CCSX04T/QAS1T/QAS143—2025青稞苗和皮大麥苗及其制品中總黃酮含量的測(cè)定分光光度法本文件描述了青稞苗和皮大麥苗及其制品中總黃酮含量測(cè)定的分光光度法。本文件適用于青稞苗和皮大麥苗及其固體制品中含量不低于0.0060%以及液體制品中含量不低于0.00060%的總黃酮含量測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1青稞苗hullessbarleyseedling禾本科大麥屬植物青稞幼苗，包括青稞嫩莖葉。3.2皮大麥苗lemmabarleyseedling禾本科大麥屬植物皮大麥幼苗，包括皮大麥嫩莖葉。4原理黃酮在堿性介質(zhì)中紫外可見(jiàn)光譜紅移，在一定濃度范圍內(nèi)，其吸光度與總黃酮的含量成正比，符合朗伯比爾定律。試樣經(jīng)乙醇溶液提取，以三乙胺為位移試劑進(jìn)行顯色，在398nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，與皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，對(duì)試樣中總黃酮含量進(jìn)行定量測(cè)定。5試劑和材料5.1試劑5.1.1無(wú)水乙醇（C2H5OH）：分析純。5.1.2三乙胺（C6H15N）：分析純。5.1.3實(shí)驗(yàn)用水：應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水及以上要求。5.2試劑配制5.2.1乙醇溶液（60%）：取無(wú)水乙醇（5.1.1）600mL，加水（5.1.3）稀釋至1000mL，搖勻。T/QAS143—202525.2.2三乙胺溶液（1取三乙胺（5.1.2）1mL，加水（5.1.3）稀釋至100mL，搖勻。5.3標(biāo)準(zhǔn)品皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)品（C27H30O15，CAS號(hào)：20310-89-8）：純度≥98.0%。5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.1皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（500μg/mL稱取0.0125g（精確至0.00001g）皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)品（5.3至25mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇（5.1.1）超聲至溶解，并稀釋至刻度，搖勻，貯存于密閉的棕色玻璃瓶中，-18℃下冷凍保存，有效期12個(gè)月。5.4.2皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)中間液（100μg/mL精密移取2.00mL皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.1）于10mL容量瓶中，用60%乙醇溶液（5.2.1）稀釋至刻度，搖勻，貯存于密閉的棕色玻璃瓶中，2~8℃下冷藏保存，有效期3個(gè)月。6儀器和設(shè)備6.1分析天平：感量0.001g、0.0001g和0.00001g。6.2紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：采用1cm比色皿。6.3水浴鍋：帶回流裝置。6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥10000r/min。6.5粉碎機(jī)：可將樣品粉碎并過(guò)0.425mm（40目）篩。6.6不銹鋼金屬篩：孔徑0.425mm。6.7電熱鼓風(fēng)干燥箱：溫度40℃~300℃。7分析步驟7.1試樣制備7.1.1青稞苗和皮大麥苗將青稞苗和皮大麥苗置60℃電熱鼓風(fēng)干燥箱（6.7）中烘干至恒重，記錄水分含量。取有代表性烘干試樣20g～50g，粉碎機(jī)（6.5）粉碎后，過(guò)不銹鋼金屬篩（6.6），置干燥器中常溫密封避光保存，待用。7.1.2青稞苗和皮大麥苗固體制品取有代表性試樣，過(guò)不銹鋼金屬篩（6.6必要時(shí)經(jīng)粉碎后再過(guò)篩。對(duì)于粘性高無(wú)法過(guò)篩的樣品，可不過(guò)篩，但應(yīng)保證樣品粉碎均勻且滿足提取要求。常溫密封避光保存。7.1.3青稞苗和皮大麥苗液體制品液體制品2℃~8℃冷藏保存，或按照產(chǎn)品要求保存。檢測(cè)前取出放至室溫，通過(guò)反復(fù)振搖或顛倒容器使試樣充分混合均勻，待進(jìn)行液體試樣提取。7.2試樣提取T/QAS143—202537.2.1固體試樣提取稱取固體試樣0.5g（精確至0.0001g置于150mL磨口三角瓶中，準(zhǔn)確加入30mL60%乙醇溶液（5.2.1），稱定質(zhì)量，90℃回流45min，冷卻至室溫，用60%乙醇溶液（5.2.1）補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，8000r/min離心5min，取上清液待用。7.2.2液體試樣提取稱取混勻的液體試樣10g（精確至0.001g置于50mL容量瓶中，加入15mL無(wú)水乙醇（5.1.1超聲30min，冷卻至室溫，用無(wú)水乙醇（5.1.1）稀釋至刻度，搖勻，10000r/min離心5min，取上清液待用。7.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制取100μg/mL的皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.4.2）0、0.05mL、0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL于25mL具塞試管中，加60%乙醇溶液（5.2.1）補(bǔ)至2.5mL，搖勻，加1%三乙胺溶液（5.2.2）2.5mL,標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，以濃度為0的工作液作為空白參比，在398nm處測(cè)定吸光度，以皂草黃苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。7.4測(cè)定分別移取相同體積的2份樣品提取液（7.2）適量（對(duì)于高含量的樣品，可用60%乙醇溶液（5.2.1）適當(dāng)稀釋后再移取），置于25mL具塞試管中，一份用作樣品空白試驗(yàn)，加60%乙醇溶液（5.2.1）補(bǔ)至2.5mL，搖勻，再加2.5mL水（5.1.3），搖勻，放置30min；另一份作為樣品測(cè)試液，加入60%乙醇溶液（5.2.1）補(bǔ)至2.5mL，搖勻，再加1%三乙胺溶液（5.2.2）2.5mL，搖勻，放置30min，以樣品空白作為參比，于398nm處測(cè)定吸光度。8數(shù)據(jù)處理試樣中總黃酮含量按公式（1）計(jì)算：X=×N×10-4……（1）式中：X——試樣中總黃酮的含量（以皂草黃苷計(jì)單位為克每一百克（g/100gC——標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣液中總黃酮的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mLV0——試樣定容體積，單位為毫升（mLV1——用來(lái)顯色移取的試樣溶液體積，單位為毫升（mLm——稱取試樣的質(zhì)量，單位