第十三章

基因工程藥物的生物檢定第一節(jié)概述第二節(jié)

胰島素的生物檢定第三節(jié)

重組人生長激素的生物檢定第四節(jié)

重組人干擾素的生物檢定目錄第十三章基因工程藥物的生物檢定學習目標掌握

胰島素、生長激素及干擾素的生物活性檢定方法

熟悉

基因工程藥物的檢定項目及生物活性檢定的原理了解

基因工程藥物的特點及作用第十三章基因工程藥物的生物檢定概述第一節(jié)第十三章基因工程藥物的生物檢定第一節(jié)概述（1）概念在體外將基因剪切組合，獲得目的基因，

導入受體細胞（哺乳動物、酵母、大腸埃希菌或昆蟲的細胞）中進行增殖、表達，

制成的用于預防、治療或診斷疾病的生物制品，稱為基因工程藥物。

1.

基因工程藥物的概念與分類（2）分類

基因工程藥物包括重組蛋白多肽類藥物和核酸類藥物①重組蛋白多肽類藥物

干擾素、胰島素、生長激素等。

②核酸類藥物

反義核酸藥物（如福米韋生）、非反義的寡核苷酸等。

1.

基因工程藥物的概念與分類第一節(jié)概述（1）

生產(chǎn)效率高，解決了生物原料短缺的問題（2）靶向治療，藥物毒性?。?）質量評價更復雜安全性檢查

生物活性檢查

全過程質量監(jiān)控

2.

基因工程藥物的特點第一節(jié)概述3.

基因工程藥物的檢定項目（1）

理化檢定

外觀檢查、pH檢查、水分含量測定、蛋白質含量測定、等電點、分子量測定等。（2）安全檢定

無菌檢查、細菌內毒素檢查、異常毒性試驗、熱原檢查

等。（3）效力檢定

效價測定或酶活力測定（適用于酶類、重組蛋白質類等藥物）。第一節(jié)概述胰島素的生物檢定

第二節(jié)第十三章基因工程藥物的生物檢定1.

胰島素及其作用（1）

胰島素由胰臟內的胰島B細胞受內源性或外源性物質如葡萄糖等的刺激而分泌的一種蛋白質激素。

（2）

胰島素的作用

①促進細胞對葡萄糖的利用，促進糖原合成，使血糖降低；②

抑制脂肪的分解，促進脂仿的合成；③

促進蛋白質的合成，有利于生長。

第二節(jié)胰島素的生物檢定體內血糖控制2.

胰島素生物效價的檢定方法—小鼠血糖法（1）檢定原理利用胰島素的降糖作用，通過對小鼠血糖的降糖作用來計算胰島素供試品的效價。（2）檢定方法

①將小鼠按體重隨機分成4組，各組小鼠分別自皮下注入一種濃度的標準品或供試品稀釋液。注射后40分鐘，測各血樣的血糖值。

第二節(jié)胰島素的生物檢定2.

胰島素生物效價的檢定方法—小鼠血糖法

②第一次給藥后，按雙交叉設計，對每組的各鼠進行第二次給藥，給藥后40分鐘的血糖值。

雙交叉實驗設計表

第二節(jié)胰島素的生物檢定第一組第二組第三組第四組第一次試驗標準高標準低供試高供試低第二次試驗供試低供試高標準低標準高（2）檢定方法2.

胰島素生物效價的檢定方法—小鼠血糖法

③結果處理照《中國藥典》（2015年版）生物檢定統(tǒng)計法中量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差?？刹捎肂S2000生物統(tǒng)計分析系統(tǒng)計算結果。

第二節(jié)胰島素的生物檢定（2）檢定方法BS2000生物統(tǒng)計分析系統(tǒng)界面重組人生長激素的生物檢定

第三節(jié)第十三章基因工程藥物的生物檢定1.重組人生長激素及其作用（1）生長激素

是由腺垂體細胞分泌的一種蛋白類激素，

人生長激素是由191個氨基酸組成的單鏈多肽。

（2）

生理作用

可促進骨、肌肉和蛋白質的合成，從而加速骨骼和肌肉的生長發(fā)育，臨床主要用于侏儒癥、

成人生長激素缺乏癥等。

第三節(jié)重組人生長激素的生物檢定2.

重組人生長激素生物效價的檢定方法

（1）去垂體大鼠體重法

通過比較生長激素標準品與供試品對幼齡去垂體大鼠體重增加的程度，以測定供試品的效價

。

（2）去垂體大鼠脛骨法

通過比較生長激素標準品與供試品對去垂體大鼠脛骨骨骺板寬度增加的程度，以測定供試品的效價。

第三節(jié)重組人生長激素的生物檢定2.

重組人生長激素生物效價的檢定方法

（1）去垂體大鼠體重法

取大鼠，摘除垂體，按體重分成4組。分別自頸部皮下注射一種濃度的標準品溶液或供試品溶液，每日1次，連續(xù)6日。

處死大鼠，稱體重

，以每只動物給藥后體重增加的克數(shù)作為反應值，照生物檢定統(tǒng)計法中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。

第三節(jié)重組人生長激素的生物檢定2.

重組人生長激素生物效價的檢定方法

（2）去垂體大鼠脛骨法

本法可與去垂體大鼠體重法同步進行。待體重法實驗結束后，取下兩腿脛骨，從脛骨近心端頂部中間沿矢狀面切開，染色

、水洗，置水中強光照射至棕黑色，固定，測量時沿創(chuàng)面切薄片，測量脛骨骨骺板寬度，以此為反應值，照生物檢定統(tǒng)計法中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。

第三節(jié)重組人生長激素的生物檢定重組人干擾素的生物檢定

第四節(jié)第十三章基因工程藥物的生物檢定1.重組人干擾素及其作用

干擾素是機體被病毒感染后由機體產(chǎn)生的一種蛋白質。具有抑制細胞分裂、調節(jié)免疫、抗病毒、抗腫瘤等多種作用。干擾素是目前最主要的抗病毒感染和抗腫瘤的生物制品。

第四節(jié)重組人干擾素的生物檢定2.重組人干擾素生物效價的檢定方法重組人干擾素生物效價的檢定方法為細胞病變抑制法（1）

基本原理：干擾素可抑制水皰性口炎病毒對人羊膜細胞的破壞，

根據(jù)存活WISH細胞的數(shù)量來判斷干擾素的抗病毒活性。

第四節(jié)重組人干擾素的生物檢定2.重組人干擾素生物效價的檢定方法

（2）操作方法：①

將WISH細胞懸液，加入96孔細胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)。②將標準品及樣品在另一96孔細胞培養(yǎng)板中作4倍梯度稀釋，然后將梯度稀釋液轉移至①項中細胞培養(yǎng)板的相應位置。

第四節(jié)重組人干擾素的生物檢定96孔細胞培養(yǎng)板2.重組人干擾素生物效價的檢定方法

③取已加樣的細胞培養(yǎng)板，加入病毒液培養(yǎng)

、染色

、脫色、比色

記錄測定結果，采用計算機程序或直線回歸計算法進行處理，計算供試品生物學活性。

第四節(jié)重組人干擾素的生物檢定小結

1.胰島素效價檢定方法為小鼠血糖法，它是利用胰島素的降糖作用，通過對小鼠血糖的降糖作用來計算胰島素供試品的效價。2.重組人生長激素效價的檢定方法有：

去垂體大鼠體重法和去垂體大鼠脛骨

法，

它們是利用生長激素的促生長作用

，通過測量去垂體大鼠體重及脛骨骨骺板寬度