ICS65.020.01

CCSB16

46

海南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB46/T712—2025

胡椒花葉病監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程

Technicalcodeofpracticeformonitoringofblackpeppermosaicdisease

2025-08-11發(fā)布2025-10-31實(shí)施

海南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB46/T712—2025

目次

前言................................................................................III

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義.........................................................................1

4器材和試劑.........................................................................1

器材...........................................................................1

試劑...........................................................................1

5監(jiān)測(cè)程序...........................................................................1

6監(jiān)測(cè)網(wǎng)點(diǎn)設(shè)置.......................................................................1

固定監(jiān)測(cè)點(diǎn).....................................................................1

隨機(jī)監(jiān)測(cè)點(diǎn).....................................................................2

7田間監(jiān)測(cè)...........................................................................2

固定監(jiān)測(cè)點(diǎn).....................................................................2

隨機(jī)監(jiān)測(cè)點(diǎn).....................................................................2

普查...........................................................................2

8病害診斷...........................................................................3

田間診斷.......................................................................3

室內(nèi)檢測(cè).......................................................................3

9病情統(tǒng)計(jì)...........................................................................3

病株率.........................................................................3

病情分級(jí).......................................................................4

病情指數(shù).......................................................................4

10監(jiān)測(cè)結(jié)果及使用....................................................................4

11樣品及檔案保存....................................................................4

附錄A（規(guī)范性）胡椒花葉病監(jiān)測(cè)程序流程...............................................5

附錄B（資料性）胡椒花葉病監(jiān)測(cè)調(diào)查統(tǒng)計(jì)表.............................................6

附錄C（規(guī)范性）胡椒花葉病田間典型癥狀...............................................9

參考文獻(xiàn).............................................................................11

圖A.1胡椒花葉病監(jiān)測(cè)程序流程圖.......................................................5

表1胡椒花葉病病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)...........................................................4

I

DB46/T712—2025

表B.1氣象數(shù)據(jù)登記表.................................................................6

表B.2胡椒花葉病病情監(jiān)測(cè)記錄表.......................................................7

表B.3胡椒花葉病病情調(diào)查匯總表.......................................................7

表B.4胡椒花葉病樣品鑒定表...........................................................8

表C.1胡椒花葉病田間典型癥狀.........................................................9

II

DB46/T712—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由海南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所、海南興科熱帶作物工程技術(shù)有限公司。

本文件主要起草人：茍亞峰、劉世超、高圣風(fēng)、孫世偉、楊建峰、田甜、初眾。

III

DB46/T712—2025

胡椒花葉病監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件確立了胡椒花葉?。╞lackpeppermosaicdisease）監(jiān)測(cè)程序，規(guī)定了胡椒花葉病監(jiān)測(cè)器

材和試劑、監(jiān)測(cè)網(wǎng)點(diǎn)設(shè)置、田間監(jiān)測(cè)、病害診斷、病情統(tǒng)計(jì)、監(jiān)測(cè)結(jié)果及使用等操作指示，描述了監(jiān)測(cè)

過(guò)程信息記錄、樣品及檔案保存等追溯方法。

本文件適用于胡椒花葉病的田間監(jiān)測(cè)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

SN/T4405黃瓜花葉病毒檢疫鑒定方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

胡椒花葉病blackpeppermosaicdisease

由黃瓜花葉病毒（cucumbermosaicvirus，CMV）侵染胡椒引起的一種病毒病。

4器材和試劑

器材

電子分析天平（感量：1/10000g）、研缽、離心管(5μL)、pH計(jì)、酶標(biāo)儀、PCR儀、電泳儀、電泳

槽、凝膠成像儀、高速冷凍離心機(jī)（10000r/min）、超低溫冰箱、照相機(jī)、樣品袋等。

試劑

具體按照SN/T4405中相關(guān)規(guī)定的試劑。

5監(jiān)測(cè)程序

胡椒花葉病監(jiān)測(cè)程序包括5個(gè)步驟，監(jiān)測(cè)程序流程按圖A.1給出的規(guī)定。

6監(jiān)測(cè)網(wǎng)點(diǎn)設(shè)置

固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)

1

DB46/T712—2025

在胡椒產(chǎn)區(qū)的縣（市、區(qū)）范圍內(nèi)，依據(jù)當(dāng)?shù)貧夂蛱卣?、區(qū)域種植模式以及胡椒花葉病的歷史發(fā)生

情況，選擇胡椒主產(chǎn)區(qū)作為固定監(jiān)測(cè)區(qū)。在每個(gè)固定監(jiān)測(cè)區(qū)內(nèi)，設(shè)置3個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，且每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的面積

為0.6hm2～1hm2。

隨機(jī)監(jiān)測(cè)點(diǎn)

在固定監(jiān)測(cè)區(qū)內(nèi)，對(duì)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)范圍之外的區(qū)域，每個(gè)季度隨機(jī)選擇1個(gè)地塊作為隨機(jī)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，其

面積為0.13hm2～0.2hm2。

7田間監(jiān)測(cè)

固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)

7.1.1監(jiān)測(cè)頻次

每年1月至3月期間，每半個(gè)月開展1次監(jiān)測(cè)工作；而在其他時(shí)間段，則每月進(jìn)行1次監(jiān)測(cè)。

7.1.2監(jiān)測(cè)內(nèi)容

胡椒長(zhǎng)勢(shì)、胡椒花葉病發(fā)生情況，同時(shí)收集氣象數(shù)據(jù)并填寫表B.1。

7.1.3監(jiān)測(cè)方法

7.1.3.1在每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)內(nèi)，運(yùn)用五點(diǎn)取樣法。具體操作為：先確定監(jiān)測(cè)點(diǎn)的對(duì)角線，再在該對(duì)角線上

選取與中心點(diǎn)等距離的胡椒植株，同時(shí)將中心點(diǎn)的植株一并確定為樣點(diǎn)。

7.1.3.2確定觀測(cè)胡椒植株，每個(gè)樣點(diǎn)選20株，共確定100株觀測(cè)植株，并逐株編號(hào)。

7.1.3.3對(duì)各編號(hào)的胡椒植株按照第8章的規(guī)定，調(diào)查各觀測(cè)植株是否發(fā)生胡椒花葉病。

7.1.3.4按照第9章的規(guī)定統(tǒng)計(jì)病株率和病情指數(shù)。

7.1.3.5調(diào)查期間進(jìn)行拍照，相關(guān)信息填入表B.2和表B.3。

隨機(jī)監(jiān)測(cè)點(diǎn)

7.2.1監(jiān)測(cè)頻次

全年監(jiān)測(cè)4次，每3個(gè)月監(jiān)測(cè)1次。

7.2.2監(jiān)測(cè)內(nèi)容

按7.1.2給出的規(guī)定。

7.2.3監(jiān)測(cè)方法

按7.1.3給出的方法。

普查

7.3.1普查頻次

每年4月至12月，將固定監(jiān)測(cè)區(qū)之外的胡椒種植區(qū)域劃定為普查區(qū)域，進(jìn)行1次全面調(diào)查。

7.3.2普查內(nèi)容

按7.1.2給出的規(guī)定。

2

DB46/T712—2025

7.3.3普查方法

按7.1.3給出的方法。

8病害診斷

田間診斷

對(duì)胡椒植株的葉片、花穗、果穗以及主蔓進(jìn)行調(diào)查，若出現(xiàn)表C.1所描述的任意一個(gè)為害部位的胡

椒花葉病田間典型癥狀，則可確診該植株為發(fā)病植株；反之，若未出現(xiàn)相應(yīng)癥狀，則判定為非發(fā)病植株。

對(duì)無(wú)法確診、有疑似癥狀的胡椒植株，采集葉片置于采樣袋中，進(jìn)行標(biāo)記及相關(guān)信息記錄，并帶回

實(shí)驗(yàn)室做進(jìn)一步檢測(cè)鑒定。

室內(nèi)檢測(cè)

8.2.1檢測(cè)方法選用

在檢測(cè)方法的選擇上，可采用以下方法中的一種或兩種：

a)RT-PCR檢測(cè)；

b)DAS-ELISA檢測(cè)。

8.2.2RT-PCR檢測(cè)

采用反轉(zhuǎn)錄-多聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（RT-PCR）檢測(cè)，具體按照SN/T4405的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

在陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)540bp特異性擴(kuò)增條帶，且陰性對(duì)照及空白對(duì)照均未出現(xiàn)該條帶的情況下，若待測(cè)

樣品在540bp處顯示出與陽(yáng)性對(duì)照相同的特異性條帶，則判定結(jié)果為陽(yáng)性，表明該樣品患有胡椒花葉病；

反之，若在滿足上述質(zhì)控條件的前提下，待測(cè)樣品未出現(xiàn)540bp特異性條帶，則判定結(jié)果為陰性，說(shuō)明

該樣品未患有胡椒花葉病。

8.2.3DAS-ELISA檢測(cè)

采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法（DAS-ELISA）檢測(cè)，具體按照SN/T4405的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

若樣品OD405值/陰性對(duì)照OD405值≥2，則判定結(jié)果為陽(yáng)性，表明該樣品患有胡椒花葉病；若樣品OD405

值/陰性對(duì)照OD405值≤1.5，則判定結(jié)果為陰性，說(shuō)明該樣品未患有胡椒花葉病；當(dāng)樣品OD405值/陰性對(duì)照

OD405值＞1.5且＜2的區(qū)間時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步確認(rèn)。

8.2.4檢測(cè)結(jié)果判定

若RT-PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，則可判定該樣品患有胡椒花葉病；當(dāng)DAS-ELISA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，但無(wú)

法據(jù)此判定時(shí)，應(yīng)采用RT-PCR方法進(jìn)行復(fù)檢；如果RT-PCR與DAS-ELISA的檢測(cè)結(jié)果均為陰性，則判定該

樣品未患有胡椒花葉病。

8.2.5檢測(cè)結(jié)果記錄

將檢測(cè)鑒定結(jié)果填入表B.4。

9病情統(tǒng)計(jì)

病株率

3

DB46/T712—2025

病株率用式（1）計(jì)算：

?=×100··········································································(1)

式中：

R——病株率，用百分率（%）表示，結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后一位；

T——發(fā)病株數(shù)；

S——樣點(diǎn)調(diào)查總株數(shù)。

病情分級(jí)

以病株率進(jìn)行病情分級(jí)，病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

表1胡椒花葉病病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

病情分級(jí)病株率

0級(jí)無(wú)病害癥狀

1級(jí)病株率＜5%

3級(jí)5%≤病株率＜15%

5級(jí)15%≤病株率＜35%

7級(jí)35%≤病株率＜75%

9級(jí)病株率≥75%

病情指數(shù)

病情指數(shù)用式（2）計(jì)算：

∑（