檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)流感病毒樣本安全管理PPT服

人2025年12月16日流感病毒樣本安全管理概述樣本運(yùn)輸與接收管理樣本采集規(guī)范與質(zhì)量控制樣本處理與檢測(cè)安全操作CONTENTS目

錄02040103樣本保存與毒株管理質(zhì)量控制與應(yīng)急管理生物安全防護(hù)體系建設(shè)CONTENTS目錄05070601流感病毒樣本安全管理概述保障檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的基石樣本管理的規(guī)范操作直接影響流感病毒檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確

性，如規(guī)范的采集、保存和運(yùn)輸能有效避免因樣本質(zhì)量問(wèn)題導(dǎo)致的假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果，確保實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)可靠。流行病學(xué)監(jiān)測(cè)與防控決策的關(guān)鍵支撐規(guī)范管理的流感病毒樣本及其相關(guān)信息，是開(kāi)展病毒變

異監(jiān)測(cè)、流行趨勢(shì)分析和疫苗研發(fā)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)來(lái)源，為

制定科學(xué)有效的流感防控策略和臨床治療方案提供關(guān)鍵

依

據(jù)

。防止病毒擴(kuò)散與生物安全的核心環(huán)節(jié)流感病毒具有傳染性，樣本管理不當(dāng)可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室感

染或病毒泄露。嚴(yán)格的樣本管理流程，包括生物安全防

護(hù)、滅活處理和規(guī)范運(yùn)輸，是防止病毒擴(kuò)散、保障實(shí)驗(yàn)

室及公共衛(wèi)生安全的核心。國(guó)家及地方標(biāo)準(zhǔn)的明確要求流感病毒樣本管理需嚴(yán)格遵循國(guó)家及地方相關(guān)法規(guī)與標(biāo)

準(zhǔn)，如《江西省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB36/T2025—2024流感網(wǎng)

絡(luò)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范》及國(guó)家流感中心標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程等，

確保各項(xiàng)操作有章可循、合規(guī)合法。流感病毒樣本管理的重要性與法規(guī)依據(jù)02040103相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范體系框架國(guó)家層面核心標(biāo)準(zhǔn)行業(yè)技術(shù)操作指南

地方實(shí)施細(xì)則補(bǔ)充

生物安全專項(xiàng)規(guī)范針對(duì)流感病毒操作的

生物安全，明確診斷

性實(shí)驗(yàn)在BSL-2實(shí)驗(yàn)室、病毒分離培養(yǎng)在

BSL-3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，個(gè)人防護(hù)需達(dá)到相應(yīng)

級(jí)別，并遵循世界衛(wèi)

生組織《實(shí)驗(yàn)室生物

安全手冊(cè)(第三版)》

推薦方案。國(guó)家流感中心發(fā)布《標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(修訂版)》,涵蓋標(biāo)本

采集、病毒分離(如

MDCK細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚

接種)、核酸檢測(cè)(RT-PCR

、Real-time

PCR)

等關(guān)鍵技

術(shù)的詳細(xì)步驟與質(zhì)量

控制標(biāo)準(zhǔn)。以江西省《流感網(wǎng)絡(luò)

實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范(DB36/T

2025—2024)》為例，細(xì)化

了網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室工作職

責(zé)、樣本管理流程(采集、處理、運(yùn)輸)

及毒株保存、銷毀記

錄等區(qū)域性管理要求。依據(jù)《中華人民共和

國(guó)傳染病防治法》及

《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

(GB1989-2004)》,明確流感

病毒檢測(cè)的生物安全

底線，規(guī)定了實(shí)驗(yàn)室

分級(jí)、個(gè)人防護(hù)及操

作規(guī)范等基礎(chǔ)要求。風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)核心差異BSL-2主要針對(duì)樣本的初步檢測(cè)和診

斷

，BSL-3則針對(duì)病毒的分離培養(yǎng)等

高風(fēng)險(xiǎn)操作，兩者在設(shè)施要求、防護(hù)

級(jí)別和操作規(guī)范上有顯著區(qū)別。BSL-2實(shí)驗(yàn)室適用范圍適用于流感疑似病例臨床標(biāo)本的診斷

性實(shí)驗(yàn)工作，所有樣本操作均應(yīng)在生

物安全柜內(nèi)進(jìn)行，并遵循生物安全三級(jí)個(gè)人防護(hù)。BSL-3實(shí)驗(yàn)室適用范圍用于流感病毒分離培養(yǎng)工作，需在BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并嚴(yán)格遵循生

物安全三級(jí)個(gè)人防護(hù)要求，以應(yīng)對(duì)更高的感染風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)室生物安全風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)劃分02樣本采集規(guī)范與質(zhì)量控制重點(diǎn)采樣對(duì)象主要針對(duì)甲型H1N1流感疑似病例，

包括發(fā)熱、咳嗽、喉嚨痛等癥狀

者；密切接觸者也應(yīng)采樣以排除

傳播風(fēng)險(xiǎn)。采樣頻率建議對(duì)于持續(xù)發(fā)熱或癥狀加重者，建

議每3-5天采集一次樣本，連續(xù)

采集3-5次，以便觀察病毒載量

變化和治療效果。最佳采樣時(shí)機(jī)疑似病例出現(xiàn)癥狀后48小時(shí)內(nèi)采集，以獲取最佳病毒載量；重癥

患者盡可能在發(fā)病初期采集樣本。采樣時(shí)機(jī)與對(duì)象選擇要求鼻咽拭子采集規(guī)范使用合成纖維拭子(如聚酯纖維),避免棉拭子

和木柄。將拭子輕輕插入鼻腔深處至鼻甲(離鼻

孔約2.0cm～2.5cm),

貼鼻腔壁旋轉(zhuǎn)3次后取出，

立即置于含3ml病毒保存液的采樣管中。采集前注意事項(xiàng)采樣前30分鐘內(nèi)避免進(jìn)食、飲水、漱口。告知患

者采樣流程，指導(dǎo)配合發(fā)“噢”聲(咽拭子)或

保持頭部穩(wěn)定(鼻咽拭子),減少操作不適感。咽拭子采集規(guī)范用無(wú)菌拭子擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，避免觸及舌部，旋轉(zhuǎn)3-5次后將拭子頭部浸入病毒保存液。

確保采集到足夠分泌物，采樣過(guò)程嚴(yán)格無(wú)菌操作

防污染。采集后處理要求采樣后立即旋緊采樣管蓋子，檢查密封性。標(biāo)簽

注明患者信息、采樣日期、樣本類型，置于冰袋

或4℃冰箱保存，24小時(shí)內(nèi)送檢；如需延遲檢測(cè)，應(yīng)-70℃冷凍保存。鼻咽拭子與咽拭子采集操作指南采樣時(shí)機(jī)選擇應(yīng)在疑似病例出現(xiàn)癥狀后的48小時(shí)內(nèi)

采集樣本，以獲取最佳病毒載量。發(fā)

病時(shí)間超過(guò)48小時(shí)可能導(dǎo)致病毒數(shù)量

減少，影響檢測(cè)靈敏度。采樣前準(zhǔn)備與患者配合采樣前30分鐘內(nèi)患者應(yīng)避免進(jìn)食、飲

水。對(duì)于咽喉分泌物采集，應(yīng)指導(dǎo)患

者發(fā)“噢”聲以暴露咽后壁；痰液采

集需確保為深部咳出的第一

口痰液，

避免混雜唾液。采樣部位與方法規(guī)范鼻咽拭子采集應(yīng)深入鼻咽部，旋轉(zhuǎn)一

周后取出；咽拭子需擦拭雙側(cè)咽扁桃

體及咽后壁，避免觸及舌部。采集過(guò)

程需輕柔且有一定力度，確保樣本充

分接觸病毒。質(zhì)量控制與人員培訓(xùn)定期對(duì)采樣人員進(jìn)行操作培訓(xùn)與考核，

確保無(wú)菌操作規(guī)范，避免交叉污染。每批次采樣需包含陽(yáng)性和陰性對(duì)照，

驗(yàn)證采樣過(guò)程及試劑有效性。采樣器具與保存液選擇推薦使用頭部為合成纖維(如聚酯纖

維)的拭子，不使用棉拭子和木柄拭

子。采集后樣本應(yīng)立即置于含病毒保

存液的采樣管內(nèi)，以減少病毒降解。樣本采集質(zhì)量影響因素及控制措施個(gè)人防護(hù)裝備

(PPE)選擇與穿戴需使用一次性連體防護(hù)服，覆蓋全身皮膚，檢查完整性避免破損；佩戴N95及以上

級(jí)別口罩并進(jìn)行密合性測(cè)試；護(hù)目鏡完全覆蓋眼部，防止飛濺物接觸；穿戴內(nèi)層醫(yī)

用乳膠手套、外層加厚丁腈手套，袖口壓入外層手套內(nèi)：配備防水高至膝蓋的鞋套，

與防護(hù)服褲腳密封銜接。采樣操作環(huán)境與行為規(guī)范采樣應(yīng)在生物安全柜內(nèi)或通風(fēng)良好區(qū)域進(jìn)行，嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免樣本間交叉污染。

操作中禁止觸摸面部、口鼻，采樣后立即對(duì)操作臺(tái)和使用過(guò)的器具進(jìn)行消毒。采樣

完畢，按規(guī)定流程脫卸PPE,避免污染自身及環(huán)境。樣本采集后即時(shí)處理與污染控制采集后立即將樣本置于含病毒保存液的無(wú)菌采樣管中，旋緊蓋子確保無(wú)泄漏。使用

過(guò)的采樣拭子等廢棄物放入專用醫(yī)療廢物袋，按感染性廢物處理。采樣區(qū)域用含氯

消毒劑(有效氯濃度1000mg/L)

擦拭臺(tái)面，作用時(shí)間不少于30分鐘，必要時(shí)進(jìn)行紫

外線照射消毒。采樣過(guò)程生物安全防護(hù)要點(diǎn)03樣本運(yùn)輸與接收管理UN2814包裝運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施要求生物安全與合規(guī)性疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標(biāo)本列為A

類，需嚴(yán)格遵循UN2814包裝運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)。運(yùn)輸過(guò)

程需符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l

例》,確保全程可追溯。標(biāo)識(shí)與文件要求塑料管上用油性記號(hào)筆注明病毒名稱、樣本編

號(hào)、患者信息及采樣日期。需單獨(dú)填寫(xiě)“流感

/人禽流感毒株送檢單”,置于防水袋中，與

標(biāo)本分開(kāi)放置。溫度控制與運(yùn)輸時(shí)效新鮮臨床標(biāo)本在4℃條件下24小時(shí)內(nèi)運(yùn)送至網(wǎng)

絡(luò)實(shí)驗(yàn)室；未能及時(shí)運(yùn)送的標(biāo)本需置-70℃或

以下保存。凍存標(biāo)本需在低溫條件下運(yùn)輸，避

免反復(fù)凍融。包裝材料與結(jié)構(gòu)規(guī)范病毒標(biāo)本須使用帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的耐低溫

塑料管，確保無(wú)泄漏。推薦使用螺口細(xì)胞保存

管，外層需包裹吸水和緩沖材料，放入專用運(yùn)

輸箱或疫苗冷藏包。溫度監(jiān)控設(shè)備要求運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)使用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的溫度記錄儀，確保數(shù)據(jù)實(shí)時(shí)

采集與存儲(chǔ)，溫度波動(dòng)需控制在允許范圍內(nèi)(2-8℃運(yùn)輸時(shí)

波動(dòng)不超過(guò)±1℃,-70℃運(yùn)輸時(shí)波動(dòng)不超過(guò)±5℃),設(shè)備

電池續(xù)航能力需覆蓋整個(gè)運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)。異常溫度處理流程若運(yùn)輸過(guò)程中出現(xiàn)溫度異常(如超出2-8℃或-70℃規(guī)定范

圍),應(yīng)立即停止運(yùn)輸并評(píng)估樣本質(zhì)量，對(duì)不可挽回的樣

本需按生物安全規(guī)定銷毀并記錄原因，同時(shí)啟動(dòng)應(yīng)急預(yù)案，

重新采集或調(diào)配樣本以保障檢測(cè)工作的連續(xù)性。溫度監(jiān)控范圍與標(biāo)準(zhǔn)流感病毒樣本運(yùn)輸需全程監(jiān)控溫度，短期運(yùn)輸(≤24小時(shí))

保持2-8℃,超過(guò)24小時(shí)或需長(zhǎng)期運(yùn)輸?shù)臉颖緫?yīng)維持-70℃

及以下低溫，避免樣本在運(yùn)輸過(guò)程中因溫度不當(dāng)導(dǎo)致病毒

活性喪失或核酸降解。溫度記錄與追溯管理運(yùn)輸全程需完整記錄溫度數(shù)據(jù)，包括起始溫度、運(yùn)輸途中

每隔1小時(shí)的溫度讀數(shù)及到達(dá)終點(diǎn)時(shí)的溫度，記錄需由專人

審核并簽字確認(rèn)，保存期限不少于2年，確保樣本運(yùn)輸?shù)目?/p>

追溯性與合規(guī)性。運(yùn)輸溫度監(jiān)控與記錄規(guī)范患者身份信息嚴(yán)格匹配嚴(yán)格核對(duì)樣本標(biāo)簽與申請(qǐng)單上的患者姓名、性別、年齡、唯一標(biāo)識(shí)碼等關(guān)

鍵信息，確保數(shù)據(jù)一致性，避免樣本

混淆或誤檢。標(biāo)準(zhǔn)化信息錄入與登記使用實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)

(LIMS)詳

細(xì)記錄樣本接收時(shí)間、送檢科室、檢

測(cè)項(xiàng)目、樣本狀態(tài)及操作人員信息，

確保全程可追溯。樣本完整性與質(zhì)量評(píng)估檢查樣本容器密封性、標(biāo)簽清晰度及

樣本量是否達(dá)標(biāo)，如咽拭子是否濕潤(rùn)、

血清有無(wú)溶血或脂血等異常情況。檢測(cè)項(xiàng)目與申請(qǐng)單確認(rèn)核查申請(qǐng)單所列檢測(cè)項(xiàng)目是否符合流

感檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，包括核酸、抗原或抗體

檢測(cè)類型，防止漏檢或重復(fù)檢測(cè)。樣本接收核查與信息登記流程不合格樣本判定標(biāo)準(zhǔn)樣本容器密封性破損、標(biāo)簽信息模糊或缺失、患者身

份信息不匹配、樣本量不足(如咽拭子未濕潤(rùn))、血清樣本嚴(yán)重溶血或脂血等情況，均判定為不合格樣本。樣本追溯信息記錄建立完善的樣本追溯系統(tǒng)，記錄樣本從采集、運(yùn)輸、接收、處理到最終處置的全流程信息，包括采集人、

采集時(shí)間、運(yùn)輸條件、接收人、不合格原因及處理方

式等，確保每一份樣本的流向可查、責(zé)任可追。不合格樣本反饋與改進(jìn)定期匯總分析不合格樣本的類型及原因，形成報(bào)告反

饋給相關(guān)科室和采集人員，針對(duì)性開(kāi)展培訓(xùn)，優(yōu)化采

樣操作規(guī)范和運(yùn)輸條件，持續(xù)降低樣本不合格率，提

升檢測(cè)前質(zhì)量控制水平。不合格樣本處理流程對(duì)于不合格樣本，應(yīng)立即標(biāo)注“不合格”狀態(tài)，詳細(xì)

記錄不合格原因，并及時(shí)通知送檢部門(mén)或采集人員。樣本需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行規(guī)范處置，如高壓滅菌后按醫(yī)療廢物處理，嚴(yán)禁隨意丟棄。不合格樣本處理與追溯機(jī)制04樣本處理與檢測(cè)安全操作日常維護(hù)與定期驗(yàn)證每日記錄安全柜運(yùn)行參數(shù)，包括

溫度、濕度、壓差。每周清潔HEPA過(guò)濾器進(jìn)風(fēng)口和出風(fēng)口格柵。

定期(至少每年一次)由專業(yè)機(jī)

構(gòu)進(jìn)行生物安全柜性能驗(yàn)證，包括氣流速度測(cè)試、氣流模式可視

化檢測(cè)、高效過(guò)濾器完整性測(cè)試

及噪聲和照度檢測(cè)，確保符合BSL-2或更高等級(jí)實(shí)驗(yàn)室要求。樣本操作核心規(guī)程樣本處理需在安全柜內(nèi)進(jìn)行，避免手臂頻繁進(jìn)出影響氣流。操作

時(shí)物品擺放有序，感染性材料置

于工作區(qū)中央，利器使用后立即

放入專用防刺破容器。操作結(jié)束

后，用75%乙醇或含氯消毒劑(有效氯濃度1000mg/L)

擦拭柜

內(nèi)表面及物品，作用時(shí)間不少于

30分鐘。操作前準(zhǔn)備與檢查操作前需確認(rèn)生物安全柜運(yùn)行正

常，包括風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)、氣流指示、

HEPA過(guò)濾器狀態(tài)。檢查柜內(nèi)清潔無(wú)雜物，工作臺(tái)面鋪設(shè)一次性防

水墊。操作人員應(yīng)穿戴好個(gè)人防

護(hù)裝備，如N95口罩、護(hù)目鏡、防護(hù)服及雙層手套。生物安全柜操作規(guī)范與驗(yàn)證滅活效果驗(yàn)證要求抽取5%已滅活樣本進(jìn)行陰性/陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)，

驗(yàn)證滅活處理對(duì)病毒感染性的破壞效果及

對(duì)后續(xù)核酸檢測(cè)試劑穩(wěn)定性的影響，確保滅活合格。滅活處理基本原則樣本滅活需確保病毒失去感染性，同時(shí)保

留核酸完整性以供后續(xù)檢測(cè)。操作需在生

物安全柜內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)程，

防止交叉污染。滅活后樣本處理與記錄滅活后的樣本按檢測(cè)需求分裝至無(wú)菌EP管，

標(biāo)注樣本信息、滅活日期及操作人員。完整記錄滅活方法、溫度、時(shí)間等關(guān)鍵參數(shù)，

存檔備查。常用滅活方法及操作采用56℃水浴處理樣本30分鐘，或使用專

用滅活劑進(jìn)行化學(xué)滅活。滅活過(guò)程中需監(jiān)

控溫度和時(shí)間參數(shù)，確保滅活效果。滅活

后樣本需進(jìn)行渦旋震蕩混勻并離心去除雜

質(zhì)。樣本滅活處理技術(shù)規(guī)程耗材與試劑管理規(guī)范使用一次性無(wú)菌無(wú)核酸酶耗材，試劑分

裝為小份避免反復(fù)使用。陽(yáng)性對(duì)照與樣

本提取嚴(yán)格分開(kāi)操作，防止擴(kuò)增產(chǎn)物污

染試劑。污染監(jiān)測(cè)與應(yīng)急處理定期進(jìn)行環(huán)境表面核酸檢測(cè)(如臺(tái)面、

地面、設(shè)備),設(shè)置陰性對(duì)照監(jiān)控污染

情況。發(fā)現(xiàn)污染立即停用相關(guān)區(qū)域，用

10%次氯酸鈉或?qū)Ｓ煤怂崆宄齽┨幚?，?yàn)證合格后方可恢復(fù)使用。實(shí)驗(yàn)分區(qū)與空間隔離嚴(yán)格劃分試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、核

酸擴(kuò)增區(qū)，各區(qū)專用設(shè)備與耗材，避免

交叉污染。樣本處理需在生物安全柜內(nèi)

操作，確保氣流方向正確。環(huán)境與人員防護(hù)措施每日實(shí)驗(yàn)前后對(duì)生物安全柜進(jìn)行紫外線

消毒≥30分鐘，定期監(jiān)測(cè)HEPA過(guò)濾器效

率。操作人員穿戴一次性防護(hù)服、手套、

N95口罩，每操作1批次樣本更換手套。操作流程標(biāo)準(zhǔn)化控制實(shí)驗(yàn)前用75%乙醇或1000mg/L含氯消毒

劑擦拭臺(tái)面與設(shè)備，操作時(shí)遵循“單一

方向流程”(從試劑準(zhǔn)備到產(chǎn)物分析)。

加樣槍使用帶濾芯吸頭，避免氣溶膠產(chǎn)

生

。核酸提取過(guò)程污染防控措施試劑與耗材質(zhì)量管控嚴(yán)格核查試劑批號(hào)、有效期及儲(chǔ)存條件，確保符合試劑盒說(shuō)明書(shū)要求。采用磁性

納米顆?；蚬枘z膜離心柱法等高效核酸提取技術(shù)，避免使用過(guò)期或性能不穩(wěn)定試

劑

。擴(kuò)增程序參數(shù)優(yōu)化與驗(yàn)證設(shè)置合理的預(yù)變性(如95℃持續(xù)30秒)、循環(huán)擴(kuò)增(如95℃變性5秒，60℃退火/

延伸30秒，共40個(gè)循環(huán))等參數(shù)。熒光信號(hào)采集應(yīng)選擇對(duì)應(yīng)通道，確保擴(kuò)增效率

符合要求，定期驗(yàn)證儀器性能。擴(kuò)增曲線與Ct值判讀標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線需呈現(xiàn)典型

“S”

形，基線平穩(wěn)，指數(shù)增長(zhǎng)期斜率及平臺(tái)期熒光值符合

標(biāo)準(zhǔn)。閾值線設(shè)置在指數(shù)增長(zhǎng)期中后段，陽(yáng)性結(jié)果判定需Ct

值≤預(yù)設(shè)截?cái)嘀?如

Ct≤38),灰區(qū)樣本(如38<Ct≤40)需復(fù)檢并結(jié)合臨床綜合判斷。反應(yīng)體系配制標(biāo)準(zhǔn)化操作按照試劑盒說(shuō)明精確配制反應(yīng)混合液，包括逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、dNTPs、熒

光

探針及特異性引物。配制過(guò)程需在無(wú)核酸污染區(qū)域進(jìn)行，嚴(yán)格避免交叉污染，分

裝后立即置于-20℃避光保存。質(zhì)控樣本設(shè)置與結(jié)果監(jiān)控每批次檢測(cè)需包含陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和內(nèi)參基因。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)接近檢測(cè)下限以

驗(yàn)證靈敏度，陰性對(duì)照監(jiān)控污染風(fēng)險(xiǎn)，內(nèi)參基因確保核酸提取和擴(kuò)增過(guò)程有效性，

Ct

值差異應(yīng)≤1.5。PCR檢測(cè)體系質(zhì)量控制要求040301020505樣本保存與毒株管理樣本分級(jí)保存溫度與時(shí)效控制短期保存(2-8℃)規(guī)范中期保存(-70℃及以下)要求

特殊樣本備份與存儲(chǔ)策略重要臨床樣本或科研樣本需雙重備份，

分別存儲(chǔ)于不同設(shè)備，質(zhì)控樣本等關(guān)

鍵材料建議在-80℃低溫環(huán)境中保存，

并定期檢查樣本活性變化及存儲(chǔ)設(shè)備

運(yùn)行狀態(tài)。適用于采集后24-48小時(shí)內(nèi)可完成檢

測(cè)的樣本，如鼻咽拭子、咽拭子樣本

在此條件下保存通常不超過(guò)48小時(shí)，

病毒核酸易降解，需避免光照和劇烈

溫度波動(dòng)。用于需延遲檢測(cè)或長(zhǎng)期保存的樣本，

如病毒分離陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)在-70℃保存6

個(gè)月以備復(fù)核，長(zhǎng)期存儲(chǔ)需分裝后置

于-70℃超低溫冰箱，避免反復(fù)凍融。雞胚分離技術(shù)要求選用9-11日齡SPF雞胚，尿囊腔和羊膜

腔接種標(biāo)本，33-35℃孵育48-72小時(shí)，

每日觀察胚體活力，收獲尿囊液和羊膜液進(jìn)行后續(xù)鑒定。RT-PCR核酸分型確認(rèn)針對(duì)流感病毒NP、HA、NA等基因設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增并測(cè)序，

可精確區(qū)分病毒類型和亞型，是鑒定

的關(guān)鍵確認(rèn)步驟。培養(yǎng)需在BSL-2及以上實(shí)驗(yàn)室生物安全

柜內(nèi)進(jìn)行，使用含胎牛血清的D-MEM生

長(zhǎng)液，嚴(yán)格控制消化時(shí)間與細(xì)胞密度，

確保單層細(xì)胞形成。使用特異性抗血清進(jìn)行抑制試驗(yàn)，根

據(jù)抑制效價(jià)判定病毒型別及亞型，操

作中需設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照，確保結(jié)

果準(zhǔn)確性。毒株分離與鑒定操作規(guī)范可采用雞胚和/或MDCK細(xì)胞進(jìn)行流感病

毒分離。具備相應(yīng)條件的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室在收到標(biāo)本后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行病毒接種。制備1%雞紅細(xì)胞懸液，與病毒分離物

混合后觀察凝集現(xiàn)象，陽(yáng)性結(jié)果提示

病毒存在，為后續(xù)鑒定提供初步依據(jù)。紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)初篩

紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)分型鑒定病毒分離培養(yǎng)方法選擇MDCK細(xì)胞分離操作要點(diǎn)毒株保存記錄規(guī)范所有陽(yáng)性流感病毒株保存需填寫(xiě)“流感毒株保存記錄表”,

詳細(xì)記錄病毒名稱、代數(shù)、保存日期、保存位置及操作人

員信息。液體毒株與干燥毒株應(yīng)分別記錄，確?？勺匪菪?。毒株銷毀審批與執(zhí)行記錄毒株銷毀需填寫(xiě)“流感陽(yáng)性樣本及毒株銷毀記錄表”,注

明銷毀毒株名稱、數(shù)量、銷毀方法(如高溫滅活、化學(xué)消

毒等)、銷毀日期及審批人、執(zhí)行人信息。銷毀過(guò)程需符

合生物安全規(guī)定，確保徹底滅活無(wú)殘留。毒株使用與流轉(zhuǎn)記錄毒株的領(lǐng)用、使用需進(jìn)行書(shū)面登記，記錄使用目的、使用

量、剩余量及歸還/處理情況。用于科研目的的毒株，需

經(jīng)相關(guān)人員書(shū)面簽字同意后方可提供，嚴(yán)禁私自帶出實(shí)驗(yàn)室或向其他單位/國(guó)家提供。記錄存儲(chǔ)與管理要求所有毒株保存、使用、銷毀記錄應(yīng)長(zhǎng)期妥善保存，電子記

錄需定期備份，紙質(zhì)記錄應(yīng)歸檔存放。記錄保存期限應(yīng)符

合生物安全與質(zhì)量管理規(guī)范，便于監(jiān)管部門(mén)核查與追溯。毒株保存與銷毀記錄管理質(zhì)控樣本制備規(guī)范從臨床樣本中分離病毒，經(jīng)純化和濃度測(cè)定確?；钚苑€(wěn)

定。制備全程采用無(wú)菌技術(shù)，

避免交叉污染，并通過(guò)多次

檢測(cè)確認(rèn)病毒載量與活性。質(zhì)控樣本使用操作使用時(shí)需嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室操

作，包括樣本解凍、稀釋和

檢測(cè)步驟。每次使用前后記

錄樣本狀態(tài)，確保檢測(cè)結(jié)果

的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。質(zhì)控樣本存儲(chǔ)要求通常需在-80℃低溫環(huán)境保存，避免反復(fù)凍融。存儲(chǔ)容

器選用耐低溫、密封性良好

的材料，并定期檢查樣本活

性變化。質(zhì)控樣本質(zhì)量評(píng)估實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對(duì)質(zhì)控樣本進(jìn)

行活性和濃度復(fù)測(cè)，結(jié)合檢

測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性

進(jìn)行綜合評(píng)估，確保其持續(xù)

符合標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)控樣本制備與使用標(biāo)準(zhǔn)06生物安全防護(hù)體系建設(shè)生物安全柜

配置要求實(shí)驗(yàn)室需配備Ⅱ級(jí)或以上生物安全柜，

用于樣本處理、核酸提取等操作，確

保操作過(guò)程中產(chǎn)生的氣溶膠得到有效

containaent,防止實(shí)驗(yàn)人員暴露和環(huán)

境污染。實(shí)驗(yàn)室分級(jí)

與適用范圍流感病毒診斷性實(shí)驗(yàn)工作應(yīng)在BSL-2實(shí)

驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，所有樣本操作均應(yīng)在生

物安全柜(HSC)

內(nèi)進(jìn)行，并遵循生物

安全三級(jí)個(gè)人防護(hù)。病毒分離培養(yǎng)工作需在BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。消毒與廢棄

物處理設(shè)施配備專用的高壓滅菌器，用于污染廢

棄物和實(shí)驗(yàn)器材的滅菌處理，設(shè)置防滲漏、耐消毒的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和地面，便

于實(shí)驗(yàn)后清沽消毒，降低交叉污染風(fēng)

險(xiǎn)

。壓力控制與

監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)維持相對(duì)室外的負(fù)壓狀態(tài)，

壓力梯度需符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，并有實(shí)時(shí)

壓力監(jiān)測(cè)和報(bào)警裝置，確保負(fù)壓狀態(tài)

穩(wěn)定，防止氣溶膠擴(kuò)散。通風(fēng)與空氣

凈化系統(tǒng)應(yīng)配備負(fù)壓環(huán)境及HEPA過(guò)濾系統(tǒng)，每小時(shí)換氣次數(shù)≥12次，確保實(shí)驗(yàn)室空

氣定向流動(dòng)，防止污染空氣外泄，保

障實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外環(huán)境安全。BSL-2實(shí)驗(yàn)室設(shè)施要求核心裝備穿戴流程穿戴順序：先戴N95口罩并進(jìn)行密合性測(cè)試，再穿連體防護(hù)服，確保

袖口與手套邊緣緊密銜

接，最后佩戴護(hù)目鏡或

面屏，檢查無(wú)皮膚暴露。脫卸操作生物安全要求脫卸需在指定區(qū)域進(jìn)行，

遵循“由外至內(nèi)、層層

消毒”原則，每脫卸一

步均需使用75%乙醇消毒手部，防護(hù)服和手套

按感染性廢物規(guī)范處理。裝備完整性檢查要點(diǎn)穿戴前核查防護(hù)服有無(wú)

破損、手套密封性、口

罩無(wú)變形；使用中實(shí)時(shí)

監(jiān)控裝備狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)污

染或破損立即按流程更

換，避免氣溶膠滲透風(fēng)

險(xiǎn)。防護(hù)裝備分級(jí)選擇標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)流感病毒操作風(fēng)險(xiǎn)

等級(jí)選擇裝備：常規(guī)檢

測(cè)操作需N95口罩、護(hù)

目鏡、防護(hù)服及雙層手

套；高風(fēng)險(xiǎn)操作(如病

毒培養(yǎng))需額外配備正

壓面罩或生物安全柜。個(gè)人防護(hù)裝備選擇與穿戴規(guī)范工作臺(tái)面消毒規(guī)范空氣凈化與通風(fēng)管理設(shè)備表面消毒要求實(shí)驗(yàn)前后需用含氯消毒劑(有效氯實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用高效空氣過(guò)濾器離心機(jī)、移液器等高頻接觸設(shè)備需濃度1000mg/L)擦拭臺(tái)面，作用時(shí)(HEPA)循環(huán)凈化，每小時(shí)換氣次用75%乙醇擦拭消毒，金屬部件改間不少于30分鐘，重點(diǎn)處理樣本接數(shù)≥12次。操作結(jié)束后可使用氣溶用異丙醇以避免腐蝕。生物安全柜觸區(qū)域。操作結(jié)束后可輔助紫外線膠噴霧器噴灑過(guò)氧化氫消毒劑，密內(nèi)壁需在每次實(shí)驗(yàn)后執(zhí)行消毒，使照射消毒，時(shí)長(zhǎng)不低于1小時(shí)。閉空間2小時(shí)后通風(fēng)，確?？諝赓|(zhì)

量符合生物安全要求。用專用消毒劑浸泡的無(wú)紡布清潔。環(huán)境監(jiān)測(cè)頻率與指標(biāo)實(shí)時(shí)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度、二氧

化碳濃度及潔凈度，定期對(duì)空氣、

物體表面進(jìn)行微生物采樣檢測(cè)。每

月至少進(jìn)行一次全面環(huán)境監(jiān)測(cè)，記

錄數(shù)據(jù)并形成報(bào)告，確保消毒效果

持續(xù)有效。實(shí)驗(yàn)室消毒與環(huán)境監(jiān)測(cè)程序07質(zhì)量控制與應(yīng)急管理質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)記錄與趨勢(shì)分析詳細(xì)記錄質(zhì)控樣本的Ct

值、OD值、擴(kuò)增曲

線形態(tài)等參數(shù)，定期繪制Levey-Jennings質(zhì)控圖。分析數(shù)據(jù)趨勢(shì)偏移或失控原因，如發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性對(duì)照Ct值異?；蜿幮詫?duì)照出現(xiàn)

擴(kuò)增，需立即排查試劑、設(shè)備及操作環(huán)節(jié)。異常結(jié)果處理與報(bào)告機(jī)制對(duì)異常結(jié)果(如陰性對(duì)照陽(yáng)性、陽(yáng)性對(duì)照

陰性或樣本Ct

值處于灰區(qū))立即復(fù)檢，排

除操作失誤或交叉污染。確認(rèn)系統(tǒng)性問(wèn)題

后，暫停檢測(cè)并上報(bào)質(zhì)量控制部門(mén)，完整

記錄異常現(xiàn)象、處理步驟、最終結(jié)論及預(yù)

防措施。內(nèi)部質(zhì)控樣本設(shè)置與管理設(shè)置弱陽(yáng)性、中陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性等不同濃度

水平的內(nèi)部質(zhì)控樣本，覆蓋檢測(cè)方法線性

范圍，確保各濃度病毒均能被準(zhǔn)確識(shí)別。

每批次檢測(cè)必須同步運(yùn)行內(nèi)部質(zhì)控樣本，

抽取5%預(yù)處理樣本進(jìn)行陰陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)，

驗(yàn)證預(yù)處理效果及試劑穩(wěn)定性。外部質(zhì)量評(píng)價(jià)參與規(guī)范積極參與通過(guò)國(guó)際或國(guó)家認(rèn)證的外部質(zhì)評(píng)

計(jì)劃，如CAP

、CLIA等。