2025版食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽測(cè)定培訓(xùn)法法法法第三法連續(xù)流動(dòng)分析第三法連續(xù)流動(dòng)分析-分光光度法附錄內(nèi)容簡(jiǎn)介方法選擇與注意事項(xiàng)附錄內(nèi)容簡(jiǎn)介標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)與編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)全稱(chēng)為《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為GB5009.33—2025。發(fā)布與實(shí)施日期該標(biāo)準(zhǔn)于2025年9月2日發(fā)布，2026年3月2日正式實(shí)施。發(fā)布單位由中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局聯(lián)合發(fā)布。標(biāo)準(zhǔn)重要性與適用領(lǐng)域作為食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定了食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定方法，適用于多種食品類(lèi)型，為保障食品安全提供了重要依據(jù)。第一法、第二法的樣品前處理方法均有修改，優(yōu)化了樣品提取和凈化過(guò)程，提升檢測(cè)準(zhǔn)確性。新增檢測(cè)方法第一法、第二法的樣品前處理方法均有修改，優(yōu)化了樣品提取和凈化過(guò)程，提升檢測(cè)準(zhǔn)確性。增加連續(xù)流動(dòng)分析-分光光度法作為第三法，將原第三法調(diào)整為第四法，豐富了檢測(cè)手段。檢出限和定量限更新修改了方法的檢出限和定量限，提高了方法的靈敏度和檢測(cè)精度，滿(mǎn)足更嚴(yán)格的檢測(cè)需求。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與還原效率計(jì)算調(diào)整檢出限和定量限更新修改了方法的檢出限和定量限，提高了方法的靈敏度和檢測(cè)精度，滿(mǎn)足更嚴(yán)格的檢測(cè)需求。第二法修改了標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法和還原效率的計(jì)算方法，使實(shí)驗(yàn)操本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定方法，涵蓋不同類(lèi)型食品的檢測(cè)需求，各方法根據(jù)食品特性和檢測(cè)目標(biāo)設(shè)置適用范圍。標(biāo)準(zhǔn)包含四種測(cè)定方法，其中第二法和第三法適用于各類(lèi)食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定，第一法和第四法則針對(duì)特定食品類(lèi)別設(shè)置限制條件。第一法（離子色譜法）適用對(duì)象適用于除乳蛋白部分水解配方、乳蛋白深度水解配方、氨基酸配方及氨基酸代謝障礙配方的特殊醫(yī)學(xué)用途配方食第二法（分光光度法）與第三法（連續(xù)流動(dòng)分析-分光光度法）適二者均適用于所有食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定，無(wú)特殊類(lèi)別限制，具有廣泛適用性。專(zhuān)門(mén)適用于新鮮蔬菜、水果中硝酸鹽的測(cè)定，針對(duì)此類(lèi)樣品基質(zhì)特點(diǎn)優(yōu)化檢測(cè)流程。離子色譜法測(cè)定原理試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，提取凈化，以氫氧化鉀或氫氧化鈉溶液為淋洗液，經(jīng)陰離子交換柱分離，電導(dǎo)或紫外檢測(cè)器檢測(cè)，通過(guò)保留時(shí)間定性，試劑純度與水要求除非另有說(shuō)明，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水；關(guān)鍵試劑如乙酸需色譜純。主要試劑種類(lèi)包括乙酸、氫氧化鉀、氫氧化鈉、α-淀粉酶（酶活力≥1.5U/mg）等；需配制乙酸溶液（3%）、氫氧化鉀溶液（1mol/L）、氫氧化鈉溶液（1mol/L）標(biāo)準(zhǔn)品信息亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)：7632-00-0，純度≥99%）、硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)：7631-99-4，純度≥99%或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。離子色譜儀（配電導(dǎo)檢測(cè)器及抑制器或紫外檢測(cè)器）、食物粉碎機(jī)、超聲波清洗器、電子天平（感量0.1mg和0.01g）、離心機(jī)（轉(zhuǎn)速≥10000r/min）。液體/半固體樣品攪拌混勻，固體粉狀樣品振搖混勻，干酪研磨成泥漿狀；易腐試樣（水果、蔬菜等）-18℃及以下保存，其他樣品按產(chǎn)品貯存條件保存。乳及乳制品等：稱(chēng)樣后加水超聲30min，加3%乙酸沉淀蛋白，定容后離心；高淀粉樣品：加α-淀粉酶55℃酶解30min后同上述操作；其他樣品：加水超聲提取30min，75℃水浴5min后處取備用溶液經(jīng)0.22μm濾膜、C18柱凈化（氯離子高時(shí)加Ag柱和Na柱）；色譜柱用氫氧化物選擇性陰離子交換柱，淋洗液濃度6-70mmol/L，流速1.0mL/min，進(jìn)樣體積50μL，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并測(cè)定試樣。），），），），<1.00mg/kg時(shí)保留2位有效數(shù)在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。液體樣品（稱(chēng)樣量10液體樣品（稱(chēng)樣量10g時(shí)）0.05mg/kg，其他樣品（稱(chēng)樣量5液體樣品（稱(chēng)樣量10液體樣品（稱(chēng)樣量10g時(shí)）0.1mg/kg，其他樣品（稱(chēng)樣量5g時(shí)）0.2mg/kg。液體樣品（稱(chēng)樣量10液體樣品（稱(chēng)樣量10g時(shí)）0.1mg/kg，其他樣品（稱(chēng)樣量5g時(shí)）0.2mg/kg。液體樣品（稱(chēng)樣量10液體樣品（稱(chēng)樣量10g時(shí)）0.2mg/kg，其他樣品（稱(chēng)樣量5g時(shí)）0.4mg/kg。分光光度法測(cè)定原理化合物，于538nm處測(cè)吸光度定量亞硝氨緩沖溶液（pH9.6-9.7）：量取30mL鹽酸，加500mL水，混勻后加65mL氨水調(diào)pH，稀釋至1000mL，避光保存；氨緩沖溶液稀釋液：取50mL氨緩沖溶液加水稀釋至500mL，）：加熱溶解后棕色瓶2-6℃避光保存，有）：亞鐵氰化鉀溶液（106g/L）：106g三水亞鐵氰化鉀加水溶解并稀釋至1000mL；乙酸鋅溶液（220g/L）：220g二水乙酸鋅加30mL冰乙酸和500mL水溶解，冷卻后稀釋至1000mL。電子天平（感量0.1mg和0.01g）、組織搗碎機(jī)/研磨儀、超聲波清洗器、恒溫干燥箱（控溫±2℃)、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)、鎘柱裝置（含鎘?；蜃灾奇k粒，需測(cè)定還原效率）。稱(chēng)取試樣（液體45-90g，固體1-10g加硼酸鈉溶液和70℃水，沸水浴加熱吸取40mL濾液于50mL比色管，加2mL對(duì)氨基苯磺酸溶液，靜置3-5min，加1mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水定容，靜置15min；以0mg/L亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)零，1cm比色皿于538nm處測(cè)吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)定量。鎘柱還原：25mL氨緩沖溶液稀釋液沖洗鎘柱（流速3-5mL/min），取20mL濾液加10mL氨緩沖溶液，流經(jīng)鎘柱還原，用水沖洗并定容至100mL；亞硝酸鹽總量測(cè)定：吸取10-20mL還原液按亞硝酸鹽測(cè)定步驟操作，總量減去亞硝酸鹽含量得硝酸鹽含量。（m1×V1/V?)。其中ρ1為測(cè)定用樣液中亞硝酸鹽質(zhì)量濃度（mg/L），V），），液體積（mL），V?為試樣處理液總）；3位有效數(shù)字1.00mg/kg保留2位。硝酸鹽含量計(jì)算硝酸鹽含量計(jì)算），）；結(jié)果保留位數(shù)同亞硝酸鹽。在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。亞硝酸鹽檢出限：液體樣品（稱(chēng)樣90g）0.02mg/kg，其他樣品（稱(chēng)樣5g）0.3mg/kg；定量限：液體0.06mg/kg，其他1mg/kg。硝酸鹽檢出限：液體0.2mg/kg，其他3mg/kg；定量限：液體0.6mg/kg，其他10mg/kg。二胺偶合形成紫紅色化合物，于硝酸鹽經(jīng)鎘還原成亞硝酸鹽后測(cè)得總量，差值計(jì)算硝酸鹽含量。包括三水亞鐵氰化鉀、二水乙酸鋅、硼酸鈉、磺胺、鹽酸萘乙二胺等，除另有規(guī)定外均為分析純；水為GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。亞硝酸鈉（CAS：7632-00-0）、硝連續(xù)流動(dòng)分析儀含化學(xué)反應(yīng)單元、保進(jìn)樣器初始化正常、蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)動(dòng)平熱、沉淀蛋白質(zhì)（亞鐵氰化鉀-乙酸開(kāi)機(jī)后用三級(jí)水、氯化銨緩沖溶液沖洗流路；標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制采用0-酸鹽系列標(biāo)準(zhǔn)液，試樣測(cè)定時(shí)每10檢驗(yàn)（硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液回收率應(yīng)亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計(jì)）：X1=(ρ1-ρ0））：重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)亞硝酸鹽：液體樣品0.02mg/kg（稱(chēng)樣90g每批次樣品檢測(cè)后需驗(yàn)證硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液還原效率，若含量降低10%以上需更換鎘柱/鎘圈；不同儀器按說(shuō)明書(shū)紫外分光光度法測(cè)定原理紫外分光光度法測(cè)定原理利用硝酸根離子在紫外區(qū)219nm處的特征吸收，經(jīng)氨緩沖液提取、沉淀劑去除干擾后，測(cè)定吸光度。因新鮮蔬果中亞硝酸鹽含量極低可忽略，結(jié)果直接反映硝酸鹽含量。氨緩沖液配制氨緩沖液配制量取20mL鹽酸溶于500mL水，加50mL氨水調(diào)pH至9.6-9.7，定容至1000mL。用于提取樣品中硝酸根離子并維持堿性環(huán)境。沉淀劑與材料要求沉淀劑與材料要求150g/L亞鐵氰化鉀溶液、300g/L硫酸鋅溶液用于沉淀蛋白質(zhì)；粉狀活性炭用于脫色；水為GB/T6682一級(jí)水，試劑均為紫外分光光度計(jì)（配1cm石英比色皿）、電子天平（感量0.1mg和0.01g）、組織搗碎機(jī)、可調(diào)式往返振蕩機(jī)（200次/min）、pH計(jì)（精度樣品洗凈晾干后勻漿（少汁樣品可加水），稱(chēng)取10g勻漿加100mL水、5mL氨緩沖液、2g活性炭，振蕩30min。加2mL亞鐵氰化鉀和2mL硫酸鋅溶液，定容至250mL，過(guò)濾取吸取2-10mL濾液定容至50mL，于219nm處測(cè)吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線用0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0、12.0mg/L硝酸鈉溶液繪制，以濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)。硝酸鹽含量計(jì)算公式X=(硝酸鹽含量計(jì)算公式X=(ρ×V1×V3×1000）/（m×V2V1為提取液定容體積（250mL），V2），），精密度要求重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的精密度要求重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%，確保檢測(cè)數(shù)檢出限與定量限檢出限與定量限4.0mg/kg，適用于新鮮蔬菜、水果中硝酸鹽的快速檢測(cè)，滿(mǎn)足日常質(zhì)量控制需求。附錄A提供亞硝酸鹽和硝酸鹽混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖，包括紫外檢測(cè)器（圖A.1）和電導(dǎo)檢測(cè)器（圖A.2）兩種檢測(cè)模式下的分離效果，用于定性分析時(shí)保留時(shí)通過(guò)鋅片與硫酸鎘溶液（40g/L）反應(yīng)生成海綿狀鎘，經(jīng)鹽酸溶液（0.1mol/L）攪拌控制粒徑（0.3mm~0.8mm），靜置3h~4h去除氣泡，制得基礎(chǔ)鎘粒。鎘粒經(jīng)鹽酸溶液（2mol/L）活化后，加入硫酸銅溶液（20g/L，每克鎘粒約需2.5mL）振蕩1min，水洗至無(wú)銅沉淀，形成均勻銅鍍層以增強(qiáng)還原效率。玻璃管內(nèi)依次裝入2cm高玻璃棉（排盡空氣）、8cm~10cm或15cm~20cm海綿狀鎘粒、1cm高玻璃棉覆蓋，通過(guò)敲擊避免氣泡，裝置分帶貯液漏斗（圖B.1b）和常規(guī)型取20.0mL硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.00mg/L），經(jīng)鎘柱還原后定容至100mL，取10.0mL按分光光度法測(cè)亞硝酸鹽濃度，還原效率需大于95%，計(jì)算公式見(jiàn)式（C.1）。若還原率＜95%，將鎘粒用鹽酸溶液（2mol/L）振蕩處理，水洗后重新裝填鎘柱，確保硝酸鹽還原步驟的準(zhǔn)確項(xiàng)殊醫(yī)學(xué)用途）僅適用第一法；新鮮蔬菜、水果中硝酸鹽測(cè)定適用第四法；其他食品可選第二法或連續(xù)流動(dòng)分析-分光光度法（第三法）自動(dòng)化程度高，適用于批量樣品快速檢測(cè)；分光光度法（第二法）操作簡(jiǎn)便，適合實(shí)驗(yàn)室常（亞硝酸鹽0.05mg/kg，硝酸鹽）