備

羊用瘤胃液取樣器（長(zhǎng)30cm，內(nèi)徑12.70mm，PPR管）。

分析天平（分度值0.0001g）。

烘干箱（室溫至300℃）。

磁力攪拌器（轉(zhuǎn)速為100r/min～1400r/min）。

纖維袋（ANKOMF57，25μm孔隙）。

體外模擬培養(yǎng)箱（室溫至45℃）。

全自動(dòng)纖維分析儀（室溫至100℃）。

6中性洗滌纖維瘤胃液體外240h降解率的測(cè)定程序

見(jiàn)圖1。

2

DB15/T3349—2024

樣品的采集及制備（見(jiàn)7）

瘤胃液的制備（見(jiàn)8.1）

消化（見(jiàn)8.2.1）

洗滌（見(jiàn)8.2.2）

干燥（見(jiàn)8.2.3）

中性洗滌纖維含量的測(cè)定（見(jiàn)8.3）

結(jié)果計(jì)算（見(jiàn)9）

圖1中性洗滌纖維瘤胃液體外240h降解率的測(cè)定程序

7樣品

取樣

按GB/T14699.1進(jìn)行采樣。

制備

樣品根據(jù)GB/T20195制備，置于烘箱內(nèi)于65℃烘干，研磨，過(guò)1mm篩后取篩下物。

8分析步驟

瘤胃液的制備

在晨飼前經(jīng)瘤胃瘺管利用瘤胃液取樣器采集供試羊（不少于3只）的瘤胃液，直接轉(zhuǎn)入預(yù)熱至39℃

的保溫容器中，混合均勻后經(jīng)4層紗布過(guò)濾，濾液持續(xù)通入CO2氣體，然后量取400mL瘤胃上清液于39℃

保溫容器備用。

體外消化步驟

3

DB15/T3349—2024

8.2.1消化

稱(chēng)取0.5000g樣品放置于纖維袋中，封口后平鋪放置于體外模擬培養(yǎng)箱中消化罐的分隔板兩側(cè)。取

兩個(gè)容器分別加入266mL緩沖液B和1330mL緩沖液A，于39℃條件下調(diào)節(jié)其pH達(dá)到6.80。于每個(gè)消化罐

中加入約1600mL混合緩沖溶液（緩沖液B+緩沖液A）后放置于體外模擬培養(yǎng)箱中，打開(kāi)加熱和轉(zhuǎn)動(dòng)開(kāi)

關(guān)，使消化罐的溫度在20min～30min內(nèi)達(dá)到平衡。取出消化罐加入提前預(yù)處理好的400mL瘤胃液，持

續(xù)通入CO2然后蓋緊蓋子，置于體外模擬培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)240h。

8.2.2洗滌

待培養(yǎng)結(jié)束后取出消化罐倒掉液體，再將纖維袋全部取出，用流動(dòng)的自來(lái)水沖洗7min～10min直

至干凈。

8.2.3干燥

將纖維袋置于105℃烘箱中烘干6h，放入干燥器中冷卻30min后，稱(chēng)重。然后再烘干30min，再

冷卻稱(chēng)重，直至兩次稱(chēng)量之差＜0.0020g為恒重。

中性洗滌纖維含量的測(cè)定

原樣樣品和殘?jiān)鼧悠分兄行韵礈炖w維含量按照DB15/T1583中規(guī)定的方法進(jìn)行。

9結(jié)果計(jì)算

樣品中中性洗滌纖維含量按式（1）計(jì)算。

W?W

Y=32100……(1)

W1

式中：

Y——代表樣品中中性洗滌纖維的含量，單位為百分比(%)；

W3——代表洗滌后樣品和纖維袋的重量，單位為克（g）；

W2——代表纖維袋的重量，單位為克（g）；

W1——代表樣品的重量，單位為克（g）。

樣品中中性洗滌纖維體外降解率按式（2）計(jì)算。

W?W

Z=45100……(2)

W4

式中：

Z——代表樣品在240h時(shí)間點(diǎn)的中性洗滌纖維瘤胃液體外降解率，單位為百分比(%)；

W4——代表樣品中中性洗滌纖維的重量，單位為克（g）；

W5——代表經(jīng)過(guò)240h體外降解后殘?jiān)鼧悠分兄行韵礈炖w維的重量，單位為克（g）。

取兩次測(cè)定結(jié)果的算數(shù)平均值，計(jì)算結(jié)果保留2位小數(shù)點(diǎn)。

根據(jù)GB/T3358.1，在重復(fù)條件下同一樣品同時(shí)兩次平行測(cè)定所得結(jié)果相對(duì)相差≤10%。

4

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A

A

附錄A

（資料性）

緩沖液A的配制

A.1試劑

A.1.1磷酸氫二鉀。

A.1.2七水硫酸鎂。

A.1.3氯化鈉。

A.1.4二水氯化鈣。

A.1.5尿素。

A.2儀器設(shè)備

A.2.1容量瓶：容量1000mL。

A.2.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。

A.3緩沖液A的配制

將10.00g磷酸氫二鉀、0.50g七水硫酸鎂、0.50g氯化鈉、0.10g二水氯化鈣