2026屆新高考生物熱點(diǎn)沖刺復(fù)習(xí)通過細(xì)胞融合可產(chǎn)生具有新特性的細(xì)胞

乳腺癌常被稱為“粉紅殺手”，其發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的首位。2020年全球癌癥數(shù)據(jù)顯示：女性乳腺癌已經(jīng)超過肺癌成為發(fā)病率最高的癌種。每年新發(fā)病例約226萬，占所有腫瘤的11.7%。人類表皮生長因子受體II（HER2）是一種細(xì)胞膜上的受體，能夠識別人類表皮生長因子EGF，發(fā)生特異性結(jié)合，維持細(xì)胞的正常生長分裂。乳腺癌細(xì)胞大多出現(xiàn)HER2過度表達(dá)，與人類表皮生長因子EGF特異性結(jié)合后，會導(dǎo)致細(xì)胞受到過度的刺激，造成細(xì)胞異常的生長分裂。EGFEGF析病理EGFEGF析病理思考:（1）患了乳腺癌的病人，該如何治療呢？

（2）HER2基因相當(dāng)于正常細(xì)胞中的原癌基因還是抑癌基因？原癌基因①手術(shù)、放療、化療②敲除HER2基因？③阻礙EGF與受體結(jié)合【資料】臨床上目前使用的一種名為曲妥珠的單克隆抗體，是一種靶向人類表皮生長因子受體II（HER2）的抗體藥物，能夠有效延緩HER2過度表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞的生長。分析：Q1：與血清中的抗體相比，單抗有什么優(yōu)點(diǎn)？Q2：曲妥珠單抗能延緩癌細(xì)胞生長的機(jī)理？①特異性強(qiáng)、靈敏度高；②療效高、毒副作用小EGF曲妥珠單抗與HER-2發(fā)生特異性結(jié)合，阻止EGF與HER-2結(jié)合，進(jìn)而延緩癌細(xì)胞生長。同學(xué)們知道4D5-單抗是如何制備的嗎？【資料】曲妥珠單抗的前身是運(yùn)用雜交瘤技術(shù)制備的鼠源性單抗4D5?！净顒印啃〗M合作，構(gòu)建4D5-單克隆抗體藥物制備的流程圖完成后思考下面的問題：Q1：制備4D5-單抗時注射給小鼠的抗原是什么？Q2：單抗的制備運(yùn)用了細(xì)胞融合技術(shù)，誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有哪些？Q3：只考慮細(xì)胞兩兩融合，融合體系中有哪些類型的細(xì)胞？Q4：什么是雜交瘤細(xì)胞？如何篩選得到雜交瘤細(xì)胞？Q5：雜交瘤細(xì)胞有什么特點(diǎn)？Q6：融合獲得的雜交瘤細(xì)胞一定具有雙親特性嗎？Q7：第一次篩選和第二次篩選的目的和方法分別是什么？Q8：利用選出的產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞如何獲得單克隆抗體？②融合所用的瘤細(xì)胞是經(jīng)毒性培養(yǎng)基選出的HGPRT-細(xì)胞株，因此只能經(jīng)由葉酸作為輔酶參與的DNA合成過程。①正常的B淋巴細(xì)胞在培養(yǎng)基中僅能存活5-7天。③氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑，因此只有“B瘤”融合細(xì)胞才能在HAT培養(yǎng)基（次黃嘌呤H、氨基蝶呤A、胸腺嘧啶核苷T）上存活與繁殖。【任務(wù)一】運(yùn)用細(xì)胞融合技術(shù)制備曲妥珠單抗分工：組長1人；記錄員1人；展示員1人；協(xié)助員1人；請全體成員參與討論經(jīng)HER-2免疫的小鼠脾臟第二次篩選：通過抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行抗體檢測獲得能產(chǎn)生所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞第一次篩選：通過HAT選擇培養(yǎng)基獲得雜交瘤細(xì)胞①動物免疫②細(xì)胞融合③雜交瘤細(xì)胞的篩選與克隆培養(yǎng)④抗體大量制備B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞融合、篩選篩選分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)、提取4D5-單克隆抗體單克隆抗體制備流程體外培養(yǎng)法小鼠腹水誘生法聚乙二醇；電脈沖、激光；滅活的仙臺病毒；【資料分析】臨床使用的曲妥珠單抗是一種在4D5-單抗基礎(chǔ)上改造的人源化單克隆抗體，是將小鼠中制備的抗體中識別抗原的小片段與人的抗體框架嫁接在一起形成的。分析：Q1：4D5這種鼠源抗體直接注入人體可能存在什么問題？可能會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)Q2：曲妥珠單抗制備為人鼠嵌合抗體有什么優(yōu)點(diǎn)？既能特異性識別HER2，又能降低免疫排斥反應(yīng)Q3：4D5-單抗人源化改造為曲妥珠的過程中可能運(yùn)用哪些技術(shù)？蛋白質(zhì)工程Q4：還有更為優(yōu)化的單抗嗎？單克隆抗體鼠源-鼠源人源嵌合體-全人源化改造的歷程科技不斷進(jìn)步，人類認(rèn)識世界、改造世界的能力也在不斷進(jìn)步！【資料分析】臨床使用的曲妥珠單抗是一種在4D5-單抗基礎(chǔ)上改造的人源化單克隆抗體，是將小鼠中制備的抗體中識別抗原的小片段與人的抗體框架嫁接在一起形成的?！净顒印拷Y(jié)合單抗的特點(diǎn)，小組討論單抗在治療乳腺癌中有哪些可能的應(yīng)用。（1）作為特異性探針——研究HER2抗原蛋白的結(jié)構(gòu)、分布及功能（2）作為診斷試劑——診斷個體是否出現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞（3）制備生物導(dǎo)彈——治療疾病和運(yùn)載藥物【任務(wù)二】探究單抗在治療乳腺癌中的應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速原理：抗原抗體特異性結(jié)合特點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高

雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞融合

單克隆抗體骨髓瘤細(xì)胞+B淋巴細(xì)胞篩選1：篩選2：

產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞小鼠轉(zhuǎn)基因鼠人體外培養(yǎng)法小鼠腹水誘生法可經(jīng)蛋白質(zhì)工程改造特異性探針診斷試劑生物導(dǎo)彈第一次篩選：通過HAT選擇培養(yǎng)基獲得雜交瘤細(xì)胞第二次篩選：通過抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行抗體檢測獲得能產(chǎn)生所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞小結(jié)單克隆抗體也可以通過結(jié)合基因工程、蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造，提高親和力、穩(wěn)定性和生物學(xué)活性。課堂評價任務(wù)1．曲妥珠單抗是抗Her2的單克隆抗體，用于阻斷癌細(xì)胞的生長。如圖為制備單克隆抗體的過程?；卮鹨韵聠栴}：(1)給小鼠注射Her2蛋白進(jìn)行免疫，在35天獲取B淋巴細(xì)胞懸液進(jìn)行融合。在獲取B淋巴細(xì)胞前3天需再次注射Her2蛋白，這樣做的目的是

。(2)誘導(dǎo)融合獲得的細(xì)胞有未融合的親本細(xì)胞、融合的具有同種核的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞，原因是

。缺失HGPRT基因的細(xì)胞無法在HAT培養(yǎng)基中增殖，HAT培養(yǎng)基可以篩選出骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞，其它細(xì)胞都會死亡據(jù)此推測，在單克隆抗體制備過程中缺失HGPRT基因的細(xì)胞是

（“B淋巴細(xì)胞”或“骨髓瘤細(xì)胞”）。HAT培養(yǎng)基篩選得到的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是

。二次免疫使產(chǎn)生的抗Her2抗體的B淋巴細(xì)胞增多細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%骨髓瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生特異抗體課堂評價任務(wù)2．HER-2（一種跨膜糖蛋白）高表達(dá)通常只出現(xiàn)于胎兒期，正常人體組織中其表達(dá)量極低，在乳腺細(xì)胞中高表達(dá)可加速細(xì)胞分裂，使其增殖、分化過程失衡，最終轉(zhuǎn)變?yōu)槿橄侔??？贵w—藥物偶聯(lián)物T-DMI由曲妥珠單抗和藥物DMI連接而成，對HER-2有很強(qiáng)的靶向性。下列相關(guān)分析錯誤的是（）

A.胎兒期HER-2高表達(dá)可能與胚胎發(fā)育有關(guān)，成人HER-2含量高可為乳腺癌診斷提供參考

B.因?yàn)楂@取的B淋巴細(xì)胞可能有多種，所以經(jīng)選擇培養(yǎng)基篩選的雜交瘤細(xì)胞可直接培養(yǎng)制備單抗

C.T-DMI與HER-2特異性結(jié)合是DMI對癌細(xì)胞進(jìn)行選擇性殺傷的關(guān)鍵

D.利用同位素標(biāo)記的曲妥珠單抗在乳腺組織中成像的技術(shù)可定位診斷腫瘤的位置B動物細(xì)胞工程一輪復(fù)習(xí)（第二課時）——細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)

Q1：雜交瘤制備4D5單抗過程中最主要運(yùn)用了什么技術(shù)？Q2：技術(shù)基礎(chǔ)是什么？Q3：找一找，哪些環(huán)節(jié)運(yùn)用了細(xì)胞培養(yǎng)？【資料】能夠有效延緩人類表皮生長因子受體II（HER2）過度表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞生長的曲妥珠單抗的前身是運(yùn)用雜交瘤技術(shù)制備的鼠源性單抗4D5?！救蝿?wù)一】活動建模，梳理動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程和培養(yǎng)條件【活動1】以小組為單位，利用信封中的材料在卡紙上推測模擬已免疫小鼠脾細(xì)胞的培養(yǎng)過程，完成后分享交流。脾臟錐形瓶動物細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)皿二氧化碳培養(yǎng)箱分工：組長1人；記錄員1人；展示員1人；協(xié)助員1人；請全體成員參與討論完成模型后思考動物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)問題：Q1：為什么要將動物組織、器官分散成單個細(xì)胞？怎樣將動物細(xì)胞分散開？Q2：用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要成分是什么？Q3：原代培養(yǎng)之后為何要進(jìn)行傳代培養(yǎng)？Q4：二氧化碳培養(yǎng)箱的作用是？Q5：細(xì)胞培養(yǎng)過程中對環(huán)境有何要求？【任務(wù)一】活動建模，梳理動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程和培養(yǎng)條件【活動1】以小組為單位，利用信封中的材料在卡紙上推測模擬已免疫小鼠脾細(xì)胞的培養(yǎng)過程，完成后分享交流。Q1：動物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基中通常有哪些成分？其中血清的作用是？抗生素的作用是？Q2：血清如何滅菌？Q3：制備單抗的體外培養(yǎng)液中往往不添加動物血清的原因是什么？Q4：分別從物理性質(zhì)、化學(xué)成分和功能看，單抗制備中使用了哪些類型的培養(yǎng)基？【活動2】總結(jié)歸納雜交瘤技術(shù)中培養(yǎng)各細(xì)胞的培養(yǎng)基，獨(dú)立思考解決下面的問題。Q1：兩種培養(yǎng)獲得的結(jié)果有何不同？Q2：什么是細(xì)胞系？什么是細(xì)胞株？Q3：哪個培養(yǎng)屬于細(xì)胞克??？細(xì)胞克隆最基本的要求是什么？Q4：雜交瘤技術(shù)中如何保證最后建成的雜交瘤細(xì)胞株源自單個細(xì)胞的增殖？【比較1】比較抗體檢驗(yàn)前的雜交瘤細(xì)胞和檢驗(yàn)后的雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)檢驗(yàn)后雜交瘤細(xì)胞1

2

3

1

1

1

檢驗(yàn)前雜交瘤細(xì)胞多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有限稀釋法——克隆化培養(yǎng)抗原-抗體雜交法【任務(wù)二】比較分析，建構(gòu)細(xì)胞系、細(xì)胞株和細(xì)胞克隆等概念培養(yǎng)對象能否無限傳代生長特點(diǎn)培養(yǎng)結(jié)果克隆的難易B細(xì)胞

/骨髓瘤細(xì)胞單個雜交瘤細(xì)胞【比較2】比較B細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞和單個雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)【資料】升級后的曲妥珠單抗是一種重組DNA衍生的人源化單克隆抗體，是由懸養(yǎng)于無菌培養(yǎng)基中的中國倉鼠卵巢CHO細(xì)胞生產(chǎn)的。Q1：請推測升級后的曲妥珠單抗的生產(chǎn)運(yùn)用了哪些技術(shù)？Q2：據(jù)此可以看出動物細(xì)胞培養(yǎng)具有什么用途？動物細(xì)胞培養(yǎng)還存在的用途：基因工程技術(shù)和動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生理、病理、藥理研究組織器官修復(fù)等通過大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)獲得細(xì)胞代謝產(chǎn)物【任務(wù)三】遷移應(yīng)用，擴(kuò)大動物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用范圍

曲妥珠單抗的研制和生產(chǎn)確實(shí)在一定程度上治療和緩解人類的乳腺癌病癥，但是治療不是目的，防治才是根本。關(guān)愛生命，傳遞健康讓我們一起建立良好的生活方式：營養(yǎng)均衡，堅(jiān)持鍛煉，規(guī)律生活，心情舒暢！每年十月為“世界乳腺癌防治月”；10月18日為乳腺癌預(yù)防宣傳日；十月的第三個星期五為粉紅絲帶關(guān)愛日。讓我們?yōu)橐鸶嗳藢】档闹匾暫完P(guān)愛努力宣傳！課堂評價任務(wù)1．曲妥珠單抗是抗Her2的單克隆抗體，用于阻斷癌細(xì)胞的生長。如圖為制備單克隆抗體的過程?；卮鹨韵聠栴}：(3)在雜交瘤細(xì)胞篩選培養(yǎng)過程中，需在培養(yǎng)基中添加血清，并置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱中CO2的作用是

，篩選特定的雜交瘤細(xì)胞的過程利用的原理