D

I

S

I

N

F

E

C

T

A

N

T消毒劑目

錄消毒劑作用原理消毒劑效果確認(rèn)01消毒劑作用原理定義消毒：殺死物體上病原微生物的方法，并一定能殺死含芽孢的細(xì)菌或非病原體微生物。通常用化學(xué)的方法達(dá)到消毒的作用滅菌：指把物品上所有微生物（包括細(xì)菌芽孢在內(nèi)）全部殺死的方法，通常使用物理的方法達(dá)到滅菌的目的無菌：不存在微生物防腐：防止或抑制體外微生物生長的方法抑菌：抑制細(xì)菌生長消毒劑作用原理原理殺菌機(jī)理是釋放出新生態(tài)原

子氧、氧化菌體中的活性基

團(tuán)；殺菌特點是作用快而強(qiáng)，能殺死所有微生物，包括細(xì)

菌芽孢、病毒。以表面消毒

為主，如二氧化氯、雙氧水、臭氧、次氯酸鈉等，該類消

毒劑為滅菌劑。01020304殺菌機(jī)理是使蛋白變性或烷基化；殺菌特點是對細(xì)菌、芽孢、真菌、病毒均有效。但溫度影響較大。如甲醛、戊二醛等。該類消毒劑可做滅菌劑使用。殺菌機(jī)理是使蛋白變性、沉

淀或使酶系統(tǒng)失活；殺菌特

點是對真菌和部分病毒有效。殺菌機(jī)理是使蛋白變性，干擾代謝；殺菌特點是對細(xì)菌有效，對芽孢、真菌、病毒無效，如乙醇、異丙醇等。該類消毒劑為中效消毒劑，只能用于一般性消毒。消毒劑作用原理分類醇類一般消毒劑+++++++++++_異丙醇、乙醇季銨鹽類一般消毒++++++++++++－苯扎氯銨，取決濃度酚類一般消毒劑+++++++++++－二氯甲酚醛類殺孢子劑++++++++++++++2%戊二醛活性氧殺孢子劑++++++++++++++++++臭氧消毒劑作用原理消毒劑使用第四十三條D應(yīng)當(dāng)按照操作規(guī)程對潔凈區(qū)進(jìn)行清潔和消毒。一般情況下，所采用消毒劑的種類應(yīng)當(dāng)多于一種。不得用紫外線消毒替代化學(xué)消毒。應(yīng)當(dāng)定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)耐受菌株及污染情況。中國GMP附錄1消毒劑作用原理消毒劑使用4.33Thedisinfectionofcleanroomsisparticularlyimportant.Theyshouldbecleanedanddisinfectedthoroughlyinaccordancewithawrittenprogramme.Fordisinfectiontobeeffective,priorcleaningtoremovesurfacecontaminationshouldbeperformed.Cleaningprogrammesshouldeffectivelyremovedisinfectantresidues.Morethanonetypeofdisinfectingagentshouldbeemployedtoensurethatwheretheyhavedifferentmodesofaction,theircombinedusageiseffectiveagainstbacteriaandfungi.Disinfectionshouldincludetheperiodicuseofasporicidalagent.Monitoringshouldbeundertakenregularlyinordertoassesstheeffectivenessofthedisinfectionprogrammeandtodetectchangesintypesofmicrobialflora(e.g.organismsresistanttothedisinfectionregimecurrentlyinuse).潔凈室的消毒尤為重要。應(yīng)根據(jù)書面程序徹底清潔潔凈室并消毒。消毒前應(yīng)清潔以去除表面污染物，

確保消毒有效。清潔程序應(yīng)有效去除消毒劑殘留。應(yīng)使用一種以上的消毒劑，確保這些消毒劑有不同作用機(jī)制，其聯(lián)合使用能有效殺滅細(xì)菌和真菌。消毒應(yīng)包括定期使用殺孢子劑。應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測，以評估消毒程序的有效性，并檢測微生物菌群類型的變化（例如，對目前使用的消毒方式產(chǎn)生抗性的微生物）。EU

GMP

ANNEX1消毒劑作用原理消毒劑使用影響消毒效果的因素：pH溫度、濕度、濃度材質(zhì)和附著物質(zhì)接觸時間微生物的類型和數(shù)量消毒劑作用原理消毒劑使用至少選用兩種消毒劑在使用，應(yīng)配置一種殺孢子劑制定合適消毒劑的使用頻次及輪換周期新廠房可以憑經(jīng)驗制定，后期根據(jù)環(huán)境監(jiān)測結(jié)果放寬或加嚴(yán)02消毒劑效果確認(rèn)法規(guī)《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002）USP40

<1072>

消毒劑和防腐劑歐盟消毒劑懸液法殺細(xì)菌測試EN1276-2019

歐盟消毒劑懸液法殺真菌測試EN1650-2019歐盟消毒劑載體法殺細(xì)菌真菌效果測試EN13697-2015無菌生產(chǎn)設(shè)施的清潔消毒程序原理-第70號技術(shù)報告

（PDA注射劑協(xié)會）

中國GMP、EU

GMP消毒劑效果確認(rèn)法規(guī)第四十四條D應(yīng)當(dāng)監(jiān)測消毒劑和清潔劑的微生物污染狀況，配制后的消毒劑和清潔劑應(yīng)當(dāng)存放在清潔容器內(nèi)，存放期不得超過規(guī)定時限。A/B

級潔凈區(qū)應(yīng)當(dāng)使用無菌的或經(jīng)無菌處理的消毒劑和清潔劑。中國GMP指南附錄14.34Thedisinfectionprocessshouldbevalidated.Validationstudiesshoulddemonstratethesuitabilityandeffectivenessofdisinfectantsinthespecificmannerinwhichtheyareusedandonthetypeofsurfacematerial,orrepresentativematerialifjustified,andshouldsupportthein-useexpiryperiodsofpreparedsolutions.消毒工藝應(yīng)經(jīng)過驗證。驗證研究應(yīng)證明以特定方式使用消毒劑以及消毒劑對表面料或代表性材料（如經(jīng)論證）的適用性和有效性，并應(yīng)支持制備溶液的使用有效期。EU

GMP

ANNEX1消毒劑效果確認(rèn)法規(guī)消毒劑效果確認(rèn)消毒劑效果確認(rèn)－評估第1步

第2步第3步第4步第5步第6步驗證消毒劑的種類評估需要進(jìn)行的材質(zhì)：

PVC地坪、環(huán)氧彩砂、

不銹鋼、玻璃、彩鋼板、橡膠手套等等標(biāo)準(zhǔn)菌株+環(huán)境菌株儀器設(shè)備是否滿足、耗材試劑是否擁有人員是否具備崗位資質(zhì)檢驗?zāi)芰嶒炇矣袩o建立相應(yīng)的規(guī)章制度消毒劑效果確認(rèn)影響消毒效果的因素：溫度、濕度、濃度材質(zhì)和附著物質(zhì)接觸時間微生物的類型和數(shù)量作用方式消毒劑種類消毒劑效果確認(rèn)消毒劑效果確認(rèn)－試驗消毒劑原液開瓶后放置時長到效期的最后一天。根據(jù)說明書要求配制稀釋液，稀釋液再放置稀釋效期末后，進(jìn)行一系列消毒劑效力的驗證實驗。放置條件為潔凈室日常溫度即18-26℃，濕度為45-65%。目的：通過該試驗，確認(rèn)所用中和劑對測試的消毒劑有良好的中和作用，

對試驗用微生物及其恢復(fù)期培養(yǎng)無有害或不良影響。消毒劑效果確認(rèn)消毒劑效果確認(rèn)試驗工作菌液制備細(xì)菌：保藏工作菌株→TSA

30~35℃

18~24h→TSA

30~35℃

18~24h根據(jù)需求可以再傳代菌液以10

倍系列稀釋成含15～300cfu/mL

菌液，取1mL注入無菌平皿中，立即傾注TSA培養(yǎng)基，混勻，凝固，于30-35℃培養(yǎng)2天，計數(shù)。計算該稀釋級的平均菌落數(shù)，將計數(shù)結(jié)果換算成每毫升原菌液的菌落數(shù)。真菌：白色念珠菌保藏工作菌株→SDA

20~25℃

42~48h→SDA

20~25℃

42~48h黑曲霉保藏菌工作菌株→SDA

20~25℃

7~9d根據(jù)需求可以再傳代將菌液以10

倍系列稀釋成含15～150cfu/mL

菌液，取1mL注入無菌平皿中，立即傾注SDA培養(yǎng)基，混勻，凝固，于20-25℃培養(yǎng)3天，計數(shù)。計算該稀釋級的平均菌落數(shù)，將計數(shù)結(jié)果換算成每毫升原菌液的菌落數(shù)。消毒劑效果確認(rèn)1、中和劑鑒定試驗鑒定試驗準(zhǔn)備將消毒劑配制成需要的濃度菌液準(zhǔn)備：需準(zhǔn)備300～1600cfu/mL的菌懸液。將300～1600cfu/mL的菌懸液用稀釋液制備成10-1濃度，取1mL注入平皿，平行制備2皿，計數(shù)。2皿的平均值記為NV0選擇最差條件污染環(huán)境進(jìn)行測試干擾物：BSA（牛血清白蛋白）3g/L消毒劑效果確認(rèn)第一組：中和劑+菌懸液→培養(yǎng)目的：觀察中和劑是否能抑菌取中和劑8

mL+水1mL+工作菌液1mL，混勻作用10

min；取1

mL注入平皿，

平行制備2

平皿。傾注TSA培養(yǎng)基，混勻，凝固，置30-35℃

培養(yǎng)2天，計數(shù)。第二組：（消毒劑+中和劑）+菌懸液→培養(yǎng)目的：觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和殘留消毒劑對試驗菌的生長繁殖是否有影響取消毒劑8

mL+干擾物1mL+稀釋液1mL，混勻作用10

min；取混合物1mL+中和劑8

mL，作用5

min±10s，獲得中和產(chǎn)物。中和產(chǎn)物9

mL+工作菌液1

mL，混勻作用30

min；

取1

mL

注入平皿，

各平行制備2

平皿。傾注TSA培養(yǎng)基，混勻，凝固，置30-35℃

培養(yǎng)2

天，計數(shù)。消毒劑效果確認(rèn)第三組：稀釋液+菌懸液→培養(yǎng)目的：作陽性對照用工作菌液1

mL+干擾物1

mL，混合作用2

min，加入稀釋液8

mL，混勻作用10min；取1

mL

注入平皿，各平行制備2

平皿。傾注TSA培養(yǎng)基，混勻，

凝固，置30-35℃

培養(yǎng)2天，計數(shù)。第二組：稀釋液+中和劑→培養(yǎng)目的：陰性對照用取中和劑8

mL+干擾物1

mL+稀釋液1mL，混勻作用10

min；取1mL注入平皿，平行制備2平皿。傾注TSA培養(yǎng)基，混勻，凝固，置30-35℃培養(yǎng)2天，

計數(shù)。同一批次試劑及培養(yǎng)基做一次陰性對照試驗即可。消毒劑效果確認(rèn)菌落數(shù)值的計算：c：所有菌落數(shù)落在有效計數(shù)范圍內(nèi)的平皿上的菌落數(shù)的總和。n1：參加計算的較低稀釋級的平皿的個數(shù)。n2：參加計算的較高稀釋級的平皿的個數(shù)。d：較低稀釋級的稀釋度。消毒劑效果確認(rèn)可接受標(biāo)準(zhǔn)試驗結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。第1組菌落≥0.5倍NV0；第2組菌落≥0.5倍NV0；

第3組菌落≥0.5倍NV0；

陰性對照組應(yīng)無菌生長。消毒劑效果確認(rèn)目的：在實驗室內(nèi)測定消毒劑殺滅懸液中微生物所需的劑量和時間，以確認(rèn)各種消毒劑在一定濃度和一定作用時間下對各種相關(guān)代表菌種的殺滅效果消毒劑效果確認(rèn)試驗準(zhǔn)備將消毒劑配制成需要的濃度菌液準(zhǔn)備：細(xì)菌懸液濃度1.5×

10^8cfu/mL到5.0×

10^8cfu/mL.

真菌菌懸液濃度1.5

×

10^7cfu/mL

到

5.0

×

10^7cfu/mL選擇最差條件污染環(huán)境進(jìn)行測試干擾物：BSA（牛血清白蛋白）3g/L消毒劑效果確認(rèn)1.2.3.4.試驗過程試驗組：取無菌試管，標(biāo)明擬測消毒劑名稱和濃度。吸取1

mL干擾物質(zhì)至試管中，

加入1mL測試菌懸液?；靹蚬軆?nèi)液體后，保持2

min±10s。用無菌吸管吸取相應(yīng)濃度消毒液8

mL注入其中。并使成為均勻的菌藥混合液。消毒劑對測試微生物的接觸時間為5

min、10min和

15

min接觸時間過后，取出1

mL混合液，轉(zhuǎn)移至含有8

mL中和劑溶液的試管中，

同時加入1

mL水，混勻。中和時間5

min±10s，迅速取出1.0mL中和后的混合測試液（含有中和劑，樣品溶液，干擾物質(zhì)和測試用菌懸液）使用傾注法接種計數(shù)。每個樣品重復(fù)一個平行樣。（計數(shù)為Ｎa）消毒劑效果確認(rèn)1.2.3.4.試驗過程陽性對照組：吸取1

mL干擾物質(zhì)至試管中，加入1

mL測試菌懸液。混勻管內(nèi)液體后，保持2

min±10s。再加入8

mL緩沖液，混勻后作用若干時間。取出1

mL混合液，

轉(zhuǎn)移至含有8

mL中和劑溶液的試管中，同時加入1

mL水，混勻。中和時間5

min±10s結(jié)束后，將中和液用稀釋液進(jìn)行梯度稀釋。細(xì)菌中和液稀釋至10-4、10-5和10-6；真菌中和液稀釋至10-3、10-4和10-5。取1mL上述稀釋液分別加入培養(yǎng)皿中，使用傾注法進(jìn)行計數(shù)。每個樣品重復(fù)一個平行樣。（計數(shù)為Ｎo）。消毒劑效果確認(rèn)1.2.3.2、懸液定量殺菌試驗試驗過程陰性對照組：吸取1

mL干擾物質(zhì)至試管中，加入1

mL稀釋液。混勻管內(nèi)液體后，保持2

min±10s。再加入8mL緩沖液，混勻后作用若干時間。取出1

mL混合液，

轉(zhuǎn)移至含有8mL中和劑溶液的試管中，同時加入1

mL水，混勻。取1mL上述混合液分別加入培養(yǎng)皿中，使用傾注法進(jìn)行計數(shù)。

每個樣品重復(fù)一個平行樣。消毒劑效果確認(rèn)結(jié)果試驗樣本（細(xì)菌）放置在30-35℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，（真菌）20-25℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，培養(yǎng)后觀察最終結(jié)果。計算各組的活菌濃度

(cfu/mL），并按下式計算殺滅對數(shù)減少值。R=

logNo-

logNa根據(jù)各組計算的結(jié)果，確定不同消毒劑在相應(yīng)濃度及最短有效作用時間的殺滅對數(shù)減少值。消毒劑效果確認(rèn)可接受標(biāo)準(zhǔn)懸液殺滅測試應(yīng)符合

細(xì)菌≥5個對數(shù)減少值真菌≥4個對數(shù)減少值陰性對照組應(yīng)無菌生長。消毒劑效果確認(rèn)目的：在實驗室內(nèi)測定消毒劑殺滅載體上微生物所需的劑量和時間，以確認(rèn)各種消毒劑在一定濃度和一定接觸時間下對各種相關(guān)代表菌種的殺滅效果。消毒劑效果確認(rèn)試驗準(zhǔn)備將消毒劑配制成需要的濃度菌液準(zhǔn)備：細(xì)菌懸液濃度1.5×

10^8cfu/mL到5.0×

10^8cfu/mL.

真菌菌懸液濃度1.5

×

10^7cfu/mL

到

5.0

×

10^7cfu/mL選擇最差條件污染環(huán)境進(jìn)行測試干擾物：BSA（牛血清白蛋白）3g/L載體準(zhǔn)備：直徑2cm圓片，表面平整；去除表面活性劑，消毒滅菌取清洗干凈并經(jīng)滅菌的圓形載體，平鋪于無菌平皿內(nèi)，用移液器逐片滴加菌液，菌液滴加量每片0.05

mL，在無菌環(huán)境中自然晾干消毒劑效果確認(rèn)1.2.3.試驗過程試驗組：按照無菌操作的方法將測試片放在培養(yǎng)皿中并確保其處于水平位置。每個樣品準(zhǔn)備兩塊同樣的測試片。（消毒劑的接觸時間選擇懸液定量殺菌試驗中符合要求的最短時間）。每個表面加入0.1

mL的消毒劑溶液，確保干燥表面的各個部分均能夠被樣品溶液所潤濕覆蓋。經(jīng)過最短合格接觸時間之后，將各測試載體片分別轉(zhuǎn)移至裝有5

g玻璃珠和10

mL中和劑的小瓶中。圓片接種微生物的一面倒置于玻璃珠上面以確保玻璃珠與接種面充分接觸，

進(jìn)而能夠促進(jìn)表面微生物脫離進(jìn)入中和劑溶液。消毒劑效果確認(rèn)試驗過程試驗組：4、將小瓶放在水平的搖晃裝置中或者在水平表面上用手進(jìn)行搖晃1

min，確保玻璃珠能夠在接種表面持續(xù)滾動。確保玻璃珠可以自由的移動以及有足夠的玻璃珠來支撐該測試接種表面。5、對于消毒劑測試，中和時間5

min±10s結(jié)束后，將中和液用稀釋液進(jìn)行梯度稀釋至10-1（細(xì)菌和真菌）。取1

mL上述稀釋液加入培養(yǎng)皿中，細(xì)菌樣品倒入15-20

mL熔化好的45±1℃的TSA培養(yǎng)基，真菌樣品倒入15-20

mL熔化好的45±1℃的SDA培養(yǎng)基,充分混勻后待凝固，每個樣品均重復(fù)一個平行樣（計數(shù)為Ｎd）消毒劑效果確認(rèn)1.2.3.4.試驗過程陽性對照組：吸取1mL干擾物質(zhì)至試管中，加入1mL測試菌懸液，混勻管內(nèi)液體后，保持2

min±10s。圓形載體平鋪于無菌平皿內(nèi)，用移液器逐片滴加菌液量0.05

mL/片，在無菌環(huán)境中自然晾干。每個表面加入0.1

mL緩沖液，將各測試載體片分別轉(zhuǎn)移至裝有5

g玻璃珠和10

mL中和劑的小瓶中。中和時間5

min±10s結(jié)束后，