微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量管理方案一、概述

微生物檢驗(yàn)是檢測樣品中微生物含量和種類的重要技術(shù)手段，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、環(huán)境、生物制品等領(lǐng)域。為確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和一致性，建立完善的質(zhì)量管理方案至關(guān)重要。本方案旨在規(guī)范微生物檢驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，從樣品采集到結(jié)果報(bào)告，全面提升檢驗(yàn)質(zhì)量。

二、質(zhì)量管理體系的建立

（一）組織結(jié)構(gòu)與職責(zé)

1.成立微生物檢驗(yàn)質(zhì)量管理小組，負(fù)責(zé)制定、實(shí)施和監(jiān)督檢驗(yàn)流程。

2.明確各崗位職責(zé)：

(1)負(fù)責(zé)人：統(tǒng)籌檢驗(yàn)工作，審核關(guān)鍵決策。

(2)技術(shù)骨干：執(zhí)行檢驗(yàn)操作，解決技術(shù)問題。

(3)記錄員：整理檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，確保文檔完整。

（二）制度文件管理

1.制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），涵蓋樣品采集、處理、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)、鑒定等全過程。

2.定期更新制度文件，確保與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)同步。

三、樣品采集與處理

（一）樣品采集要求

1.選擇代表性樣品，避免污染。

2.樣品數(shù)量應(yīng)符合檢驗(yàn)需求，一般不少于100g或10mL。

3.采集工具需清潔、無菌，使用后立即滅菌處理。

（二）樣品處理流程

1.樣品接收：檢查樣品標(biāo)簽、包裝、溫度等是否符合要求。

2.前處理：

(1)固體樣品：勻漿或研磨，確保均勻分散。

(2)液體樣品：充分混勻，取適量進(jìn)行檢測。

3.滅菌處理：必要時(shí)對樣品進(jìn)行高壓蒸汽滅菌（121℃，15分鐘）。

四、檢驗(yàn)操作規(guī)范

（一）微生物培養(yǎng)

1.培養(yǎng)基準(zhǔn)備：按SOP配制，檢查pH值、無菌性等指標(biāo)。

2.接種操作：

(1)使用無菌移液器或接種環(huán)。

(2)避免培養(yǎng)基表面接觸，防止污染。

3.培養(yǎng)條件：

(1)溫度：常用37℃恒溫培養(yǎng)。

(2)時(shí)間：需氧菌培養(yǎng)48小時(shí)，厭氧菌培養(yǎng)72小時(shí)。

（二）微生物計(jì)數(shù)

1.平板計(jì)數(shù)法：

(1)采用傾注法或涂布法。

(2)選擇菌落數(shù)在30-300CFU的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2.顯微鏡計(jì)數(shù)法：

(1)使用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。

(2)計(jì)算單位體積或重量的微生物數(shù)量。

（三）微生物鑒定

1.形態(tài)學(xué)觀察：通過顯微鏡觀察菌落形狀、顏色、大小等特征。

2.生化試驗(yàn)：

(1)選擇典型生化反應(yīng)進(jìn)行檢測，如氧化酶試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)等。

(2)參照鑒定手冊或數(shù)據(jù)庫進(jìn)行結(jié)果比對。

五、質(zhì)量控制措施

（一）內(nèi)部質(zhì)量控制

1.每天進(jìn)行空白對照試驗(yàn)，確保培養(yǎng)基無菌性。

2.定期使用質(zhì)控菌株（如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌），驗(yàn)證檢驗(yàn)方法準(zhǔn)確性。

3.記錄質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，繪制趨勢圖，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)調(diào)整。

（二）外部質(zhì)量控制

1.參加能力驗(yàn)證計(jì)劃，與其他實(shí)驗(yàn)室比對結(jié)果。

2.定期購買商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，驗(yàn)證檢驗(yàn)系統(tǒng)性能。

六、結(jié)果報(bào)告與追溯

（一）報(bào)告規(guī)范

1.報(bào)告內(nèi)容：樣品信息、檢驗(yàn)項(xiàng)目、結(jié)果、結(jié)論、檢驗(yàn)人及日期。

2.結(jié)果審核：由技術(shù)負(fù)責(zé)人復(fù)核，確保無邏輯錯(cuò)誤。

（二）數(shù)據(jù)追溯

1.建立電子或紙質(zhì)記錄系統(tǒng)，保存原始數(shù)據(jù)、計(jì)算過程、審核記錄。

2.追溯流程：出現(xiàn)爭議時(shí)，可調(diào)取相關(guān)記錄核查檢驗(yàn)過程。

七、持續(xù)改進(jìn)

（一）定期評審

1.每季度召開質(zhì)量評審會(huì)議，總結(jié)檢驗(yàn)問題。

2.修訂SOP，優(yōu)化檢驗(yàn)流程。

（二）人員培訓(xùn)

1.每半年進(jìn)行操作培訓(xùn)，考核合格后方可上崗。

2.學(xué)習(xí)新技術(shù)、新方法，提升檢驗(yàn)水平。

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**三、樣品采集與處理（擴(kuò)寫）**

**（一）樣品采集要求（擴(kuò)寫）**

1.**選擇代表性樣品：**

*樣品必須能夠真實(shí)反映被檢對象的整體狀況。采集時(shí)需避免選取表層、邊緣或異常部分，應(yīng)從不同部位、不同層次進(jìn)行多點(diǎn)、多量采樣。

*對于散裝物料（如粉末、顆粒），可采用五點(diǎn)取樣法或棋盤式取樣法；對于包裝好的產(chǎn)品，應(yīng)隨機(jī)抽取一定比例（例如，至少3-5包）的樣品。

*樣品量需滿足后續(xù)檢驗(yàn)和必要的富集、稀釋要求。通常，固體樣品建議采集不少于100克或10毫升，液體樣品建議采集不少于100毫升。對于特定項(xiàng)目或低濃度檢測，樣品量可能需要更大。

2.**樣品包裝與標(biāo)識(shí)：**

*樣品應(yīng)使用清潔、干燥、無吸附性、無穿透性的無菌容器或包裝袋。容器材質(zhì)需與樣品不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)（如金屬容器避免接觸強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性樣品）。

*樣品容器在采樣前必須經(jīng)過嚴(yán)格清潔和滅菌處理。常用滅菌方法包括高壓蒸汽滅菌（121℃，15-20分鐘）、干熱滅菌（160℃，2小時(shí)）或環(huán)氧乙烷滅菌。滅菌后的容器需在無菌環(huán)境中開啟使用。

*樣品標(biāo)識(shí)應(yīng)清晰、牢固、耐久，包含樣品編號(hào)、采集日期、采集時(shí)間、樣品來源/名稱、采集人等信息。優(yōu)先使用條形碼或二維碼進(jìn)行標(biāo)識(shí)，以減少手動(dòng)記錄錯(cuò)誤。標(biāo)識(shí)應(yīng)置于樣品容器外部，避免與樣品接觸。

3.**采樣環(huán)境控制：**

*采樣應(yīng)在清潔、低塵、無氣流干擾的環(huán)境中進(jìn)行，最好在生物安全柜或超凈工作臺(tái)內(nèi)操作，以最大限度減少環(huán)境微生物的污染。

*采樣人員需穿戴潔凈工作服、手套，并盡量減少在采樣區(qū)域的活動(dòng)，避免引入外來微生物。

*采樣工具（如取樣勺、取樣針、鑷子等）必須是無菌的，使用后應(yīng)進(jìn)行滅菌處理。

4.**樣品運(yùn)輸與保存：**

*樣品運(yùn)輸過程中應(yīng)保持包裝完整，防止破損、泄漏或二次污染。需冷藏的樣品（如冷藏食品、無菌液體）應(yīng)使用保溫箱并配備冰袋或冷藏包，確保在運(yùn)輸過程中溫度保持在2℃-8℃。

*樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)盡快進(jìn)行檢驗(yàn)。對于無法立即檢驗(yàn)的樣品，應(yīng)根據(jù)其性質(zhì)和目標(biāo)微生物類型，在規(guī)定條件下（如冷藏、冷凍、厭氧環(huán)境）進(jìn)行短期或長期保存。不同類型樣品的推薦保存時(shí)間和條件可在SOP中詳細(xì)規(guī)定（例如，某些食品樣品在4℃可保存24-48小時(shí)）。

**（二）樣品處理流程（擴(kuò)寫）**

1.**樣品接收與核對：**

*接收樣品時(shí)，首先核對樣品標(biāo)識(shí)信息是否與送檢單一致，確認(rèn)樣品外觀狀態(tài)（如包裝是否完好、有無異味、顏色是否異常等）。

*檢查樣品溫度是否在可接受范圍內(nèi)，并記錄。

*如有送檢單，需與樣品一起存放，確保檢驗(yàn)過程可追溯。

2.**表面消毒（如適用）：**

*對于植物、土壤或動(dòng)物組織等表面可能攜帶大量雜菌的樣品，在無菌操作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行表面消毒處理是必要的。

*常用消毒劑包括70%-75%乙醇溶液、0.1%氯化鈉溶液、0.01%-0.1%無菌鹽水等。需根據(jù)樣品材質(zhì)和目標(biāo)微生物選擇合適的消毒劑和消毒時(shí)間（通常為30秒-5分鐘）。

*消毒后需進(jìn)行適當(dāng)?shù)牟料椿虼蹈?，以去除殘留消毒劑，避免影響后續(xù)培養(yǎng)。消毒效果需定期驗(yàn)證。

3.**樣品前處理（根據(jù)樣品類型選擇）：**

***（1）固體樣品處理：**

***勻漿/研磨：**對于塊狀、顆粒狀或組織樣品，需將其充分破碎、勻漿，以增加微生物與培養(yǎng)基的接觸面積。可使用無菌均質(zhì)器、組織搗碎機(jī)或研缽進(jìn)行操作。操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行。

***稀釋：**勻漿后的樣品需進(jìn)行系列稀釋，以獲得適宜計(jì)數(shù)的菌懸液。常用方法包括：

*稱取適量（如10克或1mL）樣品加入無菌生理鹽水或緩沖液中，充分混勻。

*用無菌移液器吸取一定量的稀釋液，加入更大體積的無菌稀釋液中，進(jìn)行10倍系列稀釋。

*記錄每個(gè)稀釋步驟的倍數(shù)。

***選擇性增菌（如適用）：**對于某些特定項(xiàng)目（如致病菌檢測），可能需要在稀釋液中加入選擇培養(yǎng)基，在特定條件下（如溫度、氣體環(huán)境）進(jìn)行培養(yǎng)，以促進(jìn)目標(biāo)微生物生長并抑制雜菌。

***（2）液體樣品處理：**

***混勻：**充分搖勻液體樣品，確保內(nèi)部成分均勻。

***直接接種或系列稀釋：**根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠肺廴境潭龋芍苯咏臃N部分樣品，或進(jìn)行系列稀釋后接種。稀釋方法同固體樣品。

***離心（如適用）：**對于含大量不溶性雜質(zhì)的液體樣品，可先進(jìn)行離心（如4000-8000rpm，5-10分鐘），取上清液進(jìn)行檢驗(yàn)，以去除干擾物質(zhì)。

***（3）半固體/粘稠樣品處理：**

*可先加入無菌液體（如生理鹽水）進(jìn)行稀釋或溶解。

*對于粘稠樣品，可先加入少量無菌分散劑（如吐溫-80溶液）助溶。

4.**接種與制備檢驗(yàn)樣品：**

*根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目和方法，將處理后的樣品接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基中。接種方法需嚴(yán)格無菌操作，常用方法包括：

***傾注法：**將適量菌懸液加入無菌平皿中，倒入已冷卻至45℃左右的無菌培養(yǎng)基（如MRS、MAC平板），輕輕晃動(dòng)平皿使培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底，靜置凝固。

***涂布法：**將菌懸液用無菌吸管吸取少量，滴加到無菌平皿中的無菌水或培養(yǎng)基表面，用無菌涂布棒均勻涂布?？蛇M(jìn)行平板涂布或瓊脂表面涂布。

***劃線法：**用于分離純培養(yǎng)。將菌懸液用接種環(huán)在瓊脂平板上進(jìn)行分區(qū)劃線，每次劃線后滅菌接種環(huán)，以獲得單菌落。

***傾注法（用于菌落計(jì)數(shù)）：**將一定體積的稀釋液加入無菌平皿中，再倒入熔化并冷卻至45℃左右的無菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（如RBCA、PCA平板），輕輕晃動(dòng)，靜置凝固。

*所有接種操作必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，確保無菌環(huán)境。

5.**樣品處理記錄：**

*詳細(xì)記錄樣品處理過程中的所有操作步驟、所用試劑、體積、溫度、時(shí)間、操作人等信息。記錄應(yīng)清晰、準(zhǔn)確、及時(shí)，便于后續(xù)追溯和審核。

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**四、檢驗(yàn)操作規(guī)范（擴(kuò)寫）**

**（一）微生物培養(yǎng)（擴(kuò)寫）**

1.**培養(yǎng)基準(zhǔn)備與滅菌：**

***培養(yǎng)基配制：**嚴(yán)格按照SOP或國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的配方稱量試劑，使用去離子水或蒸餾水溶解。確保稱量準(zhǔn)確，溶解完全。調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定范圍，使用pH計(jì)校準(zhǔn)。

***分裝：**將配制好的培養(yǎng)基分裝到合適的容器中（如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿），分裝量應(yīng)考慮滅菌后體積收縮和微生物生長空間。

***滅菌：**常用高壓蒸汽滅菌法。需根據(jù)培養(yǎng)基類型和容器選擇合適的滅菌條件：

*液體培養(yǎng)基：通常采用高壓蒸汽滅菌，如115℃或121℃，15-20分鐘。

*固體培養(yǎng)基（平板）：通常采用高壓蒸汽滅菌，如115℃或121℃，15-20分鐘。注意滅菌后培養(yǎng)基溫度會(huì)升高，需冷卻至適宜接種溫度（通常45℃-50℃）。

*固體培養(yǎng)基（斜面、肉湯）：通常采用高壓蒸汽滅菌，如115℃或121℃，15-20分鐘。

***滅菌后處理：**

***平板：**滅菌后需在超凈工作臺(tái)或生物安全柜內(nèi)冷卻至45℃-50℃，期間避免長時(shí)間放置或接觸空氣導(dǎo)致水分蒸發(fā)。冷卻過程需輕柔翻動(dòng)，確保培養(yǎng)基均勻。

***試管/三角瓶：**滅菌后待其冷卻至室溫或所需溫度再進(jìn)行后續(xù)操作。

***滅菌效果確認(rèn)：**定期進(jìn)行滅菌效果驗(yàn)證，常用方法包括：

***物理驗(yàn)證：**使用溫度計(jì)監(jiān)測滅菌過程中不同位置的溫度和壓力變化，確保達(dá)到滅菌要求。

***化學(xué)指示劑：**使用專用化學(xué)指示卡或指示貼，觀察其顏色變化是否符合滅菌要求。

***生物指示劑：**使用對特定溫度和時(shí)間敏感的微生物（如嗜熱脂肪芽孢），將其置于待滅菌的培養(yǎng)基中或?qū)Ｓ脺y試包中，滅菌后培養(yǎng)，觀察是否有生長，以確認(rèn)滅菌是否徹底。

2.**接種操作：**

***環(huán)境要求：**所有接種操作必須在潔凈度符合要求的生物安全柜或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。操作前需開啟通風(fēng)，并保持工作臺(tái)面清潔干燥。

***人員準(zhǔn)備：**操作人員需穿戴潔凈工作服、手套，必要時(shí)佩戴口罩和護(hù)目鏡。

***器械準(zhǔn)備：**所有接種工具（接種環(huán)、接種針、移液器槍頭等）必須是無菌的，使用前需在火焰（酒精燈或本生燈）上徹底燒灼滅菌，待冷卻后使用。

***操作步驟（以平板劃線為例）：**

(1)在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)皿蓋（邊緣向下或傾斜放置，避免污染），用無菌接種環(huán)蘸取少量菌懸液。

(2)將接種環(huán)在培養(yǎng)基表面進(jìn)行分區(qū)劃線（如四區(qū)劃線法），每次劃線后，通過火焰滅菌接種環(huán)，待冷卻后再進(jìn)行下一區(qū)劃線，以分離得到單菌落。

(3)操作過程中避免接種環(huán)接觸皿邊或培養(yǎng)基邊緣，防止雜菌污染。

(4)劃線完畢，蓋上皿蓋，用無菌鑷子夾取火焰滅菌后的接種環(huán)，置于適當(dāng)容器中滅菌處理。

***移液操作：**使用移液器進(jìn)行液體接種時(shí)，需確保槍頭無菌，吸取和排放液體動(dòng)作輕柔，避免產(chǎn)生氣溶膠。接種后槍頭按規(guī)程處理。

3.**培養(yǎng)條件控制：**

***溫度：**根據(jù)待培養(yǎng)微生物的最適生長溫度選擇培養(yǎng)箱溫度。常用溫度包括：

*需氧菌：37℃

*厭氧菌：35℃-37℃（需配合厭氧培養(yǎng)罐或氣體調(diào)節(jié)系統(tǒng)）

*微溫菌：30℃

*低溫菌：25℃

***氣體環(huán)境：**

***需氧培養(yǎng)：**置于普通培養(yǎng)箱或大氣環(huán)境下。

***厭氧培養(yǎng)：**使用厭氧培養(yǎng)箱、厭氧罐或厭氧袋。需定期檢查和更換厭氧指示劑（如亞甲藍(lán)），確保厭氧環(huán)境有效。

***二氧化碳培養(yǎng)：**使用配備CO2氣體的培養(yǎng)箱，CO2濃度通?？刂圃?%-10%。

***培養(yǎng)時(shí)間：**根據(jù)目標(biāo)微生物的生長速度和檢驗(yàn)要求確定培養(yǎng)時(shí)間。常見培養(yǎng)時(shí)間范圍：

*需氧菌：一般培養(yǎng)24-48小時(shí)，某些緩慢生長菌可能需48-72小時(shí)甚至更長。

*厭氧菌：一般培養(yǎng)48-72小時(shí)。

*微生物總數(shù)培養(yǎng)：通常培養(yǎng)48小時(shí)。

***濕度：**培養(yǎng)箱內(nèi)通常保持較高的濕度，有利于微生物生長。

***培養(yǎng)監(jiān)控：**定期檢查培養(yǎng)箱溫度和濕度是否在設(shè)定范圍內(nèi)運(yùn)行穩(wěn)定。定期檢查培養(yǎng)的培養(yǎng)基是否有異常（如培養(yǎng)基變質(zhì)、污染等）。

**（二）微生物計(jì)數(shù)（擴(kuò)寫）**

1.**平板計(jì)數(shù)法（MPN法或平板法）：**

***（1）傾注法計(jì)數(shù)：**

***原理：**假設(shè)樣品在稀釋過程中微生物呈隨機(jī)分布，通過培養(yǎng)一定體積的平板上生長的菌落數(shù)，推算出原始樣品中的微生物數(shù)量。

***步驟：**

(1)進(jìn)行系列稀釋。選擇3-4個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3個(gè)平板。

(2)將適量（如0.1mL或1mL）的稀釋液倒入無菌平皿中，加入已冷卻至45℃-50℃的無菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（如RBCA），輕輕晃動(dòng)平皿使培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底，靜置冷卻。

(3)置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48-72小時(shí)。

(4)計(jì)數(shù)：選擇菌落數(shù)在30-300CFU的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。記錄每個(gè)平板的菌落數(shù)。若一個(gè)稀釋度所有平板的菌落數(shù)均<30或>300，則需稀釋或倍增稀釋后重新計(jì)數(shù)。

(5)計(jì)算平均菌落數(shù)：將同一稀釋度3個(gè)平板的菌落數(shù)相加，取平均值。

(6)計(jì)算原始樣品中的微生物數(shù)：使用公式CFU/mL(或CFU/g)=平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)。

***注意事項(xiàng)：**

*接種量需準(zhǔn)確，常用0.1mL或1mL。

*培養(yǎng)基需無缺陷，凝固均勻。

*計(jì)數(shù)時(shí)，采用估計(jì)法（如三聯(lián)計(jì)或四聯(lián)計(jì)）減少主觀誤差。

*菌落連片時(shí)需挑開，分散的衛(wèi)星菌落一般計(jì)入。

***（2）涂布法計(jì)數(shù)：**

***原理：**將樣品均勻涂布在平板表面，使每個(gè)菌落分離生長。

***步驟：**

(1)將適量（如0.1mL）菌懸液滴加在無菌平皿中心的無菌水或培養(yǎng)基表面。

(2)用無菌涂布棒蘸取菌液，在平皿表面進(jìn)行來回或Z字形勻布。

(3)待菌液被吸收后，將平板倒置（防止冷凝水滴落污染菌落），置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48-72小時(shí)。

(4)計(jì)數(shù)：選擇菌落數(shù)在30-300CFU的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。記錄每個(gè)平板的菌落數(shù)。若菌落數(shù)過少或過多，需調(diào)整稀釋倍數(shù)后重新涂布計(jì)數(shù)。

(5)計(jì)算原始樣品中的微生物數(shù)：使用公式CFU/mL(或CFU/g)=平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)。

***注意事項(xiàng)：**

*涂布要均勻，避免邊緣過厚或過薄。

*涂布后需待菌液完全吸收再倒置培養(yǎng)。

*計(jì)數(shù)方法同傾注法。

2.**顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（血球計(jì)數(shù)板法）：**

***原理：**利用特殊設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)板（如Neubauer計(jì)數(shù)板）和顯微鏡，直接計(jì)數(shù)視野中的微生物個(gè)體數(shù)。

***步驟：**

(1)制備菌懸液：取適量樣品，用無菌生理鹽水或稀釋液制成適當(dāng)濃度的菌懸液。必要時(shí)可通過顯微鏡初步觀察，調(diào)整濃度至視野中微生物數(shù)量適中（每小格約20-50個(gè)）。

(2)加樣：將菌懸液與生理鹽水按一定比例混合（如1:10），取混合液1-2滴滴加在計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室（大格）上，蓋上蓋玻片。避免氣泡進(jìn)入計(jì)數(shù)室。

(3)顯微鏡計(jì)數(shù)：將計(jì)數(shù)板置于顯微鏡下，選擇合適的放大倍數(shù)（通常100×或400×物鏡），在視野中計(jì)數(shù)指定區(qū)域內(nèi)的微生物個(gè)體數(shù)。

(4)計(jì)算：根據(jù)計(jì)數(shù)板的刻度、所用稀釋倍數(shù)以及顯微鏡放大倍數(shù)，計(jì)算單位體積或單位重量樣品中的微生物數(shù)量。常用公式：

CFU/mL(或CFU/g)=(countedcells/(totalsquarescounted×dilutionfactor×volumepersquare))×10^9

（注意：不同計(jì)數(shù)板刻度計(jì)算公式可能略有差異，需參照具體計(jì)數(shù)板說明）

***注意事項(xiàng)：**

*菌液濃度需適宜，過高或過低都會(huì)影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

*計(jì)數(shù)時(shí)需區(qū)分微生物個(gè)體和氣泡，避免漏計(jì)或誤計(jì)。

*對于不規(guī)則的微生物（如酵母菌），計(jì)數(shù)可能較困難，需經(jīng)驗(yàn)積累。

**（三）微生物鑒定（擴(kuò)寫）**

1.**形態(tài)學(xué)觀察：**

***菌落形態(tài)：**在顯微鏡下觀察培養(yǎng)物中的菌落形態(tài)，或挑取單個(gè)菌落進(jìn)行涂片。記錄菌落的形狀（圓形、不規(guī)則形等）、大小、邊緣（整齊、波狀、絲狀等）、顏色、隆起程度（扁平、凸起、臍狀等）、透明度（透明、半透明、不透明）、表面（光滑、粗糙、濕潤、干燥、粘液狀、絲絨狀等）。

***革蘭氏染色：**這是最基礎(chǔ)和重要的鑒別方法。通過染色區(qū)分細(xì)菌是革蘭氏陽性（G+）還是革蘭氏陰性（G-）。記錄染色結(jié)果。

***顯微結(jié)構(gòu)：**制備細(xì)菌涂片（革蘭氏染色后觀察或直接染色），在顯微鏡下觀察細(xì)菌的基本形態(tài)（球菌、桿菌、螺旋菌等）、大小、排列方式（單菌、對、鏈、簇等），以及特殊結(jié)構(gòu)（如芽孢、莢膜、鞭毛、菌毛等）。

***染色方法：**嚴(yán)格按SOP操作，包括初染、媒染、脫色、復(fù)染各步的時(shí)間和順序，以及酒精脫色時(shí)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2.**生化試驗(yàn)：**

***原理：**利用微生物代謝特定底物時(shí)產(chǎn)生的可測量產(chǎn)物（如酸、氣體、色素等），來鑒定其種類。常用方法包括：

***糖發(fā)酵試驗(yàn)：**檢測微生物對多種碳源（如葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等）的發(fā)酵能力。常用MUG（甲基紅-伏龍斯基）培養(yǎng)基檢測產(chǎn)氣。

***氧化酶試驗(yàn)：**檢測細(xì)胞色素C氧化酶活性。使用氧化酶試紙或培養(yǎng)基（如TTC培養(yǎng)基）。

***觸酶試驗(yàn)：**檢測過氧化氫酶活性。將菌液與3%過氧化氫溶液混合，觀察是否有氣泡產(chǎn)生。

***硫化氫試驗(yàn)：**檢測產(chǎn)生硫化氫的能力。使用鐵氰化鉀培養(yǎng)基（如TSI培養(yǎng)基或SIM培養(yǎng)基）。

***尿素酶試驗(yàn)：**檢測尿素分解能力。使用尿素培養(yǎng)基（如UR培養(yǎng)基）。

***甲基紅（MR）和伏龍斯基（VP）試驗(yàn)：**檢測糖代謝終產(chǎn)物（甲酸和乙酸）。

***操作步驟：**

(1)制備菌懸液：使用純培養(yǎng)的菌落，制備成新鮮、無顆粒的菌懸液（通常用0.9%無菌生理鹽水）。

(2)進(jìn)行試驗(yàn)：按照具體試驗(yàn)的SOP，將菌懸液加入相應(yīng)的生化鑒定培養(yǎng)基或試紙中。

(3)觀察結(jié)果：根據(jù)SOP規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和條件進(jìn)行培養(yǎng)，觀察并記錄結(jié)果（如顏色變化、氣體產(chǎn)生、沉淀形成等）。

(4)結(jié)果判讀：將所有試驗(yàn)結(jié)果與鑒定數(shù)據(jù)庫或標(biāo)準(zhǔn)手冊進(jìn)行比對，初步確定微生物種類。

***注意事項(xiàng)：**

*菌懸液需新鮮，濃度適宜。

*試驗(yàn)所用試劑和培養(yǎng)基需合格、新鮮。

*觀察結(jié)果需準(zhǔn)確，注意區(qū)分假陽性或假陰性。

*對于結(jié)果不確定的微生物，可能需要補(bǔ)充其他試驗(yàn)或進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。

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**五、質(zhì)量控制措施（擴(kuò)寫）**

**（一）內(nèi)部質(zhì)量控制（擴(kuò)寫）**

1.**空白對照試驗(yàn)：**

***目的：**檢測培養(yǎng)基、試劑、操作過程是否存在污染。

***操作：**

(1)**培養(yǎng)基空白：**無菌操作下，在無菌環(huán)境中打開無菌培養(yǎng)基包裝，不接種任何樣品或菌液，直接進(jìn)行培養(yǎng)。觀察是否有菌落生長。

(2)**操作空白：**在實(shí)際檢驗(yàn)過程中，不處理樣品，僅進(jìn)行接種、培養(yǎng)等后續(xù)操作?；蚴褂脽o菌生理鹽水代替樣品進(jìn)行全程操作，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。

***頻率：**每天進(jìn)行一次。培養(yǎng)基空白可在制備后立即檢查或在使用前檢查。

***結(jié)果判斷：**任何空白對照試驗(yàn)結(jié)果陽性，均表明存在污染風(fēng)險(xiǎn)，必須查找原因并糾正后方可繼續(xù)檢驗(yàn)。相關(guān)記錄需詳細(xì)保存。

2.**質(zhì)控菌株（QC菌株）的使用：**

***目的：**驗(yàn)證檢驗(yàn)方法、培養(yǎng)基、試劑的有效性和穩(wěn)定性，以及檢驗(yàn)人員操作的規(guī)范性。

***選擇：**選擇標(biāo)準(zhǔn)化的、性能穩(wěn)定的質(zhì)控菌株，如大腸桿菌（*Escherichiacoli*）、金黃色葡萄球菌（*Staphylococcusaureus*）、枯草芽孢桿菌（*Bacillussubtilis*）等，以及特定的指示菌或項(xiàng)目相關(guān)菌株。

***操作：**

(1)**陽性對照：**在日常檢驗(yàn)中，使用已知數(shù)量的質(zhì)控菌株，按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行接種和培養(yǎng)。比較培養(yǎng)結(jié)果與預(yù)期值（如菌落數(shù)、生長特征），評估方法的檢出能力或計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

(2)**穩(wěn)定性監(jiān)控：**定期（如每周或每月）使用質(zhì)控菌株進(jìn)行全流程檢驗(yàn)，監(jiān)控整個(gè)檢驗(yàn)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。

(3)**方法驗(yàn)證：**在開發(fā)或修改檢驗(yàn)方法時(shí)，使用質(zhì)控菌株驗(yàn)證新方法的準(zhǔn)確性和可靠性。

***記錄：**詳細(xì)記錄質(zhì)控菌株的來源、保藏條件、使用次數(shù)、檢驗(yàn)結(jié)果、與預(yù)期值的比較、以及任何偏差分析和糾正措施。

3.**質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的記錄與趨勢分析：**

***記錄：**將所有內(nèi)部質(zhì)控（空白對照、質(zhì)控菌株）的結(jié)果，連同檢驗(yàn)日期、檢驗(yàn)項(xiàng)目、檢驗(yàn)人員等信息，統(tǒng)一記錄在質(zhì)量控制日志中。

***趨勢分析：**定期（如每月）回顧質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，繪制趨勢圖（如折線圖），直觀展示檢驗(yàn)系統(tǒng)長期的表現(xiàn)。關(guān)注數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性、漂移趨勢、異常波動(dòng)等。

***異常處理：**當(dāng)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)出現(xiàn)持續(xù)偏離或異常波動(dòng)時(shí)，必須立即進(jìn)行調(diào)查，分析可能的原因（如試劑過期、設(shè)備故障、操作失誤、環(huán)境變化等），并采取糾正措施。所有調(diào)查和處理過程需有記錄。

**（二）外部質(zhì)量控制（擴(kuò)寫）**

1.**參加能力驗(yàn)證計(jì)劃（ProficiencyTesting,PT）：**

***目的：**通過與其他實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，評估自身檢驗(yàn)?zāi)芰Φ臏?zhǔn)確性和可靠性，發(fā)現(xiàn)潛在問題。

***選擇機(jī)構(gòu)：**選擇信譽(yù)良好、覆蓋相關(guān)領(lǐng)域的第三方能力驗(yàn)證提供機(jī)構(gòu)（如國際認(rèn)證機(jī)構(gòu)、國家級或行業(yè)級實(shí)驗(yàn)室）。

***參與項(xiàng)目：**根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)范圍和能力，選擇合適的檢驗(yàn)項(xiàng)目（如特定微生物的檢測、菌落總數(shù)的測定等）參與。

***操作：**按照提供機(jī)構(gòu)的要求，使用標(biāo)準(zhǔn)方法處理樣品，檢驗(yàn)后上報(bào)結(jié)果。

***結(jié)果分析：**收到能力驗(yàn)證結(jié)果報(bào)告后，與靶值（參考值）或允許范圍進(jìn)行比較，計(jì)算偏倚（Bias）、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）等統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。分析結(jié)果是否在可接受范圍內(nèi)。若結(jié)果不理想，需深入分析原因并改進(jìn)工作。

***頻率：**通常每年參與1-4次能力驗(yàn)證。

2.**購買商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/質(zhì)控品：**

***目的：**使用商業(yè)公司生產(chǎn)的、已知濃度或含量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或質(zhì)控品，進(jìn)行日常檢驗(yàn)的實(shí)時(shí)監(jiān)控，快速評估檢驗(yàn)系統(tǒng)的當(dāng)前狀態(tài)。

***選擇產(chǎn)品：**選擇針對特定檢驗(yàn)項(xiàng)目（如特定病原體、特定微生物計(jì)數(shù)）設(shè)計(jì)的、具有良好穩(wěn)定性和均勻性的商業(yè)質(zhì)控品。

***操作：**按照SOP或產(chǎn)品說明書的要求，將質(zhì)控品用于日常檢驗(yàn)流程中，與其他樣品一同處理和檢測。記錄結(jié)果。

***結(jié)果判斷：**將檢測結(jié)果與質(zhì)控品的標(biāo)示值或允許范圍進(jìn)行比較。若結(jié)果超出范圍，需立即檢查原因并采取糾正措施。若結(jié)果持續(xù)穩(wěn)定在允許范圍內(nèi)，可作為內(nèi)部質(zhì)量控制的良好指標(biāo)。

***頻率：**可根據(jù)需要，在每天、每周或每次檢驗(yàn)時(shí)使用。

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**七、持續(xù)改進(jìn)（擴(kuò)寫）**

**（一）定期評審（擴(kuò)寫）**

1.**評審目的：**系統(tǒng)性地評估微生物檢驗(yàn)質(zhì)量管理體系的運(yùn)行效果，識(shí)別存在的問題和改進(jìn)機(jī)會(huì)，確保持續(xù)符合要求并不斷提升質(zhì)量。

2.**評審內(nèi)容：**

***質(zhì)量手冊和SOP的適宜性、充分性和有效性：**是否符合當(dāng)前檢驗(yàn)活動(dòng)和技術(shù)發(fā)展，是否易于理解和執(zhí)行。

***內(nèi)部質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的分析：**趨勢分析、異常情況、改進(jìn)措施的有效性。

***能力驗(yàn)證結(jié)果的評估：**與其他實(shí)驗(yàn)室的比對情況，自身檢驗(yàn)?zāi)芰Φ淖C明。

***檢驗(yàn)投訴和客戶反饋的處理情況：**分析投訴原因，改進(jìn)服務(wù)。

***人員培訓(xùn)和資質(zhì)管理：**培訓(xùn)計(jì)劃的完成情況，人員能力是否滿足崗位要求。

***實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與設(shè)備維護(hù)：**環(huán)境監(jiān)控記錄，設(shè)備校準(zhǔn)和維護(hù)計(jì)劃的執(zhí)行情況。

***記錄管理的完整性和可追溯性：**記錄是否齊全、準(zhǔn)確、及時(shí)。

3.**評審頻率：**至少每年進(jìn)行一次正式的質(zhì)量評審會(huì)議。日常可根據(jù)需要（如發(fā)生重大偏差、法規(guī)更新、能力驗(yàn)證結(jié)果異常時(shí)）進(jìn)行臨時(shí)評審。

4.**評審參與者：**質(zhì)量管理小組成員、檢驗(yàn)技術(shù)人員負(fù)責(zé)人、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人等關(guān)鍵人員。

5.**輸出與跟進(jìn)：**評審結(jié)束后形成評審報(bào)告，明確存在的問題、改進(jìn)措施、責(zé)任人、完成時(shí)限。跟蹤改進(jìn)措施的落實(shí)情況，并在下次評審時(shí)進(jìn)行復(fù)核。

**（二）人員培訓(xùn)（擴(kuò)寫）**

1.**培訓(xùn)目的：**確保所有檢驗(yàn)人員掌握必要的理論知識(shí)和操作技能，了解相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)要求，熟悉實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理體系和SOP，持續(xù)提升檢驗(yàn)?zāi)芰唾|(zhì)量意識(shí)。

2.**培訓(xùn)內(nèi)容：**

***基礎(chǔ)知識(shí)：**微生物學(xué)基本原理、常用檢驗(yàn)方法原理、相關(guān)術(shù)語。

***SOP操作：**各項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目的具體操作步驟、注意事項(xiàng)、質(zhì)量控制要求。

***質(zhì)量管理體系：**實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊、程序文件、規(guī)章制度，質(zhì)量責(zé)任，GMP/GDP（如適用）等相關(guān)要求。

***安全防護(hù)：**實(shí)驗(yàn)室生物安全、個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）的使用、廢棄物處理。

***儀器設(shè)備操作與維護(hù)：**常用儀器的基本操作、日常維護(hù)保養(yǎng)。

***記錄與報(bào)告：**正確填寫檢驗(yàn)記錄和報(bào)告，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和完整性。

***新知識(shí)、新技術(shù)：**分享行業(yè)動(dòng)態(tài)、新技術(shù)進(jìn)展、新法規(guī)要求。

3.**培訓(xùn)方式：**

***理論授課：**面對面講解、內(nèi)部專家授課。

***操作演示：**專家現(xiàn)場示范關(guān)鍵操作。

***實(shí)際操作練習(xí)：**學(xué)員在指導(dǎo)下親手操作。

***案例分析：**討論實(shí)際工作中遇到的問題和解決方案。

***在線學(xué)習(xí)：**利用網(wǎng)絡(luò)資源進(jìn)行自主學(xué)習(xí)。

4.**培訓(xùn)記錄與評估：**

*建立培訓(xùn)檔案，記錄培訓(xùn)內(nèi)容、時(shí)間、講師、參加人員、考核結(jié)果等。

*培訓(xùn)結(jié)束后進(jìn)行考核，檢驗(yàn)培訓(xùn)效果?？己朔绞娇蔀楣P試、口試、實(shí)際操作考核等。

*評估培訓(xùn)是否滿足崗位需求，是否有效提升了人員能力。

5.**培訓(xùn)頻率：**

***新員工：**入職時(shí)必須接受全面的系統(tǒng)培訓(xùn)，通過考核后方可上崗。

***在崗員工：**定期（如每年）進(jìn)行復(fù)訓(xùn)和更新培訓(xùn)，特別是SOP更新、新技術(shù)、新法規(guī)方面的培訓(xùn)。根據(jù)工作需要和考核結(jié)果，安排專項(xiàng)技能培訓(xùn)。

***關(guān)鍵崗位人員：**如授權(quán)簽字人、SOP編寫人員等，需接受更嚴(yán)格、更頻繁的培訓(xùn)和資質(zhì)驗(yàn)證。

一、概述

微生物檢驗(yàn)是檢測樣品中微生物含量和種類的重要技術(shù)手段，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、環(huán)境、生物制品等領(lǐng)域。為確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和一致性，建立完善的質(zhì)量管理方案至關(guān)重要。本方案旨在規(guī)范微生物檢驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，從樣品采集到結(jié)果報(bào)告，全面提升檢驗(yàn)質(zhì)量。

二、質(zhì)量管理體系的建立

（一）組織結(jié)構(gòu)與職責(zé)

1.成立微生物檢驗(yàn)質(zhì)量管理小組，負(fù)責(zé)制定、實(shí)施和監(jiān)督檢驗(yàn)流程。

2.明確各崗位職責(zé)：

(1)負(fù)責(zé)人：統(tǒng)籌檢驗(yàn)工作，審核關(guān)鍵決策。

(2)技術(shù)骨干：執(zhí)行檢驗(yàn)操作，解決技術(shù)問題。

(3)記錄員：整理檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，確保文檔完整。

（二）制度文件管理

1.制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），涵蓋樣品采集、處理、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)、鑒定等全過程。

2.定期更新制度文件，確保與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)同步。

三、樣品采集與處理

（一）樣品采集要求

1.選擇代表性樣品，避免污染。

2.樣品數(shù)量應(yīng)符合檢驗(yàn)需求，一般不少于100g或10mL。

3.采集工具需清潔、無菌，使用后立即滅菌處理。

（二）樣品處理流程

1.樣品接收：檢查樣品標(biāo)簽、包裝、溫度等是否符合要求。

2.前處理：

(1)固體樣品：勻漿或研磨，確保均勻分散。

(2)液體樣品：充分混勻，取適量進(jìn)行檢測。

3.滅菌處理：必要時(shí)對樣品進(jìn)行高壓蒸汽滅菌（121℃，15分鐘）。

四、檢驗(yàn)操作規(guī)范

（一）微生物培養(yǎng)

1.培養(yǎng)基準(zhǔn)備：按SOP配制，檢查pH值、無菌性等指標(biāo)。

2.接種操作：

(1)使用無菌移液器或接種環(huán)。

(2)避免培養(yǎng)基表面接觸，防止污染。

3.培養(yǎng)條件：

(1)溫度：常用37℃恒溫培養(yǎng)。

(2)時(shí)間：需氧菌培養(yǎng)48小時(shí)，厭氧菌培養(yǎng)72小時(shí)。

（二）微生物計(jì)數(shù)

1.平板計(jì)數(shù)法：

(1)采用傾注法或涂布法。

(2)選擇菌落數(shù)在30-300CFU的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2.顯微鏡計(jì)數(shù)法：

(1)使用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。

(2)計(jì)算單位體積或重量的微生物數(shù)量。

（三）微生物鑒定

1.形態(tài)學(xué)觀察：通過顯微鏡觀察菌落形狀、顏色、大小等特征。

2.生化試驗(yàn)：

(1)選擇典型生化反應(yīng)進(jìn)行檢測，如氧化酶試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)等。

(2)參照鑒定手冊或數(shù)據(jù)庫進(jìn)行結(jié)果比對。

五、質(zhì)量控制措施

（一）內(nèi)部質(zhì)量控制

1.每天進(jìn)行空白對照試驗(yàn)，確保培養(yǎng)基無菌性。

2.定期使用質(zhì)控菌株（如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌），驗(yàn)證檢驗(yàn)方法準(zhǔn)確性。

3.記錄質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，繪制趨勢圖，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)調(diào)整。

（二）外部質(zhì)量控制

1.參加能力驗(yàn)證計(jì)劃，與其他實(shí)驗(yàn)室比對結(jié)果。

2.定期購買商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，驗(yàn)證檢驗(yàn)系統(tǒng)性能。

六、結(jié)果報(bào)告與追溯

（一）報(bào)告規(guī)范

1.報(bào)告內(nèi)容：樣品信息、檢驗(yàn)項(xiàng)目、結(jié)果、結(jié)論、檢驗(yàn)人及日期。

2.結(jié)果審核：由技術(shù)負(fù)責(zé)人復(fù)核，確保無邏輯錯(cuò)誤。

（二）數(shù)據(jù)追溯

1.建立電子或紙質(zhì)記錄系統(tǒng)，保存原始數(shù)據(jù)、計(jì)算過程、審核記錄。

2.追溯流程：出現(xiàn)爭議時(shí)，可調(diào)取相關(guān)記錄核查檢驗(yàn)過程。

七、持續(xù)改進(jìn)

（一）定期評審

1.每季度召開質(zhì)量評審會(huì)議，總結(jié)檢驗(yàn)問題。

2.修訂SOP，優(yōu)化檢驗(yàn)流程。

（二）人員培訓(xùn)

1.每半年進(jìn)行操作培訓(xùn)，考核合格后方可上崗。

2.學(xué)習(xí)新技術(shù)、新方法，提升檢驗(yàn)水平。

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**三、樣品采集與處理（擴(kuò)寫）**

**（一）樣品采集要求（擴(kuò)寫）**

1.**選擇代表性樣品：**

*樣品必須能夠真實(shí)反映被檢對象的整體狀況。采集時(shí)需避免選取表層、邊緣或異常部分，應(yīng)從不同部位、不同層次進(jìn)行多點(diǎn)、多量采樣。

*對于散裝物料（如粉末、顆粒），可采用五點(diǎn)取樣法或棋盤式取樣法；對于包裝好的產(chǎn)品，應(yīng)隨機(jī)抽取一定比例（例如，至少3-5包）的樣品。

*樣品量需滿足后續(xù)檢驗(yàn)和必要的富集、稀釋要求。通常，固體樣品建議采集不少于100克或10毫升，液體樣品建議采集不少于100毫升。對于特定項(xiàng)目或低濃度檢測，樣品量可能需要更大。

2.**樣品包裝與標(biāo)識(shí)：**

*樣品應(yīng)使用清潔、干燥、無吸附性、無穿透性的無菌容器或包裝袋。容器材質(zhì)需與樣品不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)（如金屬容器避免接觸強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性樣品）。

*樣品容器在采樣前必須經(jīng)過嚴(yán)格清潔和滅菌處理。常用滅菌方法包括高壓蒸汽滅菌（121℃，15-20分鐘）、干熱滅菌（160℃，2小時(shí)）或環(huán)氧乙烷滅菌。滅菌后的容器需在無菌環(huán)境中開啟使用。

*樣品標(biāo)識(shí)應(yīng)清晰、牢固、耐久，包含樣品編號(hào)、采集日期、采集時(shí)間、樣品來源/名稱、采集人等信息。優(yōu)先使用條形碼或二維碼進(jìn)行標(biāo)識(shí)，以減少手動(dòng)記錄錯(cuò)誤。標(biāo)識(shí)應(yīng)置于樣品容器外部，避免與樣品接觸。

3.**采樣環(huán)境控制：**

*采樣應(yīng)在清潔、低塵、無氣流干擾的環(huán)境中進(jìn)行，最好在生物安全柜或超凈工作臺(tái)內(nèi)操作，以最大限度減少環(huán)境微生物的污染。

*采樣人員需穿戴潔凈工作服、手套，并盡量減少在采樣區(qū)域的活動(dòng)，避免引入外來微生物。

*采樣工具（如取樣勺、取樣針、鑷子等）必須是無菌的，使用后應(yīng)進(jìn)行滅菌處理。

4.**樣品運(yùn)輸與保存：**

*樣品運(yùn)輸過程中應(yīng)保持包裝完整，防止破損、泄漏或二次污染。需冷藏的樣品（如冷藏食品、無菌液體）應(yīng)使用保溫箱并配備冰袋或冷藏包，確保在運(yùn)輸過程中溫度保持在2℃-8℃。

*樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)盡快進(jìn)行檢驗(yàn)。對于無法立即檢驗(yàn)的樣品，應(yīng)根據(jù)其性質(zhì)和目標(biāo)微生物類型，在規(guī)定條件下（如冷藏、冷凍、厭氧環(huán)境）進(jìn)行短期或長期保存。不同類型樣品的推薦保存時(shí)間和條件可在SOP中詳細(xì)規(guī)定（例如，某些食品樣品在4℃可保存24-48小時(shí)）。

**（二）樣品處理流程（擴(kuò)寫）**

1.**樣品接收與核對：**

*接收樣品時(shí)，首先核對樣品標(biāo)識(shí)信息是否與送檢單一致，確認(rèn)樣品外觀狀態(tài)（如包裝是否完好、有無異味、顏色是否異常等）。

*檢查樣品溫度是否在可接受范圍內(nèi)，并記錄。

*如有送檢單，需與樣品一起存放，確保檢驗(yàn)過程可追溯。

2.**表面消毒（如適用）：**

*對于植物、土壤或動(dòng)物組織等表面可能攜帶大量雜菌的樣品，在無菌操作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行表面消毒處理是必要的。

*常用消毒劑包括70%-75%乙醇溶液、0.1%氯化鈉溶液、0.01%-0.1%無菌鹽水等。需根據(jù)樣品材質(zhì)和目標(biāo)微生物選擇合適的消毒劑和消毒時(shí)間（通常為30秒-5分鐘）。

*消毒后需進(jìn)行適當(dāng)?shù)牟料椿虼蹈?，以去除殘留消毒劑，避免影響后續(xù)培養(yǎng)。消毒效果需定期驗(yàn)證。

3.**樣品前處理（根據(jù)樣品類型選擇）：**

***（1）固體樣品處理：**

***勻漿/研磨：**對于塊狀、顆粒狀或組織樣品，需將其充分破碎、勻漿，以增加微生物與培養(yǎng)基的接觸面積。可使用無菌均質(zhì)器、組織搗碎機(jī)或研缽進(jìn)行操作。操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行。

***稀釋：**勻漿后的樣品需進(jìn)行系列稀釋，以獲得適宜計(jì)數(shù)的菌懸液。常用方法包括：

*稱取適量（如10克或1mL）樣品加入無菌生理鹽水或緩沖液中，充分混勻。

*用無菌移液器吸取一定量的稀釋液，加入更大體積的無菌稀釋液中，進(jìn)行10倍系列稀釋。

*記錄每個(gè)稀釋步驟的倍數(shù)。

***選擇性增菌（如適用）：**對于某些特定項(xiàng)目（如致病菌檢測），可能需要在稀釋液中加入選擇培養(yǎng)基，在特定條件下（如溫度、氣體環(huán)境）進(jìn)行培養(yǎng)，以促進(jìn)目標(biāo)微生物生長并抑制雜菌。

***（2）液體樣品處理：**

***混勻：**充分搖勻液體樣品，確保內(nèi)部成分均勻。

***直接接種或系列稀釋：**根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠肺廴境潭?，可直接接種部分樣品，或進(jìn)行系列稀釋后接種。稀釋方法同固體樣品。

***離心（如適用）：**對于含大量不溶性雜質(zhì)的液體樣品，可先進(jìn)行離心（如4000-8000rpm，5-10分鐘），取上清液進(jìn)行檢驗(yàn)，以去除干擾物質(zhì)。

***（3）半固體/粘稠樣品處理：**

*可先加入無菌液體（如生理鹽水）進(jìn)行稀釋或溶解。

*對于粘稠樣品，可先加入少量無菌分散劑（如吐溫-80溶液）助溶。

4.**接種與制備檢驗(yàn)樣品：**

*根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目和方法，將處理后的樣品接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基中。接種方法需嚴(yán)格無菌操作，常用方法包括：

***傾注法：**將適量菌懸液加入無菌平皿中，倒入已冷卻至45℃左右的無菌培養(yǎng)基（如MRS、MAC平板），輕輕晃動(dòng)平皿使培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底，靜置凝固。

***涂布法：**將菌懸液用無菌吸管吸取少量，滴加到無菌平皿中的無菌水或培養(yǎng)基表面，用無菌涂布棒均勻涂布?？蛇M(jìn)行平板涂布或瓊脂表面涂布。

***劃線法：**用于分離純培養(yǎng)。將菌懸液用接種環(huán)在瓊脂平板上進(jìn)行分區(qū)劃線，每次劃線后滅菌接種環(huán)，以獲得單菌落。

***傾注法（用于菌落計(jì)數(shù)）：**將一定體積的稀釋液加入無菌平皿中，再倒入熔化并冷卻至45℃左右的無菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（如RBCA、PCA平板），輕輕晃動(dòng)，靜置凝固。

*所有接種操作必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，確保無菌環(huán)境。

5.**樣品處理記錄：**

*詳細(xì)記錄樣品處理過程中的所有操作步驟、所用試劑、體積、溫度、時(shí)間、操作人等信息。記錄應(yīng)清晰、準(zhǔn)確、及時(shí)，便于后續(xù)追溯和審核。

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**四、檢驗(yàn)操作規(guī)范（擴(kuò)寫）**

**（一）微生物培養(yǎng)（擴(kuò)寫）**

1.**培養(yǎng)基準(zhǔn)備與滅菌：**

***培養(yǎng)基配制：**嚴(yán)格按照SOP或國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的配方稱量試劑，使用去離子水或蒸餾水溶解。確保稱量準(zhǔn)確，溶解完全。調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定范圍，使用pH計(jì)校準(zhǔn)。

***分裝：**將配制好的培養(yǎng)基分裝到合適的容器中（如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿），分裝量應(yīng)考慮滅菌后體積收縮和微生物生長空間。

***滅菌：**常用高壓蒸汽滅菌法。需根據(jù)培養(yǎng)基類型和容器選擇合適的滅菌條件：

*液體培養(yǎng)基：通常采用高壓蒸汽滅菌，如115℃或121℃，15-20分鐘。

*固體培養(yǎng)基（平板）：通常采用高壓蒸汽滅菌，如115℃或121℃，15-20分鐘。注意滅菌后培養(yǎng)基溫度會(huì)升高，需冷卻至適宜接種溫度（通常45℃-50℃）。

*固體培養(yǎng)基（斜面、肉湯）：通常采用高壓蒸汽滅菌，如115℃或121℃，15-20分鐘。

***滅菌后處理：**

***平板：**滅菌后需在超凈工作臺(tái)或生物安全柜內(nèi)冷卻至45℃-50℃，期間避免長時(shí)間放置或接觸空氣導(dǎo)致水分蒸發(fā)。冷卻過程需輕柔翻動(dòng)，確保培養(yǎng)基均勻。

***試管/三角瓶：**滅菌后待其冷卻至室溫或所需溫度再進(jìn)行后續(xù)操作。

***滅菌效果確認(rèn)：**定期進(jìn)行滅菌效果驗(yàn)證，常用方法包括：

***物理驗(yàn)證：**使用溫度計(jì)監(jiān)測滅菌過程中不同位置的溫度和壓力變化，確保達(dá)到滅菌要求。

***化學(xué)指示劑：**使用專用化學(xué)指示卡或指示貼，觀察其顏色變化是否符合滅菌要求。

***生物指示劑：**使用對特定溫度和時(shí)間敏感的微生物（如嗜熱脂肪芽孢），將其置于待滅菌的培養(yǎng)基中或?qū)Ｓ脺y試包中，滅菌后培養(yǎng)，觀察是否有生長，以確認(rèn)滅菌是否徹底。

2.**接種操作：**

***環(huán)境要求：**所有接種操作必須在潔凈度符合要求的生物安全柜或超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。操作前需開啟通風(fēng)，并保持工作臺(tái)面清潔干燥。

***人員準(zhǔn)備：**操作人員需穿戴潔凈工作服、手套，必要時(shí)佩戴口罩和護(hù)目鏡。

***器械準(zhǔn)備：**所有接種工具（接種環(huán)、接種針、移液器槍頭等）必須是無菌的，使用前需在火焰（酒精燈或本生燈）上徹底燒灼滅菌，待冷卻后使用。

***操作步驟（以平板劃線為例）：**

(1)在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)皿蓋（邊緣向下或傾斜放置，避免污染），用無菌接種環(huán)蘸取少量菌懸液。

(2)將接種環(huán)在培養(yǎng)基表面進(jìn)行分區(qū)劃線（如四區(qū)劃線法），每次劃線后，通過火焰滅菌接種環(huán)，待冷卻后再進(jìn)行下一區(qū)劃線，以分離得到單菌落。

(3)操作過程中避免接種環(huán)接觸皿邊或培養(yǎng)基邊緣，防止雜菌污染。

(4)劃線完畢，蓋上皿蓋，用無菌鑷子夾取火焰滅菌后的接種環(huán)，置于適當(dāng)容器中滅菌處理。

***移液操作：**使用移液器進(jìn)行液體接種時(shí)，需確保槍頭無菌，吸取和排放液體動(dòng)作輕柔，避免產(chǎn)生氣溶膠。接種后槍頭按規(guī)程處理。

3.**培養(yǎng)條件控制：**

***溫度：**根據(jù)待培養(yǎng)微生物的最適生長溫度選擇培養(yǎng)箱溫度。常用溫度包括：

*需氧菌：37℃

*厭氧菌：35℃-37℃（需配合厭氧培養(yǎng)罐或氣體調(diào)節(jié)系統(tǒng)）

*微溫菌：30℃

*低溫菌：25℃

***氣體環(huán)境：**

***需氧培養(yǎng)：**置于普通培養(yǎng)箱或大氣環(huán)境下。

***厭氧培養(yǎng)：**使用厭氧培養(yǎng)箱、厭氧罐或厭氧袋。需定期檢查和更換厭氧指示劑（如亞甲藍(lán)），確保厭氧環(huán)境有效。

***二氧化碳培養(yǎng)：**使用配備CO2氣體的培養(yǎng)箱，CO2濃度通?？刂圃?%-10%。

***培養(yǎng)時(shí)間：**根據(jù)目標(biāo)微生物的生長速度和檢驗(yàn)要求確定培養(yǎng)時(shí)間。常見培養(yǎng)時(shí)間范圍：

*需氧菌：一般培養(yǎng)24-48小時(shí)，某些緩慢生長菌可能需48-72小時(shí)甚至更長。

*厭氧菌：一般培養(yǎng)48-72小時(shí)。

*微生物總數(shù)培養(yǎng)：通常培養(yǎng)48小時(shí)。

***濕度：**培養(yǎng)箱內(nèi)通常保持較高的濕度，有利于微生物生長。

***培養(yǎng)監(jiān)控：**定期檢查培養(yǎng)箱溫度和濕度是否在設(shè)定范圍內(nèi)運(yùn)行穩(wěn)定。定期檢查培養(yǎng)的培養(yǎng)基是否有異常（如培養(yǎng)基變質(zhì)、污染等）。

**（二）微生物計(jì)數(shù)（擴(kuò)寫）**

1.**平板計(jì)數(shù)法（MPN法或平板法）：**

***（1）傾注法計(jì)數(shù)：**

***原理：**假設(shè)樣品在稀釋過程中微生物呈隨機(jī)分布，通過培養(yǎng)一定體積的平板上生長的菌落數(shù)，推算出原始樣品中的微生物數(shù)量。

***步驟：**

(1)進(jìn)行系列稀釋。選擇3-4個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3個(gè)平板。

(2)將適量（如0.1mL或1mL）的稀釋液倒入無菌平皿中，加入已冷卻至45℃-50℃的無菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（如RBCA），輕輕晃動(dòng)平皿使培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底，靜置冷卻。

(3)置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48-72小時(shí)。

(4)計(jì)數(shù)：選擇菌落數(shù)在30-300CFU的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。記錄每個(gè)平板的菌落數(shù)。若一個(gè)稀釋度所有平板的菌落數(shù)均<30或>300，則需稀釋或倍增稀釋后重新計(jì)數(shù)。

(5)計(jì)算平均菌落數(shù)：將同一稀釋度3個(gè)平板的菌落數(shù)相加，取平均值。

(6)計(jì)算原始樣品中的微生物數(shù)：使用公式CFU/mL(或CFU/g)=平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)。

***注意事項(xiàng)：**

*接種量需準(zhǔn)確，常用0.1mL或1mL。

*培養(yǎng)基需無缺陷，凝固均勻。

*計(jì)數(shù)時(shí)，采用估計(jì)法（如三聯(lián)計(jì)或四聯(lián)計(jì)）減少主觀誤差。

*菌落連片時(shí)需挑開，分散的衛(wèi)星菌落一般計(jì)入。

***（2）涂布法計(jì)數(shù)：**

***原理：**將樣品均勻涂布在平板表面，使每個(gè)菌落分離生長。

***步驟：**

(1)將適量（如0.1mL）菌懸液滴加在無菌平皿中心的無菌水或培養(yǎng)基表面。

(2)用無菌涂布棒蘸取菌液，在平皿表面進(jìn)行來回或Z字形勻布。

(3)待菌液被吸收后，將平板倒置（防止冷凝水滴落污染菌落），置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48-72小時(shí)。

(4)計(jì)數(shù)：選擇菌落數(shù)在30-300CFU的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。記錄每個(gè)平板的菌落數(shù)。若菌落數(shù)過少或過多，需調(diào)整稀釋倍數(shù)后重新涂布計(jì)數(shù)。

(5)計(jì)算原始樣品中的微生物數(shù)：使用公式CFU/mL(或CFU/g)=平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)。

***注意事項(xiàng)：**

*涂布要均勻，避免邊緣過厚或過薄。

*涂布后需待菌液完全吸收再倒置培養(yǎng)。

*計(jì)數(shù)方法同傾注法。

2.**顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（血球計(jì)數(shù)板法）：**

***原理：**利用特殊設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)板（如Neubauer計(jì)數(shù)板）和顯微鏡，直接計(jì)數(shù)視野中的微生物個(gè)體數(shù)。

***步驟：**

(1)制備菌懸液：取適量樣品，用無菌生理鹽水或稀釋液制成適當(dāng)濃度的菌懸液。必要時(shí)可通過顯微鏡初步觀察，調(diào)整濃度至視野中微生物數(shù)量適中（每小格約20-50個(gè)）。

(2)加樣：將菌懸液與生理鹽水按一定比例混合（如1:10），取混合液1-2滴滴加在計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室（大格）上，蓋上蓋玻片。避免氣泡進(jìn)入計(jì)數(shù)室。

(3)顯微鏡計(jì)數(shù)：將計(jì)數(shù)板置于顯微鏡下，選擇合適的放大倍數(shù)（通常100×或400×物鏡），在視野中計(jì)數(shù)指定區(qū)域內(nèi)的微生物個(gè)體數(shù)。

(4)計(jì)算：根據(jù)計(jì)數(shù)板的刻度、所用稀釋倍數(shù)以及顯微鏡放大倍數(shù)，計(jì)算單位體積或單位重量樣品中的微生物數(shù)量。常用公式：

CFU/mL(或CFU/g)=(countedcells/(totalsquarescounted×dilutionfactor×volumepersquare))×10^9

（注意：不同計(jì)數(shù)板刻度計(jì)算公式可能略有差異，需參照具體計(jì)數(shù)板說明）

***注意事項(xiàng)：**

*菌液濃度需適宜，過高或過低都會(huì)影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

*計(jì)數(shù)時(shí)需區(qū)分微生物個(gè)體和氣泡，避免漏計(jì)或誤計(jì)。

*對于不規(guī)則的微生物（如酵母菌），計(jì)數(shù)可能較困難，需經(jīng)驗(yàn)積累。

**（三）微生物鑒定（擴(kuò)寫）**

1.**形態(tài)學(xué)觀察：**

***菌落形態(tài)：**在顯微鏡下觀察培養(yǎng)物中的菌落形態(tài)，或挑取單個(gè)菌落進(jìn)行涂片。記錄菌落的形狀（圓形、不規(guī)則形等）、大小、邊緣（整齊、波狀、絲狀等）、顏色、隆起程度（扁平、凸起、臍狀等）、透明度（透明、半透明、不透明）、表面（光滑、粗糙、濕潤、干燥、粘液狀、絲絨狀等）。

***革蘭氏染色：**這是最基礎(chǔ)和重要的鑒別方法。通過染色區(qū)分細(xì)菌是革蘭氏陽性（G+）還是革蘭氏陰性（G-）。記錄染色結(jié)果。

***顯微結(jié)構(gòu)：**制備細(xì)菌涂片（革蘭氏染色后觀察或直接染色），在顯微鏡下觀察細(xì)菌的基本形態(tài)（球菌、桿菌、螺旋菌等）、大小、排列方式（單菌、對、鏈、簇等），以及特殊結(jié)構(gòu)（如芽孢、莢膜、鞭毛、菌毛等）。

***染色方法：**嚴(yán)格按SOP操作，包括初染、媒染、脫色、復(fù)染各步的時(shí)間和順序，以及酒精脫色時(shí)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2.**生化試驗(yàn)：**

***原理：**利用微生物代謝特定底物時(shí)產(chǎn)生的可測量產(chǎn)物（如酸、氣體、色素等），來鑒定其種類。常用方法包括：

***糖發(fā)酵試驗(yàn)：**檢測微生物對多種碳源（如葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等）的發(fā)酵能力。常用MUG（甲基紅-伏龍斯基）培養(yǎng)基檢測產(chǎn)氣。

***氧化酶試驗(yàn)：**檢測細(xì)胞色素C氧化酶活性。使用氧化酶試紙或培養(yǎng)基（如TTC培養(yǎng)基）。

***觸酶試驗(yàn)：**檢測過氧化氫酶活性。將菌液與3%過氧化氫溶液混合，觀察是否有氣泡產(chǎn)生。

***硫化氫試驗(yàn)：**檢測產(chǎn)生硫化氫的能力。使用鐵氰化鉀培養(yǎng)基（如TSI培養(yǎng)基或SIM培養(yǎng)基）。

***尿素酶試驗(yàn)：**檢測尿素分解能力。使用尿素培養(yǎng)基（如UR培養(yǎng)基）。

***甲基紅（MR）和伏龍斯基（VP）試驗(yàn)：**檢測糖代謝終產(chǎn)物（甲酸和乙酸）。

***操作步驟：**

(1)制備菌懸液：使用純培養(yǎng)的菌落，制備成新鮮、無顆粒的菌懸液（通常用0.9%無菌生理鹽水）。

(2)進(jìn)行試驗(yàn)：按照具體試驗(yàn)的SOP，將菌懸液加入相應(yīng)的生化鑒定培養(yǎng)基或試紙中。

(3)觀察結(jié)果：根據(jù)SOP規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和條件進(jìn)行培養(yǎng)，觀察并記錄結(jié)果（如顏色變化、氣體產(chǎn)生、沉淀形成等）。

(4)結(jié)果判讀：將所有試驗(yàn)結(jié)果與鑒定數(shù)據(jù)庫或標(biāo)準(zhǔn)手冊進(jìn)行比對，初步確定微生物種類。

***注意事項(xiàng)：**

*菌懸液需新鮮，濃度適宜。

*試驗(yàn)所用試劑和培養(yǎng)基需合格、新鮮。

*觀察結(jié)果需準(zhǔn)確，注意區(qū)分假陽性或假陰性。

*對于結(jié)果不確定的微生物，可能需要補(bǔ)充其他試驗(yàn)或進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。

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**五、質(zhì)量控制措施（擴(kuò)寫）**

**（一）內(nèi)部質(zhì)量控制（擴(kuò)寫）**

1.**空白對照試驗(yàn)：**

***目的：**檢測培養(yǎng)基、試劑、操作過程是否存在污染。

***操作：**

(1)**培養(yǎng)基空白：**無菌操作下，在無菌環(huán)境中打開無菌培養(yǎng)基包裝，不接種任何樣品或菌液，直接進(jìn)行培養(yǎng)。觀察是否有菌落生長。

(2)**操作空白：**在實(shí)際檢驗(yàn)過程中，不處理樣品，僅進(jìn)行接種、培養(yǎng)等后續(xù)操作。或使用無菌生理鹽水代替樣品進(jìn)行全程操作，培養(yǎng)后觀察結(jié)果。

***頻率：**每天進(jìn)行一次。培養(yǎng)基空白可在制備后立即檢查或在使用前檢查。

***結(jié)果判斷：**任何空白對照試驗(yàn)結(jié)果陽性，均表明存在污染風(fēng)險(xiǎn)，必須查找原因并糾正后方可繼續(xù)檢驗(yàn)。相關(guān)記錄需詳細(xì)保存。

2.**質(zhì)控菌株（QC菌株）的使用：**

***目的：**驗(yàn)證檢驗(yàn)方法、培養(yǎng)基、試劑的有效性和穩(wěn)定性，以及檢驗(yàn)人員操作的規(guī)范性。

***選擇：**選擇標(biāo)準(zhǔn)化的、性能穩(wěn)定的質(zhì)控菌株，如大腸桿菌（*Escherichiacoli*）、金黃色葡萄球菌（*Staphylococcusaureus*）、枯草芽孢桿菌（*Bacillussubtilis*）等，以及特定的指示菌或項(xiàng)目相關(guān)菌株。

***操作：**

(1)**陽性對照：**在日常檢驗(yàn)中，使用已知數(shù)量的質(zhì)控菌株，按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行接種和培養(yǎng)。比較培養(yǎng)結(jié)果與預(yù)期值（如菌落數(shù)、生長特征），評估方法的檢出能力或計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

(2)**穩(wěn)定性監(jiān)控：**定期（如每周或每月）使用質(zhì)控菌株進(jìn)行全流程檢驗(yàn)，監(jiān)控整個(gè)檢驗(yàn)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。

(3)**方法驗(yàn)證：**在開發(fā)或修改檢驗(yàn)方法時(shí)，使用質(zhì)控菌株驗(yàn)證新方法的準(zhǔn)確性和可靠性。

***記錄：**詳細(xì)記錄質(zhì)控菌株的來源、保藏條件、使用次數(shù)、檢驗(yàn)結(jié)果、與預(yù)期值的比較、以及任何偏差分析和糾正措施。

3.**質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的記錄與趨勢分析：**

***記錄：**將所有內(nèi)部質(zhì)控（空白對照、質(zhì)控菌株）的結(jié)果，連同檢驗(yàn)日期、檢驗(yàn)項(xiàng)目、檢驗(yàn)人員等信息，統(tǒng)一記錄在質(zhì)量控制日志中。

***趨勢分析：**定期（如每月）回顧質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，繪制趨勢圖（如折線圖），直觀展示檢驗(yàn)系統(tǒng)長期的表現(xiàn)。關(guān)注數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性、漂移趨勢、異常波動(dòng)等。

***異常處理：**當(dāng)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)