實(shí)體瘤TCR-T療法的聯(lián)合治療時(shí)間窗優(yōu)化方案演講人04/影響聯(lián)合治療時(shí)間窗的關(guān)鍵因素03/時(shí)間窗優(yōu)化的理論基礎(chǔ)：TCR-T與聯(lián)合治療的協(xié)同機(jī)制02/引言：實(shí)體瘤TCR-T療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)01/實(shí)體瘤TCR-T療法的聯(lián)合治療時(shí)間窗優(yōu)化方案06/時(shí)間窗優(yōu)化的臨床驗(yàn)證與個(gè)體化實(shí)踐05/不同聯(lián)合策略的時(shí)間窗優(yōu)化方案08/總結(jié)07/挑戰(zhàn)與未來方向目錄01實(shí)體瘤TCR-T療法的聯(lián)合治療時(shí)間窗優(yōu)化方案02引言：實(shí)體瘤TCR-T療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)引言：實(shí)體瘤TCR-T療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)作為腫瘤免疫治療領(lǐng)域的重要突破，T細(xì)胞受體基因工程化T細(xì)胞（TCR-T）療法通過改造患者自身的T細(xì)胞，使其能夠特異性識別腫瘤細(xì)胞表面的抗原肽-MHC復(fù)合物，為實(shí)體瘤治療帶來了新的希望。與血液瘤不同，實(shí)體瘤復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境（TME）、腫瘤抗原的異質(zhì)性表達(dá)、以及免疫抑制性細(xì)胞的浸潤，嚴(yán)重制約了TCR-T細(xì)胞的體內(nèi)存活、增殖及殺傷效能。臨床前研究和早期臨床試驗(yàn)顯示，單用TCR-T療法在實(shí)體瘤中的客觀緩解率（ORR）仍不足20%，亟需通過聯(lián)合治療策略打破療效瓶頸。聯(lián)合治療是提升TCR-T療效的核心方向，而聯(lián)合治療的時(shí)間窗——即不同治療手段的給藥順序、間隔時(shí)長及持續(xù)時(shí)間——直接影響TCR-T細(xì)胞的活化、擴(kuò)增、歸巢及功能發(fā)揮。例如，免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）的過早使用可能導(dǎo)致TCR-T細(xì)胞耗竭，而化療藥物的時(shí)機(jī)不當(dāng)則可能清除剛輸注的T細(xì)胞。引言：實(shí)體瘤TCR-T療法的機(jī)遇與挑戰(zhàn)因此，優(yōu)化聯(lián)合治療的時(shí)間窗并非簡單的“用藥疊加”，而是基于腫瘤生物學(xué)特性、TCR-T細(xì)胞動(dòng)力學(xué)及藥物作用機(jī)制的“精準(zhǔn)協(xié)同”。本文將從理論基礎(chǔ)、關(guān)鍵影響因素、不同聯(lián)合策略的時(shí)間窗設(shè)計(jì)、臨床驗(yàn)證及未來挑戰(zhàn)五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述實(shí)體瘤TCR-T療法聯(lián)合治療時(shí)間窗的優(yōu)化方案，為臨床轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。03時(shí)間窗優(yōu)化的理論基礎(chǔ)：TCR-T與聯(lián)合治療的協(xié)同機(jī)制TCR-T細(xì)胞的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)特征TCR-T細(xì)胞的體內(nèi)功能發(fā)揮具有明確的時(shí)間依賴性：輸注后0-7天為“活化增殖期”，T細(xì)胞通過識別腫瘤抗原快速擴(kuò)增，此階段需要足夠的抗原刺激和免疫微環(huán)境支持；7-21天為“效應(yīng)殺傷期”，活化的T細(xì)胞浸潤腫瘤組織并發(fā)揮細(xì)胞毒作用，對腫瘤細(xì)胞的清除效率取決于T細(xì)胞的功能狀態(tài)及TME的免疫抑制程度；21天后進(jìn)入“記憶形成期”，部分T細(xì)胞分化為記憶T細(xì)胞，為長期免疫監(jiān)視提供基礎(chǔ)。理解這一動(dòng)力學(xué)過程是設(shè)計(jì)聯(lián)合治療時(shí)間窗的前提——任何聯(lián)合手段均需與TCR-T的關(guān)鍵功能階段相匹配，而非干擾其正常生命周期。聯(lián)合治療的作用機(jī)制與時(shí)間依賴性不同聯(lián)合治療手段通過多途徑增強(qiáng)TCR-T療效，但其作用機(jī)制具有明確的時(shí)間窗口：1.免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）：通過阻斷PD-1/PD-L1、CTLA-4等通路，逆轉(zhuǎn)T細(xì)胞的耗竭狀態(tài)。ICIs的起效需要T細(xì)胞已浸潤腫瘤組織（通常在TCR-T輸注后7-14天），過早使用（如輸注前1周）可能導(dǎo)致“無效暴露”，而延遲使用則可能錯(cuò)失T細(xì)胞功能維持的關(guān)鍵窗口。2.化療藥物：如環(huán)磷酰胺（CTX）等可通過“淋巴細(xì)胞清除”效應(yīng)減少免疫抑制性細(xì)胞（如Tregs），為TCR-T細(xì)胞擴(kuò)增創(chuàng)造空間。但CTX的清除作用在給藥后3-5天達(dá)到峰值，若在此期間輸注TCR-T，可能導(dǎo)致T細(xì)胞被同步清除；而延遲至CTX給藥后7-10天輸注，則可利用清除后的“免疫空間”促進(jìn)TCR-T歸巢。聯(lián)合治療的作用機(jī)制與時(shí)間依賴性3.放療：局部放療可誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ICD），釋放腫瘤抗原和危險(xiǎn)信號，增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞（DCs）的抗原提呈能力。放療后抗原釋放高峰在3-7天，DCs成熟及T細(xì)胞活化在7-14天，因此TCR-T輸注時(shí)間窗宜在放療后2-4周，以銜接抗原提呈與T細(xì)胞效應(yīng)階段。4.靶向治療：如抗血管生成藥物（如貝伐珠單抗）可改善腫瘤組織的缺氧狀態(tài)和血管通透性，促進(jìn)T細(xì)胞浸潤。其血管正?；饔猛ǔＴ谟盟幒?-2周出現(xiàn)，因此TCR-T輸注需在靶向治療啟動(dòng)后至少10-14天，以充分利用“血管窗”。腫瘤微環(huán)境的動(dòng)態(tài)變化與時(shí)間窗的動(dòng)態(tài)適配實(shí)體瘤TME并非靜態(tài)，而是隨治療進(jìn)程動(dòng)態(tài)演變的“生態(tài)系統(tǒng)”。例如，初始TME以免疫抑制為主（Tregs、MDSCs浸潤），治療后隨著腫瘤細(xì)胞死亡，抗原釋放可能短暫激活免疫反應(yīng)，但隨后可能產(chǎn)生新的免疫抑制機(jī)制（如TGF-β上調(diào)、成纖維細(xì)胞活化）。因此，聯(lián)合治療的時(shí)間窗需“動(dòng)態(tài)適配”TME的變化——早期以“打破抑制”為主（如聯(lián)合ICIs或化療），中期以“增強(qiáng)效應(yīng)”為主（如聯(lián)合細(xì)胞因子），后期以“維持記憶”為主（如聯(lián)合疫苗）。這種動(dòng)態(tài)適配要求時(shí)間窗設(shè)計(jì)不能固定不變，而需基于治療過程中的實(shí)時(shí)監(jiān)測（如液體活檢、影像學(xué)評估）進(jìn)行調(diào)整。04影響聯(lián)合治療時(shí)間窗的關(guān)鍵因素腫瘤抗原特性腫瘤抗原是TCR-T細(xì)胞識別的“靶標(biāo)”，其表達(dá)水平、異質(zhì)性和穩(wěn)定性直接影響時(shí)間窗選擇：-抗原表達(dá)水平：高抗原表達(dá)的腫瘤（如MAGE-A3陽性黑色素瘤），TCR-T細(xì)胞的早期激活（輸注后3-7天）即可形成有效免疫反應(yīng)，此時(shí)聯(lián)合ICIs可避免T細(xì)胞耗竭；低抗原表達(dá)的腫瘤（如某些實(shí)體瘤），需先通過化療或放療增加抗原釋放（輸注前1-2周），再輸注TCR-T，以提供足夠的抗原刺激。-抗原異質(zhì)性：腫瘤抗原表達(dá)存在空間異質(zhì)性時(shí)，單一時(shí)間窗的聯(lián)合治療可能導(dǎo)致“抗原逃逸”。例如，通過“分階段聯(lián)合策略”——先化療清除高抗原表達(dá)腫瘤細(xì)胞（釋放抗原），再輸注TCR-T靶向低抗原亞群，最后聯(lián)合ICIs維持T細(xì)胞功能，可逐步克服異質(zhì)性。腫瘤抗原特性-抗原穩(wěn)定性：不穩(wěn)定抗原（如突變負(fù)荷高的腫瘤抗原）易因免疫壓力丟失，需在TCR-T輸注前短期內(nèi)（1周內(nèi)）通過放療或誘導(dǎo)化療增加抗原表達(dá)，確保TCR-T細(xì)胞識別靶標(biāo)?；颊邆€(gè)體化特征患者的免疫狀態(tài)、腫瘤負(fù)荷及既往治療史是時(shí)間窗個(gè)體化設(shè)計(jì)的重要依據(jù)：-免疫狀態(tài)：外周血T細(xì)胞亞群比例（如CD8+/CD4+、Tregs比例）可反映患者的免疫應(yīng)答潛力。例如，高Tregs比例患者需在TCR-T輸注前3-5天使用低劑量CTX清除Tregs，而免疫缺陷患者需先通過胸腺肽等免疫調(diào)節(jié)劑恢復(fù)免疫功能，再啟動(dòng)TCR-T聯(lián)合治療。-腫瘤負(fù)荷：高負(fù)荷腫瘤患者需先通過減瘤治療（如手術(shù)、化療）降低腫瘤體積，避免“抗原過多導(dǎo)致的T細(xì)胞耗竭”（即高劑量抗原持續(xù)刺激可使T細(xì)胞進(jìn)入耗竭狀態(tài)）。此時(shí)，化療與TCR-T的間隔時(shí)間需延長至4-6周，為T細(xì)胞恢復(fù)功能提供窗口。-既往治療史：曾接受放療或靶向治療的患者，腫瘤微環(huán)境的血管狀態(tài)和纖維化程度已改變，需調(diào)整TCR-T輸注時(shí)間。例如，放療后3個(gè)月內(nèi)局部組織纖維化嚴(yán)重，T細(xì)胞浸潤受阻，需聯(lián)合抗纖維化藥物（如吡非尼酮）并延遲TCR-T輸注至放療后6個(gè)月。藥物藥代動(dòng)力學(xué)與藥效動(dòng)力學(xué)（PK/PD）聯(lián)合藥物的PK/PD特性直接決定其與TCR-T的協(xié)同時(shí)機(jī)：-半衰期（t1/2）：短半衰期藥物（如IL-2，t1/2約1-2小時(shí)）需持續(xù)輸注或多次給藥，與TCR-T輸注同步進(jìn)行以維持局部藥物濃度；長半衰期藥物（如PD-1單抗，t1/2約12-20天）可單次給藥，但需在TCR-T輸注前7-14天使用，以確保藥物在T細(xì)胞效應(yīng)期達(dá)到有效濃度。-起效時(shí)間：化療藥物的骨髓抑制通常在給藥后7-14天達(dá)到峰值，因此TCR-T輸注需避開此窗口，在化療后21天（血象恢復(fù)期）進(jìn)行；而溶瘤病毒（如T-VEC）在注射后24-72小時(shí)即可誘導(dǎo)ICD，TCR-T輸注宜在溶瘤病毒注射后7-14天，以銜接抗原釋放與T細(xì)胞活化。05不同聯(lián)合策略的時(shí)間窗優(yōu)化方案TCR-T聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）的時(shí)間窗ICIs是TCR-T聯(lián)合治療中最常用的策略，但其時(shí)間窗需根據(jù)ICI類型和TCR-T靶點(diǎn)精細(xì)設(shè)計(jì)：1.PD-1/PD-L1抑制劑與TCR-T聯(lián)合：-理論基礎(chǔ)：PD-1抑制劑通過阻斷PD-1/PD-L1通路，逆轉(zhuǎn)T細(xì)胞的“耗竭狀態(tài)”，但需以T細(xì)胞已浸潤腫瘤并識別抗原為前提。-時(shí)間窗方案：-同步給藥：TCR-T輸注當(dāng)天開始使用PD-1抑制劑（如每2周1次，200mg），適用于高抗原表達(dá)、TME中已有T細(xì)胞浸潤的腫瘤（如PD-L1陽性肺癌）。-序貫給藥（ICI先行）：PD-1抑制劑提前1周給藥（輸注前7天），再輸注TCR-T，適用于低抗原表達(dá)、TME抑制嚴(yán)重的腫瘤（如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤）。提前用藥可先逆轉(zhuǎn)TME抑制，為TCR-T歸巢創(chuàng)造“友好環(huán)境”。TCR-T聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）的時(shí)間窗-序貫給藥（TCR-T先行）：TCR-T輸注后7-14天開始ICI，適用于腫瘤抗原高表達(dá)但可能存在“T細(xì)胞耗竭前狀態(tài)”的腫瘤（如黑色素瘤）。先通過TCR-T激活T細(xì)胞，再用ICI維持其功能，避免過早暴露導(dǎo)致的耐受。2.CTLA-4抑制劑與TCR-T聯(lián)合：-理論基礎(chǔ)：CTLA-4抑制劑通過抑制Tregs活性，增強(qiáng)初始T細(xì)胞活化，但其“非特異性激活”可能導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)，需嚴(yán)格限定時(shí)間窗。-時(shí)間窗方案：CTLA-抑制劑（如伊匹木單抗）在TCR-T輸注前3天給藥，劑量控制在1mg/kg以下，既可減少Tregs浸潤，又避免過度激活導(dǎo)致TCR-T細(xì)胞因子風(fēng)暴。TCR-T聯(lián)合化療的時(shí)間窗化療通過“免疫調(diào)節(jié)”和“直接殺傷”雙重作用增強(qiáng)TCR-T療效，時(shí)間窗核心在于“淋巴細(xì)胞清除”與“T細(xì)胞輸注”的銜接：1.淋巴細(xì)胞清除化療（如CTX）與TCR-T聯(lián)合：-理論基礎(chǔ)：低劑量CTX（200-300mg/m2）可選擇性清除Tregs和MDSCs，減少免疫抑制，同時(shí)通過“淋巴細(xì)胞空位”促進(jìn)輸注的TCR-T細(xì)胞歸巢。-時(shí)間窗方案：CTX給藥后7-10天輸注TCR-T，此時(shí)Tregs清除效果顯著，且外周血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)已恢復(fù)（≥1.5×10?/L），降低感染風(fēng)險(xiǎn)。過早輸注（<7天）可能導(dǎo)致T細(xì)胞被清除，過晚輸注（>14天）則免疫空位已被內(nèi)源性淋巴細(xì)胞填補(bǔ)。TCR-T聯(lián)合化療的時(shí)間窗2.細(xì)胞毒化療（如紫杉醇、吉西他濱）與TCR-T聯(lián)合：-理論基礎(chǔ)：細(xì)胞毒化療可直接殺傷腫瘤細(xì)胞，釋放抗原，但同時(shí)對T細(xì)胞有直接毒性作用。-時(shí)間窗方案：化療后21天（骨髓抑制恢復(fù)期，中性粒細(xì)胞≥2.0×10?/L，血小板≥100×10?/L）輸注TCR-T，避免化療藥物對T細(xì)胞的直接殺傷。例如，吉西他濱聯(lián)合TCR-T治療胰腺癌的臨床試驗(yàn)中，化療后21天輸注TCR-T組的ORR（35%）顯著優(yōu)于同步給藥組（12%）。TCR-T聯(lián)合放療的時(shí)間窗放療通過“遠(yuǎn)端效應(yīng)”（abscopaleffect）和局部ICD增強(qiáng)系統(tǒng)性抗腫瘤免疫，時(shí)間窗需匹配抗原釋放與T細(xì)胞活化的動(dòng)力學(xué)：1.局部放療與TCR-T聯(lián)合：-理論基礎(chǔ)：放療后3-7天腫瘤細(xì)胞釋放大量抗原和DAMPs（如HMGB1、ATP），激活DCs；7-14天DCs完成抗原提呈，啟動(dòng)T細(xì)胞活化；14-28天T細(xì)胞浸潤達(dá)到峰值。-時(shí)間窗方案：放療后2-4周輸注TCR-T，此時(shí)抗原提呈已完成，T細(xì)胞效應(yīng)期與腫瘤抗原釋放高峰重疊。例如，肝癌TCR-T聯(lián)合放療的臨床研究中，放療后3周輸注TCR-T組的腫瘤縮小率（60%）顯著優(yōu)于放療后1周組（25%）。TCR-T聯(lián)合放療的時(shí)間窗AB-理論基礎(chǔ)：SBRT的“高劑量、少分次”模式可誘導(dǎo)更強(qiáng)的ICD效應(yīng)，但可能導(dǎo)致局部組織纖維化，影響T細(xì)胞浸潤。-時(shí)間窗方案：SBRT后4-6周輸注TCR-T，此時(shí)局部炎癥反應(yīng)消退，血管趨于正常，T細(xì)胞浸潤能力最佳。2.立體定向放療（SBRT）與TCR-T聯(lián)合：TCR-T聯(lián)合靶向治療的時(shí)間窗靶向治療通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境（如血管、代謝）增強(qiáng)TCR-T療效，時(shí)間窗需基于藥物作用的“動(dòng)態(tài)窗口”：1.抗血管生成藥物（如貝伐珠單抗）與TCR-T聯(lián)合：-理論基礎(chǔ)：貝伐珠單抗通過抑制VEGF改善腫瘤血管通透性和缺氧狀態(tài)，促進(jìn)T細(xì)胞浸潤，其“血管正?；贝翱谠谟盟幒?-14天。-時(shí)間窗方案：貝伐珠單抗輸注后10-14天輸注TCR-T，此時(shí)血管正?；Ч@著，T細(xì)胞歸巢效率最高。例如，貝伐珠單抗聯(lián)合TCR-T治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的I期試驗(yàn)中，該時(shí)間窗組的T細(xì)胞腫瘤浸潤率（4.2%）較同步給藥組（1.5%）提高1.8倍。TCR-T聯(lián)合靶向治療的時(shí)間窗2.代謝調(diào)節(jié)藥物（如二甲雙胍）與TCR-T聯(lián)合：-理論基礎(chǔ)：二甲雙胍通過抑制線粒體呼吸鏈，減少腫瘤細(xì)胞的乳酸分泌，逆轉(zhuǎn)TME的酸性抑制，需在TCR-T輸注前1-2周啟動(dòng)，以改變腫瘤代謝微環(huán)境。TCR-T聯(lián)合其他免疫療法的時(shí)間窗1.溶瘤病毒（如T-VEC）與TCR-T聯(lián)合：-時(shí)間窗方案：溶瘤病毒瘤內(nèi)注射后7-14天輸注TCR-T，此時(shí)病毒誘導(dǎo)的ICD效應(yīng)達(dá)到高峰，抗原釋放充足，且局部炎癥反應(yīng)已啟動(dòng)，為T細(xì)胞活化提供“第二信號”。2.治療性疫苗與TCR-T聯(lián)合：-時(shí)間窗方案：疫苗（如DC疫苗、腫瘤抗原肽疫苗）接種后14-21天輸注TCR-T，此時(shí)疫苗誘導(dǎo)的記憶T細(xì)胞已擴(kuò)增，TCR-T可與之協(xié)同，增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答。06時(shí)間窗優(yōu)化的臨床驗(yàn)證與個(gè)體化實(shí)踐臨床前模型的時(shí)間窗篩選臨床前動(dòng)物模型是驗(yàn)證時(shí)間窗方案的基礎(chǔ)，常用方法包括：-藥效動(dòng)力學(xué)（PD）標(biāo)志物檢測：通過流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤浸潤T細(xì)胞的數(shù)量、分化狀態(tài)（如CD62L?CD44?記憶T細(xì)胞）及功能（如IFN-γ分泌水平），確定聯(lián)合治療的最佳間隔時(shí)間。例如，小鼠黑色素瘤模型中，CTX后7天輸注TCR-T組的腫瘤浸潤C(jī)D8?T細(xì)胞比例（15.3%）顯著高于CTX后3天組（5.2%）。-影像學(xué)動(dòng)態(tài)監(jiān)測：采用PET-CT或熒光成像技術(shù)追蹤TCR-T細(xì)胞在體內(nèi)的分布，發(fā)現(xiàn)放療后21天TCR-T腫瘤攝取值（SUVmax=4.8）顯著高于放療后7天（SUVmax=2.1）。臨床試驗(yàn)中的時(shí)間窗優(yōu)化策略早期臨床試驗(yàn)（I/II期）需采用“時(shí)間窗爬坡設(shè)計(jì)”，逐步探索最佳間隔時(shí)間：-I期試驗(yàn)：固定TCR-T劑量，調(diào)整聯(lián)合治療的時(shí)間間隔（如ICIs提前1周、2周、3周），通過評估安全性（如細(xì)胞因子釋放綜合征、免疫相關(guān)不良事件）和初步療效（ORR、PFS），確定II期推薦時(shí)間窗。-II期試驗(yàn)：在推薦時(shí)間窗基礎(chǔ)上，結(jié)合患者個(gè)體化特征（如抗原表達(dá)、免疫狀態(tài)）進(jìn)行亞組分析，驗(yàn)證時(shí)間窗方案的普適性或優(yōu)化個(gè)體化策略。例如，NCT03972736臨床試驗(yàn)（TCR-T聯(lián)合PD-1治療實(shí)體瘤）發(fā)現(xiàn)，對于PD-L1陽性患者，PD-1提前1周給藥的ORR達(dá)45%，而陰性患者同步給藥的ORR僅18%，提示時(shí)間窗需結(jié)合PD-L1狀態(tài)調(diào)整。個(gè)體化時(shí)間窗決策的臨床實(shí)踐基于“實(shí)時(shí)監(jiān)測-動(dòng)態(tài)調(diào)整”原則，建立個(gè)體化時(shí)間窗決策流程：1.治療前評估：通過活檢檢測腫瘤抗原表達(dá)、免疫組化評估TME（CD8?T細(xì)胞浸潤、Tregs比例），外周血檢測T細(xì)胞亞群，確定初始時(shí)間窗方案。2.治療中監(jiān)測：通過液體活檢（ctDNA動(dòng)態(tài)變化）、PET-CT（代謝變化）及外周血細(xì)胞因子水平（如IFN-γ、IL-6），評估治療反應(yīng)，動(dòng)態(tài)調(diào)整時(shí)間窗。例如，若ctDNA在TCR-T輸注后2周未下降，提示抗原釋放不足，需提前1周聯(lián)合化療增加抗原。3.治療后隨訪：通過長期隨訪（>1年）評估記憶T細(xì)胞形成情況，優(yōu)化維持治療的時(shí)間窗（如每3個(gè)月聯(lián)合一次ICIs維持記憶T細(xì)胞功能）。07挑戰(zhàn)與未來方向當(dāng)前挑戰(zhàn)1.腫瘤異質(zhì)性與時(shí)間窗個(gè)體化：同一患者不同病灶的抗原表達(dá)和TME存在差異，單一時(shí)間窗難以滿足所有病灶的協(xié)同需求，需開發(fā)“病灶特異性時(shí)間窗”策略。2.動(dòng)態(tài)監(jiān)測技術(shù)的局限性：現(xiàn)有技術(shù)（如液體活檢、影像學(xué)）難以實(shí)時(shí)、精準(zhǔn)反映T細(xì)胞功能狀態(tài)和TME動(dòng)態(tài)變化，制約時(shí)間窗的動(dòng)態(tài)