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血清堿性磷酸酶活性測定磷酸本二鈉法酶活力測定與酶法分析酶活力測定酶活力:即是酶活性,是表示催化某一特定反應(yīng)的能力??梢杂迷谝欢l件下所催化的某一特定化學(xué)速度表示。酶催化反應(yīng)速度越快,酶活性,反之則愈低。底物減少量或生成物增加量酶促反應(yīng)速度=單位時間影響酶促反應(yīng)速度的因素包括底物濃度、酶濃度、ph值、溫度、激活劑、抑制劑等。酶活力單位指:在特定條件下1分鐘能將1微摩爾底物轉(zhuǎn)化為底物所需酶量,或轉(zhuǎn)化底物中1微摩爾的有關(guān)基團的酶數(shù)。酶的比活力:單位質(zhì)量酶蛋白或單位體積酶制劑所含有酶活力單位數(shù)。方法:1.終止測定法(定時法或終點法)2.動力學(xué)分析法(連續(xù)監(jiān)測法或速率法)3.物質(zhì)含量的測定方法酶法分析!指應(yīng)用酶作為工具定量測定某種物質(zhì)含量的分析方法。(一)單酶反應(yīng)定量法1、直接測定底物的含量2、由輔酶變化量測定底物量(二)偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法E1E2ABC酶活力測定和酶法分析在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用實驗?zāi)康?.熟悉酶活性測定方法的一般原理2.掌握血清ALP測定原理與臨床意義3.熟悉終止法和動力學(xué)測定法實驗操作取試管4支,按下表操作:立即混勻。用510nm波長比色,以蒸餾水調(diào)零點,讀取各管吸光度。計算
ALP活性=(A測定—A對照)/(A標(biāo)準(zhǔn)—A空白)*0.05*100(金氏單位)臨床意義在臨床上,血清ALP測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。1.血清ALP活性升高:肝膽疾?。鹤枞渣S疸、急性或慢性黃疸性肝炎、肝癌等;骨骼疾?。河捎诠堑膿p傷或疾病使成骨細(xì)胞內(nèi)所含高濃度的ALP釋放進入血液中,引起血清ALP活性增高,如纖維性骨炎、成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期等。2.血清ALP活性降低:比較少見,主要見于呆小病,ALP過少癥,維生素C缺乏癥。注意事項1.底物溶液中不應(yīng)含有游離酚,如有酚則空白管顯紅色,說明磷酸苯二鈉已經(jīng)開始分解,應(yīng)棄去不用。2.鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩(wěn)定顯色作用。該液應(yīng)避光保存,如出現(xiàn)藍(lán)綠色即應(yīng)廢棄。3.加入鐵氰化鉀溶液后必須立即混勻,否則顯色
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