ICS71.100.10Y42DB37Determinationofcantharidinincosmetics—LC-MS/MSmethod山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB37/T3031—2017本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省化妝品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院、山東省食品藥品檢驗研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：周莉莉、崔玉花、高勇、李麗、張卉、祝建華、鄒惠玲、許士明。DB37/T3031—20171化妝品中斑蝥素的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化妝品中斑蝥素的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于化妝品中斑蝥素的檢測。本標(biāo)準(zhǔn)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法的檢出限為0.05g/kg。2原理化妝品中的斑蝥素用甲醇超聲提取，離心過濾，經(jīng)正己烷脫脂，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定和確證，外標(biāo)法定量。3試劑與材料除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。3.2正己烷。3.3斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)品（cantharidin，CAS號56-25-7，C10H12O4）：純度≥99%。3.4斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取適量斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇（4.1）溶解并定容至刻度，配制成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，冰箱冷藏保存。3.5標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：將標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇-水（1+9）溶液分別稀釋為0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。冰箱冷藏保存。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。4.2分析天平：感量分別為0.0001g和0.01g。4.3超聲波清洗器。4.4漩渦混合器。4.5離心機，大于6000r/min。4.6微孔濾膜：0.22μm有機相過濾膜。5測定步驟5.1樣品處理稱取化妝品試樣1.0g（精確至0.01g）于30mL離心管中，加入5mL甲醇旋渦1分鐘，超聲提取10min，6000r/min離心5分鐘后取上層清液。殘渣加入5mL甲醇重復(fù)提取一次，合并上清液。加入4mL正己烷，振蕩萃取20分鐘后棄去正己烷層，從下層清液中取1.0mL于10mL刻度管中，用水定容至10mL刻度，旋DB37/T3031—20172渦混勻，過微孔濾膜（5.6），供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。對斑蝥素含量較高的樣品，適當(dāng)稀釋后進(jìn)樣。5.2測定5.2.1液相色譜參考條件以下為液相參考條件：a)色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm（i.d.1.7μm，或相當(dāng)者；b)流動相：甲醇-水，梯度洗脫程序見表1；表1流動相梯度洗脫程序01350608c)流速：0.3mL/min；e)進(jìn)樣量：5μL。5.2.2質(zhì)譜參考條件以下為質(zhì)譜參考條件：a)離子源：電噴霧離子源；b)掃描方式：負(fù)離子掃描；c)毛細(xì)管電壓：3.0kV；d)錐孔電壓：35V；e)離子源溫度：110℃;f)脫溶劑氣溫度：450℃;g)脫溶劑氣（N2）流量：800L/h；h)錐孔氣（N2）流量：50L/h；i)碰撞室壓力：3.0×10-3mbar；j)掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；m/z195/151（定量離子，碰撞能量12eV）、195/122（碰撞5.2.3液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定根據(jù)試樣中被測樣液的含量情況，選取斑蝥素的響應(yīng)值在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)的濃度進(jìn)行測定，如超出儀器線性響應(yīng)范圍應(yīng)進(jìn)行稀釋。在上述色譜條件下斑蝥素的參考保留時間為4.10min，標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖參見附錄A中的圖A.1。5.2.4液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜確證3按照按照液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，樣品中斑蝥素的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中斑蝥素的保留時間偏差在±2.5%之內(nèi)。定量測定時采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定。定性時應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對豐度一致，相對豐度允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在斑蝥素。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差>50>20～50>10～206結(jié)果計算和表述試樣中斑蝥素的含量由色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按式（1）計算獲得：Y——試樣中斑蝥素的含量，單位為克每千克（g/kgA——樣液中斑蝥素的峰面積；c——標(biāo)準(zhǔn)溶液中斑蝥素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；V——試樣溶液最終定容的體積，單位為毫升（mL）；As——標(biāo)準(zhǔn)溶液中斑蝥素的峰面積；m——試樣質(zhì)量，單位為克（gf——稀釋倍數(shù)。7方法定量限本方法斑蝥素的檢出限為0.05g/kg。在添加濃度0.05g/kg～5g/kg范圍內(nèi)，回收率在85%～105%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。9允許差在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。DB37/T3031—20174（資料性附錄）斑蝥素標(biāo)準(zhǔn)品多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖MRMof2ChannelsES-195>151(cantharidin)5.28e401.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.50MRMof2Channe