ICS65.020.20

CCSB05

DB23

黑龍江省地方標準

DB23/T3051—2021

溪蓀組培繁殖技術(shù)規(guī)程

2021-12-24發(fā)布2022-01-23實施

黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB23/T3051—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)

定起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。

本文件由黑龍江省林業(yè)和草原局提出。

本文件起草單位：東北林業(yè)大學、綏棱縣國有林場三吉臺林場、海倫市森林資源保護中心、國營明

水縣明水林場。

本文件主要起草人：王玲、付海靜、弓悅、孫振明、李誠、王磊、葉王斌、史恭發(fā)、閆蕾、呂汝彤、

趙蕊陽、劉桂伶、楊娟、裴艷春。

Ⅰ

DB23/T3051—2021

溪蓀組培繁殖技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了溪蓀（IrissanguineaDonn.exHorn.）組培繁殖的環(huán)境與設(shè)備消毒、培養(yǎng)基配制、

培養(yǎng)條件、無菌苗培育、外植體獲取和處理、愈傷組織誘導、愈傷組織增殖、不定芽分化、生根培養(yǎng)、

煉苗、移栽和生產(chǎn)檔案。

本文件適用于溪蓀組培繁殖。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用性文

件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用

于本文件。

LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

NY/T2306—2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4環(huán)境與設(shè)備消毒

4.1接種室消毒

接種室消毒按NY/T2306—2013中8.6的規(guī)定執(zhí)行。

4.2培養(yǎng)室消毒

培養(yǎng)室消毒按NY/T2306—2013中8.7的規(guī)定執(zhí)行。

4.3超凈工作臺消毒

超凈工作臺消毒按NY/T2306—2013中8.5和8.6的規(guī)定執(zhí)行。

4.4接種器具消毒

接種器具按NY/T2306—2013中8.4的規(guī)定執(zhí)行。

5培養(yǎng)基配制

5.1母液配制

培養(yǎng)基母液配制按NY/T2306—2013中7.3的規(guī)定執(zhí)行。

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5.2培養(yǎng)基配制

5.2.1培養(yǎng)基配方

培養(yǎng)基配制成分如下：

a)初代培養(yǎng)基為添加30?g/L蔗糖+3?g/L瓊脂粉的MS培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8；

b)繼代培養(yǎng)基為添加30?g/L蔗糖的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0；

c)愈傷組織誘導培養(yǎng)基為添加6-BA?1.0mg/L+2,4-D?1.0?mg/L+NAA?0.4?mg/L+蔗糖30?g/L的MS

固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0；

d)愈傷組織增殖培養(yǎng)基為添加6-BA?0.5?mg/L+2,4-D?0.5?mg/L+蔗糖30?g/L的MS固體培養(yǎng)基，

滅菌前培養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0；

e)分化培養(yǎng)基為添加6-BA?2.0?mg/L+NAA?0.1?mg/L+蔗糖30?g/L的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培養(yǎng)

基pH值調(diào)為5.8～6.0；

f)生根培養(yǎng)基為添加NAA?0.5?mg/L+活性炭?1.0?g/L+蔗糖30?g/L的MS固體培養(yǎng)基，滅菌前培

養(yǎng)基pH值調(diào)為5.8～6.0。

5.2.2培養(yǎng)基配制方法

培養(yǎng)基配制方法按NY/T2306—2013中7.4的規(guī)定執(zhí)行。

5.3培養(yǎng)基滅菌及保存

培養(yǎng)基滅菌及保存方法按LY/T1882—2010中4.2的規(guī)定進行。

6培養(yǎng)條件

光照周期14h/d、光照強度3000Lux～5000Lux，培養(yǎng)溫度24℃～26℃，空氣相對濕度60%～80%。

7無菌苗培育

7.1種子消毒

挑選顆粒飽滿的種子，用稀釋50倍的洗潔劑水溶液攪拌清洗后，流水沖洗干凈，在室溫下用初始

溫度為80?℃的水浸泡種子24h，倒掉水后吸干。在超凈工作臺內(nèi)，將種子用75?%乙醇浸泡30?s，無

菌水沖洗3遍～5遍，再用4％次氯酸鈉水溶液浸泡并搖動20?min，用無菌水沖洗5次并浸泡10?min，

水倒掉后將種子放到濾紙上吸干備用。

7.2無菌接種

消毒后的種子接入初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

8外植體獲取和處理

種子萌發(fā)幼苗具3片～4片葉時，在無菌條件下將根部剪掉，葉片保留2.0?cm～3.0?cm長，接種

到繼代培養(yǎng)基中萌發(fā)根系，剪取帶有二級須根的一級須根，切除二級須根后備用。

9愈傷組織誘導

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DB23/T3051—2021

將須根切至長度為1.0?cm～1.5?cm，接入愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

10愈傷組織增殖

從根段上切取黃色、顆粒明顯的愈傷組織接入愈傷組織增殖培養(yǎng)基中。對產(chǎn)生內(nèi)生菌的愈傷組織，

可轉(zhuǎn)到添加了100?mg/L青霉素G鈉的增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。待內(nèi)生菌消失后，再移回增殖培養(yǎng)基中。

11不定芽分化

將增殖后的愈傷組織分割成直徑5?mm的小塊，接入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

12生根培養(yǎng)

當不定芽高度≥3?cm時，將不定芽單獨切離下來，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

13煉苗

當組培苗根系長度≥3?cm時，打開組培瓶煉苗3?d，煉苗期間應對葉表面噴灑自來水保濕。煉苗后

可在溫室內(nèi)移栽。

14移栽

14.1移栽準備

將高溫消毒的草炭土與蛭石按照1:1的比例混合后裝入50孔穴盤中，并將穴盤底部浸入水中至盆

中土壤濕潤。

14.2移栽

取出組培苗，用清水洗凈基部培養(yǎng)基，修剪根，保留2cm，移栽至穴盤中，澆透水。

14.3移栽后管理

移栽初期，保持空氣濕度≥80%，適時澆水，保持基質(zhì)濕潤，溫度控制在18℃～25℃，逐步增加光

照。在5月中旬～8月中旬可進行室外移栽，移栽后2周內(nèi)保持土壤濕潤。

15生產(chǎn)檔案

應建立生產(chǎn)檔案，內(nèi)容包括：環(huán)境與