ICS11.220CCSB4154IDB54/T0565—2026 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4流行特點(diǎn) 5樣品的采集、保存和運(yùn)輸 6診斷 7預(yù)防 8檢疫監(jiān)督 附錄A（規(guī)范性）壓片鏡檢法 附錄B（資料性）住肉孢子蟲形態(tài) 附錄C（規(guī)范性）住肉孢子蟲PCR實(shí)驗(yàn)方法 DB54/T0565—2026本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所。本文件主要起草人：單曲拉姆、米榮升、扎西央宗、索朗曲吉、趙霞玲、王冬經(jīng)、馬弘財(cái)、任越。DB54/T0565—20261牛羊住肉孢子蟲病防控技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了牛羊住肉孢子蟲病的流行特點(diǎn)、樣品采集、保存和運(yùn)輸、診斷、預(yù)防、檢疫監(jiān)督及人員防護(hù)措施。本文件適用于牛羊住肉孢子蟲病的防控工作。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB16567種畜禽調(diào)運(yùn)檢疫技術(shù)規(guī)范GB7959糞便無害化衛(wèi)生要求GB/T36195畜禽糞便無害化處理技術(shù)規(guī)范NY/T3961畜禽屠宰加工人員防護(hù)技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。住肉孢子蟲病住肉孢子蟲侵入中間宿主的肌肉和終末宿主腸道引起的一種危害嚴(yán)重的人獸共患食源性寄生蟲病。4流行特點(diǎn)宿主特異性牛羊是住肉孢子蟲的中間宿主，犬、貓、狐貍等肉食動(dòng)物以及人類是終末宿主。傳播途徑中間宿主食入被終末宿主糞便污染的飼料或水，終末宿主通過捕食感染的中間宿主而感染。流行季節(jié)發(fā)病多為秋、冬季。5樣品的采集、保存和運(yùn)輸2采集50g～80g新鮮牛羊肌肉，記錄樣品采集地點(diǎn)、日期、牲畜種類、年齡、采集部位及病史等內(nèi)容。樣品低溫保存送回實(shí)驗(yàn)室，短期在2℃~8℃保存，長期在-20℃及以下保存或浸泡于福爾馬林溶液狀。肌肉樣品壓片鏡檢法具體操作見附錄A,牛羊住3圈舍內(nèi)嚴(yán)禁犬貓，加強(qiáng)對(duì)鼠的控制；嚴(yán)防犬、牛羊出售或流動(dòng)之前，養(yǎng)殖場/戶應(yīng)向當(dāng)?shù)貏?dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)申報(bào)檢疫，按畜禽產(chǎn)地檢疫取得動(dòng)物動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)的檢疫人員對(duì)待宰牛羊進(jìn)行查證驗(yàn)物，合DB54/T0565—20264（規(guī)范性）壓片鏡檢法A.1主要儀器設(shè)備外科手術(shù)剪、不銹鋼鑷子、不銹鋼、鋁合金或塑料肉樣盤,載玻片及生物顯微鏡。A.2試劑甘油。A.3操作方法A.3.1目鏡剔除脂肪、結(jié)締組織及肌膜，暴露出肌肉，在光線下觀察肌纖維間是否含灰白/乳白色紡錘形、圓柱形等包囊。A.3.2壓片鏡檢取疑似包囊或隨機(jī)取剪肉樣，順肌纖維剪鉛筆芯大小條，每片4條～6條，加甘油后壓至半透明，顯微鏡下全片檢查。A.4結(jié)果判定少數(shù)住肉孢子蟲包囊肉眼可見，其形態(tài)大小各異；多數(shù)則需鏡檢，若鏡檢發(fā)現(xiàn)紡錘形、卵圓形包囊，判定為陽性，否則判定為陰性。5(資料性)住肉孢子蟲形態(tài)圖B.1巨型住肉孢子蟲圖B.2顯微鏡下住肉孢子蟲圖B.3不同種類住肉孢子蟲(鏡檢40O×)DB54/T0565—20266（規(guī)范性）住肉孢子蟲PCR實(shí)驗(yàn)方法C.1主要儀器高速離心機(jī)、PCR基因擴(kuò)增儀、微量可調(diào)移液器、核酸電泳儀及凝膠成像分析系統(tǒng)。C.2主要試劑2×PCRMix、DL2000DNAMarker、Ts-GelRed、核酸染料及瓊脂糖。C.3操作方法C.3.1PCR擴(kuò)增采用PCR方法擴(kuò)增住肉孢子蟲基因部分序列，PCR采用50μL反應(yīng)體系:DNA模板4μL，2×PCRMix25μL，上下游引物各2μL，加ddH2O補(bǔ)足至50.0μL。PCR循環(huán)參數(shù)：95℃預(yù)變性5min;94℃變性15s,Tm退火15s,72℃延伸1kb/s,35個(gè)循環(huán);72℃延伸10min。引物序列信息見表C.1。C.3.2瓊脂糖凝膠電泳用1XTAE緩沖溶液配制1.0%瓊脂糖凝膠,每100mL凝膠中加入10μL核酸染料。取PCR產(chǎn)物5μL,在1.0%瓊脂糖凝膠中以150V凝膠的電壓下進(jìn)行電泳,采用凝膠成像分析系統(tǒng)觀察電泳結(jié)果并拍照。C.4結(jié)果判定結(jié)果判定陽性:被檢樣品擴(kuò)增產(chǎn)物泳道出現(xiàn)目