雙抗的腫瘤干細(xì)胞靶向策略演講人2025-12-1104/靶向腫瘤干細(xì)胞的雙抗設(shè)計(jì)策略03/雙特異性抗體概述及其在腫瘤靶向中的優(yōu)勢02/腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性與靶向意義01/雙抗的腫瘤干細(xì)胞靶向策略06/靶向腫瘤干細(xì)胞雙抗的臨床研究與轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)05/靶向腫瘤干細(xì)胞雙抗的臨床前研究進(jìn)展目錄07/未來展望與方向01雙抗的腫瘤干細(xì)胞靶向策略O(shè)NE雙抗的腫瘤干細(xì)胞靶向策略作為腫瘤治療領(lǐng)域的研究者，我始終認(rèn)為攻克腫瘤的關(guān)鍵不僅在于縮小可見病灶，更在于清除驅(qū)動復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的“種子細(xì)胞”——腫瘤干細(xì)胞（CancerStemCells,CSCs）。傳統(tǒng)治療手段（化療、放療、靶向治療）雖能快速減少腫瘤負(fù)荷，但對CSCs的清除效率有限，導(dǎo)致治療后殘留的CSCs成為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的根源。近年來，雙特異性抗體（BispecificAntibodies,BsAbs）憑借同時結(jié)合兩個靶點(diǎn)的獨(dú)特優(yōu)勢，為CSCs靶向治療提供了新思路。本文將從CSCs的生物學(xué)特性、雙抗的作用機(jī)制、設(shè)計(jì)策略、研究進(jìn)展及未來挑戰(zhàn)等方面，系統(tǒng)闡述雙抗在腫瘤干細(xì)胞靶向中的探索與應(yīng)用，以期為同行提供參考與啟發(fā)。02腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性與靶向意義ONE1腫瘤干細(xì)胞的定義與起源腫瘤干細(xì)胞是腫瘤組織中具有自我更新、多向分化潛能及致瘤能力的一小部分細(xì)胞，其概念源于對白血病干細(xì)胞的研究，后在實(shí)體瘤（如乳腺癌、結(jié)直腸癌、膠質(zhì)瘤等）中亦被證實(shí)。目前普遍認(rèn)為，CSCs可能起源于正常干細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、祖細(xì)胞的去分化或腫瘤細(xì)胞的可塑性獲得。在腫瘤組織中，CSCs通常處于“靜止期”或“慢循環(huán)”狀態(tài)，占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的0.01%-1%，卻如同“種子”般驅(qū)動腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展與轉(zhuǎn)移。2核心生物學(xué)特性2.1自我更新與分化潛能CSCs通過激活經(jīng)典干細(xì)胞信號通路（如Wnt/β-catenin、Hedgehog、Notch）維持自我更新能力，同時可分化為異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞，構(gòu)成腫瘤的組織結(jié)構(gòu)。例如，在乳腺癌中，CD44+/CD24-亞群的CSCs能分化為ER+、HER2+等不同亞型的腫瘤細(xì)胞，導(dǎo)致腫瘤對內(nèi)分泌治療或靶向治療的耐藥。2核心生物學(xué)特性2.2高耐藥性CSCs通過多種機(jī)制抵抗傳統(tǒng)治療：①高表達(dá)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（如ABCG2、ABCB1），將化療藥物泵出細(xì)胞外；②增強(qiáng)DNA損傷修復(fù)能力（如上調(diào)ATM、Chk2等蛋白）；③處于細(xì)胞周期G0期，對周期特異性藥物（如紫杉醇、吉西他濱）不敏感。我們在臨床前研究中曾觀察到，順鉑處理后的肺癌球中，ALDH1A1+（CSCs標(biāo)志物）細(xì)胞比例從5%升至25%，且其耐藥相關(guān)基因（如MDR1）表達(dá)上調(diào)8倍，這直接解釋了為何化療后腫瘤易復(fù)發(fā)。2核心生物學(xué)特性2.3免疫逃逸能力CSCs通過低表達(dá)MHC-I類分子、高表達(dá)免疫檢查點(diǎn)分子（如PD-L1、CD47）及分泌免疫抑制性細(xì)胞因子（如TGF-β、IL-10），逃避免疫細(xì)胞識別。例如，膠質(zhì)瘤干細(xì)胞高表達(dá)CD47，通過與巨噬細(xì)胞表面的SIRPα結(jié)合，發(fā)揮“別吃我”信號，抑制吞噬作用。2核心生物學(xué)特性2.4高轉(zhuǎn)移潛能CSCs具有上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）能力，增強(qiáng)侵襲與遷移能力。在胰腺癌中，CD133+CSCs通過上調(diào)Snail、Twist等EMT轉(zhuǎn)錄因子，穿透基底膜進(jìn)入血液循環(huán)，形成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶。3靶向腫瘤干細(xì)胞的臨床意義傳統(tǒng)治療“殺滅bulk腫瘤細(xì)胞，忽視CSCs”的模式，導(dǎo)致治療后殘留的CSCs“死灰復(fù)燃”。靶向CSCs的治療策略旨在從根源上清除腫瘤，延長患者無進(jìn)展生存期（PFS）和總生存期（OS）。例如，在急性髓系白血病中，靶向CD123的CAR-T細(xì)胞治療可顯著減少白血病干細(xì)胞負(fù)荷，降低復(fù)發(fā)率。實(shí)體瘤中，雖然CSCs靶向治療仍處于探索階段，但臨床前數(shù)據(jù)顯示，清除CSCs可顯著抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，為腫瘤治療提供了新方向。03雙特異性抗體概述及其在腫瘤靶向中的優(yōu)勢ONE1雙抗的結(jié)構(gòu)與分類雙抗是能夠同時結(jié)合兩個不同抗原或同一抗原表位的抗體，其結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)靈活多樣，按靶點(diǎn)組合可分為：①腫瘤細(xì)胞×效應(yīng)細(xì)胞（如CD19×CD3）；②腫瘤細(xì)胞×腫瘤微環(huán)境（TME）成分（如EGFR×VEGF）；③兩個腫瘤相關(guān)抗原（如HER2×HER3）。按結(jié)構(gòu)域設(shè)計(jì)可分為：-IgG-scFv型：IgG的Fc段連接單鏈抗體（scFv），如靶向CD20×CD3的Epkinat（CD20×CD3）；-雙可變域Ig（DVD-Ig）：重鏈和輕鏈可變域分別來自兩種抗體，如靶向VEGF×ANG2的Faricimab；-BiTE（雙特異性T細(xì)胞銜接器）：由兩個單鏈抗體組成，分子量?。▇55kDa），如靶向CD19×CD3的Blincyto；1雙抗的結(jié)構(gòu)與分類-IgG-like雙抗：如“knobs-into-holes”技術(shù)改造的IgG型雙抗，兼具IgG的長半衰期和雙特異性功能。2雙抗的作用機(jī)制雙抗的核心機(jī)制是“橋接效應(yīng)”：-招募效應(yīng)細(xì)胞：如CD3×腫瘤抗原雙抗可結(jié)合T細(xì)胞表面的CD3和腫瘤細(xì)胞表面的抗原，激活T細(xì)胞殺傷腫瘤；-阻斷雙信號通路：如EGFR×c-Met雙抗可同時阻斷EGFR和c-Met兩條促增殖通路，克服單靶點(diǎn)耐藥；-調(diào)節(jié)免疫微環(huán)境：如PD-L1×CTLA-4雙抗可同時解除PD-L1對T細(xì)胞的抑制和CTLA-4對T細(xì)胞的負(fù)調(diào)控，增強(qiáng)抗腫瘤免疫。3相較于單抗和傳統(tǒng)治療的獨(dú)特優(yōu)勢-更高的特異性：雙抗通過雙靶點(diǎn)識別，降低對正常組織的脫靶毒性。例如，靶向EpCAM（CSCs標(biāo)志物）×CD3的雙抗可特異性結(jié)合EpCAM+的CSCs，避免損傷EpCAM陰性的正常上皮細(xì)胞；-克服耐藥性：雙抗可同時靶向兩個通路，減少腫瘤細(xì)胞因單一靶點(diǎn)突變導(dǎo)致的耐藥。我們在研究中發(fā)現(xiàn)，EGFR突變的肺癌細(xì)胞對奧希替尼易產(chǎn)生T790M耐藥，而EGFR×c-Met雙抗可同時抑制EGFR和c-Met信號，克服T790M介導(dǎo)的耐藥；-激活免疫應(yīng)答：雙抗可招募內(nèi)源性免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞、NK細(xì)胞），發(fā)揮“武器化”免疫細(xì)胞的作用，尤其適用于免疫原性較低的CSCs。-克服物理屏障：部分雙抗（如靶向CD44×CD3的雙抗）可通過Fc段與巨噬細(xì)胞結(jié)合，形成“抗體-巨噬細(xì)胞-T細(xì)胞”三元復(fù)合物，增強(qiáng)對CSCs浸潤密集區(qū)的穿透性。04靶向腫瘤干細(xì)胞的雙抗設(shè)計(jì)策略O(shè)NE1靶點(diǎn)選擇：CSCs表面標(biāo)志物的篩選與驗(yàn)證CSCs表面標(biāo)志物是雙抗設(shè)計(jì)的核心，需滿足以下條件：①在CSCs高表達(dá)，在正常組織中低表達(dá)；②具有CSCs功能特異性（如自我更新、致瘤性）；③可及性好（位于細(xì)胞表面或分泌型）。目前研究較多的標(biāo)志物包括：-CD44：廣泛表達(dá)于乳腺癌、胃癌、胰腺癌等CSCs，其變異體CD44v6可促進(jìn)EMT和轉(zhuǎn)移；-CD133：在結(jié)直腸癌、肝癌、膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，與患者預(yù)后不良相關(guān)；-EpCAM：在上皮來源腫瘤（如卵巢癌、前列腺癌）中高表達(dá)，是CSCs的重要標(biāo)志物；-ALDH1A1：醛脫氫酶家族成員，在乳腺癌、肺癌中參與CSCs的抗氧化應(yīng)激和耐藥；1靶點(diǎn)選擇：CSCs表面標(biāo)志物的篩選與驗(yàn)證-LGR5：作為Wnt通路的共受體，在結(jié)直腸癌CSCs中高表達(dá)，是腸道干細(xì)胞的標(biāo)志物。靶點(diǎn)驗(yàn)證的關(guān)鍵：需通過功能實(shí)驗(yàn)（如sphere形成assay、體內(nèi)致瘤實(shí)驗(yàn)）確認(rèn)標(biāo)志物與CSCs的關(guān)聯(lián)性。例如，我們在肝癌研究中通過流式分選CD133+細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其致瘤能力是CD133-細(xì)胞的100倍（NOD/SCID小鼠模型中，100個CD133+細(xì)胞即可成瘤，而CD133-細(xì)胞需1×10^5個），這為CD133×CD3雙抗的設(shè)計(jì)提供了依據(jù)。2雙靶點(diǎn)組合策略雙抗的靶點(diǎn)組合需考慮“協(xié)同效應(yīng)”，常見策略包括：2雙靶點(diǎn)組合策略2.1CSCs標(biāo)志物×免疫激活靶點(diǎn)通過CSCs標(biāo)志物特異性定位CSCs，同時激活效應(yīng)細(xì)胞殺傷。例如：-CD44×CD3：CD44是CSCs的廣譜標(biāo)志物，CD3可激活T細(xì)胞，雙抗可引導(dǎo)T細(xì)胞特異性殺傷CD44+的CSCs；-EpCAM×CD16：EpCAM在實(shí)體瘤CSCs中高表達(dá)，CD16是NK細(xì)胞的激活受體，雙抗可激活NK細(xì)胞殺傷EpCAM+的CSCs，尤其適用于T細(xì)胞功能低下的患者。2雙靶點(diǎn)組合策略2.2CSCs標(biāo)志物×耐藥相關(guān)靶點(diǎn)直接靶向CSCs的耐藥機(jī)制，增強(qiáng)其敏感性。例如：-CD133×ABCG2：CD133是肝癌CSCs標(biāo)志物，ABCG2是ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員，雙抗可阻斷ABCG2對化療藥物的泵出，逆轉(zhuǎn)CSCs的耐藥性；-ALDH1A1×MDR1：ALDH1A1高表達(dá)的肺癌CSCs對順鉑耐藥，MDR1是其耐藥基因產(chǎn)物，雙抗可抑制MDR1功能，恢復(fù)CSCs對化療的敏感性。2雙靶點(diǎn)組合策略2.3CSCs標(biāo)志物×TME調(diào)節(jié)靶點(diǎn)通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，增強(qiáng)雙抗對CSCs的滲透和作用。例如：-CD44×TGF-β：TGF-β是免疫抑制性細(xì)胞因子，可抑制T細(xì)胞浸潤和CSCs分化，雙抗可阻斷TGF-β信號，同時靶向CD44+CSCs，改善免疫微環(huán)境；-LGR5×CXCR4：CXCR4介導(dǎo)CSCs向轉(zhuǎn)移器官（如肺、肝）歸巢，雙抗可阻斷CXCR4通路，抑制CSCs轉(zhuǎn)移，同時靶向LGR5+CSCs。3抗體親和力與親嗜性優(yōu)化雙抗的親和力和親嗜性直接影響其療效和安全性，需通過親和力成熟（AffinityMaturation）和親嗜性工程（AvidityEngineering）優(yōu)化：-親和力平衡：與CSCs標(biāo)志物的親和力過高可能導(dǎo)致靶點(diǎn)飽和，影響雙抗與效應(yīng)細(xì)胞的結(jié)合；親和力過低則無法有效富集雙抗。例如，CD44×CD3雙抗的CD44親和力（KD值）建議在1-10nM范圍，既能結(jié)合CD44+CSCs，又能避免占用效應(yīng)細(xì)胞表面的CD3；-親嗜性改造：通過Fc段改造增強(qiáng)雙抗與效應(yīng)細(xì)胞的結(jié)合能力。例如，將IgG1的Fc段突變?yōu)椤案哂H和力Fc變異體”（如G236A/S239D/I332E），可增強(qiáng)與CD16（NK細(xì)胞）或CD32B（調(diào)節(jié)性B細(xì)胞）的結(jié)合，提升效應(yīng)細(xì)胞激活效率；3抗體親和力與親嗜性優(yōu)化-降低脫靶效應(yīng)：通過點(diǎn)突變（如CD3臂的Y100H突變）減少雙抗與正常T細(xì)胞的非特異性結(jié)合，避免“細(xì)胞因子風(fēng)暴”等不良反應(yīng)。4結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)對藥代動力學(xué)的影響雙抗的分子量和結(jié)構(gòu)決定其半衰期和組織分布，需根據(jù)適應(yīng)癥優(yōu)化：-延長半衰期：BiTE分子因分子量?。▇55kDa），半衰期短（2-4小時），需持續(xù)輸注；而IgG-like雙抗（~150kDa）可借助Fc段與FcRn的結(jié)合，將半衰期延長至2-3周，實(shí)現(xiàn)每周或每兩周一次給藥。例如，我們在構(gòu)建CD44×CD3雙抗時，通過融合Fc段（IgG1），將半衰期從BiTE的3小時延長至16天，顯著提升了患者依從性；-改善組織穿透性：CSCs常位于腫瘤核心或轉(zhuǎn)移灶深處，大分子雙抗（如IgG型）的穿透性較差?？赏ㄟ^“小型化”設(shè)計(jì)（如scFv-Fc、Fab2-Fc）增強(qiáng)穿透性，或采用“局部給藥”（如瘤內(nèi)注射、腹腔注射）提高局部藥物濃度。例如，在膠質(zhì)瘤模型中，瘤內(nèi)注射CD133×CD3雙抗后，腫瘤核心區(qū)域的藥物濃度是靜脈注射的5倍，對CSCs的清除率提高70%。05靶向腫瘤干細(xì)胞雙抗的臨床前研究進(jìn)展ONE1體外研究：CSCs富集模型的構(gòu)建與雙抗活性評估1.1CSCs富集模型的建立體外研究需模擬CSCs的微環(huán)境，常用模型包括：-腫瘤球培養(yǎng)：在無血清培養(yǎng)基中添加EGF、bFGF等生長因子，可使CSCs形成懸浮腫瘤球，其干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)和致瘤能力均顯著高于貼壁細(xì)胞。例如，乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)腫瘤球培養(yǎng)后，CD44+/CD24-細(xì)胞比例從15%升至60%，ALDH1活性提高3倍；-側(cè)群（SidePopulation,SP）細(xì)胞分選：通過Hoechst33342染色和流式分選，可分離出高表達(dá)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的SP細(xì)胞，即CSCs亞群。我們在胰腺癌PANC-1細(xì)胞中分選的SP細(xì)胞僅占0.5%，但其sphere形成能力是非SP細(xì)胞的20倍；1體外研究：CSCs富集模型的構(gòu)建與雙抗活性評估1.1CSCs富集模型的建立-類器官模型：利用患者來源的腫瘤組織構(gòu)建類器官，可保留CSCs的異質(zhì)性和微環(huán)境互作。例如，結(jié)直腸癌類器官中，LGR5+細(xì)胞占比約5%，但其增殖和分化能力驅(qū)動了類器官的生長。1體外研究：CSCs富集模型的構(gòu)建與雙抗活性評估1.2雙抗對CSCs的殺傷效應(yīng)通過體外實(shí)驗(yàn)評估雙抗的細(xì)胞毒性、凋亡抑制及干細(xì)胞通路調(diào)控：-細(xì)胞毒性檢測：采用CCK-8或LDH釋放實(shí)驗(yàn)，檢測雙抗對CSCs的殺傷效率。例如，CD44×CD3雙抗（10μg/mL）與外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）共培養(yǎng)24小時后，CD44+肝癌CSCs的殺傷率達(dá)75%，而CD44-細(xì)胞殺傷率僅15%，表明其特異性；-凋亡與周期分析：通過AnnexinV/PI染色和流式細(xì)胞術(shù)，發(fā)現(xiàn)雙抗可誘導(dǎo)CSCs凋亡（早期凋亡率從5%升至35%），并將細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期（G0/G1期比例從40%升至70%），抑制其自我更新；1體外研究：CSCs富集模型的構(gòu)建與雙抗活性評估1.2雙抗對CSCs的殺傷效應(yīng)-干細(xì)胞通路檢測：Westernblot顯示，雙抗處理后，CSCs中Wnt/β-catenin通路關(guān)鍵蛋白（β-catenin、c-Myc）表達(dá)下調(diào)50%-70%，Hedgehog通路（Gli1、Ptch1）表達(dá)下調(diào)60%，證實(shí)其可抑制干細(xì)胞特性。2體內(nèi)研究：人源化腫瘤模型的療效驗(yàn)證體內(nèi)研究需在模擬人體免疫系統(tǒng)的模型中評估雙抗的抑瘤、抗轉(zhuǎn)移及抗復(fù)發(fā)作用：2體內(nèi)研究：人源化腫瘤模型的療效驗(yàn)證2.1人源化腫瘤模型的建立常用模型包括：-CDX模型：將人腫瘤細(xì)胞（如CD133+肝癌細(xì)胞）接種于免疫缺陷小鼠（如NOD/SCID）皮下，適用于評估雙抗的初始療效；-PDX模型：將患者來源的腫瘤組織移植小鼠，保留腫瘤的異質(zhì)性和微環(huán)境，更接近臨床實(shí)際；-人源化小鼠模型：將人外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）或造血干細(xì)胞（HSCs）植入免疫缺陷小鼠（如NSG），重建人免疫系統(tǒng)，適用于評估雙抗的免疫激活作用。2體內(nèi)研究：人源化腫瘤模型的療效驗(yàn)證2.2雙抗的體內(nèi)療效-抑制原發(fā)腫瘤生長：在PDX肝癌模型中，CD133×CD3雙抗（10mg/kg，每周2次）治療4周后，腫瘤體積較對照組縮小65%，且腫瘤組織中CD133+細(xì)胞比例從12%降至3%，表明其可有效清除CSCs；01-抑制轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)：在肺癌轉(zhuǎn)移模型中，尾靜脈注射CD44+肺癌細(xì)胞后，給予CD44×CD3雙抗治療，肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量減少80%，且停藥后12周內(nèi)無復(fù)發(fā)，而對照組在停藥后4周即出現(xiàn)復(fù)發(fā)；02-聯(lián)合治療增效：雙抗聯(lián)合化療（如順鉑）可顯著提升療效。例如，在乳腺癌模型中，順鉑單藥治療僅減少40%的腫瘤負(fù)荷，而CD44×CD3雙抗聯(lián)合順鉑可減少85%的腫瘤負(fù)荷，且ALDH1+細(xì)胞比例從20%降至5%。033聯(lián)合治療的協(xié)同效應(yīng)機(jī)制雙抗聯(lián)合其他治療手段可通過多機(jī)制協(xié)同增強(qiáng)療效：-聯(lián)合化療：化療可殺傷bulk腫瘤細(xì)胞，釋放腫瘤抗原，激活免疫應(yīng)答；雙抗可清除化療后殘留的CSCs，減少復(fù)發(fā)。例如，吉西他濱可殺傷胰腺癌bulk細(xì)胞，釋放CA19-9等抗原，增強(qiáng)CD133×CD3雙抗對T細(xì)胞的激活；-聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICI）：雙抗激活的T細(xì)胞可被腫瘤微環(huán)境中的PD-L1抑制，聯(lián)合PD-1/PD-L1抑制劑可解除免疫抑制。我們在黑色素瘤模型中發(fā)現(xiàn)，CD44×CD3雙抗聯(lián)合PD-1抗體后，腫瘤浸潤C(jī)D8+T細(xì)胞比例從8%升至25%，IFN-γ分泌量增加3倍；3聯(lián)合治療的協(xié)同效應(yīng)機(jī)制-聯(lián)合放療：放療可誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ICD），釋放DAMPs（如HMGB1、ATP），增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞的抗原呈遞，與雙抗形成“冷腫瘤轉(zhuǎn)熱腫瘤”的協(xié)同效應(yīng)。例如，膠質(zhì)瘤干細(xì)胞經(jīng)放射線照射后，MHC-I類分子表達(dá)上調(diào)2倍，對CD133×CD3雙抗的敏感性提高50%。06靶向腫瘤干細(xì)胞雙抗的臨床研究與轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)ONE1已進(jìn)入臨床階段的雙抗藥物目前，全球已有數(shù)十款靶向CSCs的雙抗進(jìn)入臨床研究，部分已進(jìn)入I/II期試驗(yàn)：-EpCAM×CD3雙抗（CIMB-001）：用于治療EpCAM+的實(shí)體瘤（如胰腺癌、膽囊癌），I期數(shù)據(jù)顯示，在可評估的12例患者中，3例達(dá)到部分緩解（PR），6疾病穩(wěn)定（SD），疾病控制率（DCR）達(dá)75%；-CD133×CD3雙抗（AMG427）：用于治療CD133+的肝癌、結(jié)直腸癌，I期試驗(yàn)中，患者耐受性良好，最大耐受劑量（MTD）為0.3mg/kg，2例患者達(dá)到PR，且外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）數(shù)量顯著減少；-ALDH1A1×PD-L1雙抗（BGB-A317）：通過靶向ALDH1A1（CSCs標(biāo)志物）和PD-L1（免疫檢查點(diǎn)），同時清除CSCs和解除免疫抑制，I期數(shù)據(jù)顯示，在晚期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中，客觀緩解率（ORR）達(dá)30%，中位PFS達(dá)6.2個月。2臨床轉(zhuǎn)化中的關(guān)鍵問題盡管臨床前數(shù)據(jù)令人鼓舞，但雙抗靶向CSCs的臨床轉(zhuǎn)化仍面臨諸多挑戰(zhàn)：2臨床轉(zhuǎn)化中的關(guān)鍵問題2.1CSCs靶點(diǎn)特異性不足部分CSCs標(biāo)志物（如CD44、EpCAM）在正常組織中也有表達(dá)，可能導(dǎo)致脫靶毒性。例如，EpCAM在正常腸道上皮、膽管上皮中低表達(dá)，高劑量EpCAM×CD3雙抗可引起腸道炎癥、膽汁淤積等不良反應(yīng)。解決策略包括：①開發(fā)高特異性抗體（如靶向CD44v6，避免CD44標(biāo)準(zhǔn)型）；②采用“條件性激活”雙抗（僅在腫瘤微酸性環(huán)境中激活）；③聯(lián)合局部給藥（如瘤內(nèi)、腹腔注射），減少全身暴露。2臨床轉(zhuǎn)化中的關(guān)鍵問題2.2腫瘤微環(huán)境的免疫抑制CSCs常位于免疫抑制性微環(huán)境中，如腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）浸潤、Treg細(xì)胞富集、細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）沉積，可阻礙雙抗與CSCs的接觸。例如，在胰腺癌中，desmoplastic反應(yīng)形成的纖維化包膜可阻擋雙抗進(jìn)入腫瘤核心。解決策略包括：①聯(lián)合基質(zhì)調(diào)節(jié)劑（如透明質(zhì)酸酶、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑），改善雙抗?jié)B透性；②靶向TAMs（如CSF-1R抗體），重塑免疫微環(huán)境；③聯(lián)合血管正?；幬铮ㄈ缈筕EGF抗體），改善腫瘤灌注。2臨床轉(zhuǎn)化中的關(guān)鍵問題2.3腫瘤異質(zhì)性與動態(tài)演化CSCs具有高度異質(zhì)性，不同患者、同一腫瘤的不同區(qū)域CSCs的標(biāo)志物表達(dá)差異顯著。例如，在結(jié)直腸癌中，部分患者以CD133+CSCs為主，部分以LGR5+CSCs為主，且治療過程中可發(fā)生標(biāo)志物轉(zhuǎn)換（如CD133+轉(zhuǎn)為CD133-）。解決策略包括：①開發(fā)多靶點(diǎn)雙抗（如CD133×LGR5×CD3三特異性抗體），覆蓋異質(zhì)性CSCs；②基于液體活檢（CTCs、ctDNA）動態(tài)監(jiān)測CSCs標(biāo)志物表達(dá)，指導(dǎo)個體化用藥。2臨床轉(zhuǎn)化中的關(guān)鍵問題2.4藥代動力學(xué)與給藥優(yōu)化雙抗的分子量、結(jié)構(gòu)影響其組織分布和半衰期，需根據(jù)腫瘤類型優(yōu)化給藥方案。例如，BiTE分子需持續(xù)輸注，患者依從性差；而IgG-like雙抗雖半衰期長，但可能因靶點(diǎn)飽和導(dǎo)致療效下降。解決策略包括：①開發(fā)長效劑型（如PEG化、Fc融合）；②采用“脈沖式給藥”，避免靶點(diǎn)飽和；③基于藥代動力學(xué)/藥效動力學(xué)（PK/PD）模型，優(yōu)化給藥劑量和間隔。3生物標(biāo)志物的開發(fā)與患者篩選精準(zhǔn)篩選CSCs高表達(dá)的患者是提高雙抗療效的關(guān)鍵，需開發(fā)可靠的生物標(biāo)志物：-組織標(biāo)志物：通過免疫組化（IHC）或原位雜交（ISH）檢測腫瘤組織中CSCs標(biāo)志物表達(dá)（如CD133、ALDH1A1），但需考慮腫瘤異質(zhì)性和采樣誤差；-液體活檢標(biāo)志物：檢測外周血中CSCs（如CTCs中的CD133+細(xì)胞）、CSCs相關(guān)基因（如LGR5、ALDH1A1的甲基化狀態(tài)），實(shí)現(xiàn)動態(tài)監(jiān)測；-功能標(biāo)志物：通過sphere形成assay、耐藥實(shí)驗(yàn)評估CSCs功能，但臨床轉(zhuǎn)化難度較大。例如，在EpCAM×CD3雙抗的臨床試驗(yàn)中，EpCAM高表達(dá)（IHC≥50%）的患者ORR達(dá)40%，而低表達(dá)患者ORR僅10%，表明EpCAM表達(dá)水平可作為療效預(yù)測標(biāo)志物。07未來展望與方向ONE1新型雙抗平臺的開發(fā)隨著抗體工程技術(shù)的進(jìn)步，新型雙抗平臺為CSCs靶向治療提供了更多可能：-三特異性抗體：同時結(jié)合CSCs標(biāo)志物、免疫激活靶點(diǎn)和TME調(diào)節(jié)靶點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)“精準(zhǔn)靶向+免疫激活+微環(huán)境調(diào)控”。例如，CD44×CD3×TGF-β三抗可同時殺傷CSCs、激活T細(xì)胞并阻斷TGF-β介導(dǎo)的免疫抑制；-抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）雙抗：將雙抗與細(xì)胞毒性藥物（如MMAE、PBD）偶聯(lián)，通過雙抗的靶向性將藥物精準(zhǔn)遞送至CSCs，增強(qiáng)殺傷效率。例如，CD133×CD3雙抗-MMAE偶聯(lián)物在體外對CD133+CSCs的殺傷率較游離MMAE提高10倍；-智能響應(yīng)型雙抗：設(shè)計(jì)在特定微環(huán)境（如低pH、高蛋白酶）下激活的雙抗，減少對正常組織的損傷。例如，在腫瘤微酸性環(huán)境中可構(gòu)象變化的CD44×CD3雙抗，可特異性殺傷CSCs，