生物3D打印老年肝臟組織支架的構建策略演講人01生物3D打印老年肝臟組織支架的構建策略02引言：老年肝臟疾病現(xiàn)狀與組織支架構建的迫切需求03老年肝臟組織的病理生理特征與支架構建的特殊需求04生物3D打印老年肝臟組織支架的關鍵材料選擇策略05生物3D打印老年肝臟組織支架的結構設計策略06生物3D打印老年肝臟組織支架的細胞負載策略07生物3D打印老年肝臟組織支架的體外成熟與體內(nèi)整合策略08總結與展望目錄01生物3D打印老年肝臟組織支架的構建策略02引言：老年肝臟疾病現(xiàn)狀與組織支架構建的迫切需求引言：老年肝臟疾病現(xiàn)狀與組織支架構建的迫切需求隨著全球人口老齡化進程加速，老年肝臟疾病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，60歲以上人群中慢性肝?。òǜ卫w維化、肝硬化、肝癌等）的患病率已超過15%，且因老年患者肝再生能力下降、合并癥多，傳統(tǒng)肝移植手術面臨供體短缺、術后排斥反應等嚴峻挑戰(zhàn)。在此背景下，組織工程技術，尤其是生物3D打印技術，為老年肝臟功能修復提供了全新思路——通過構建仿生肝臟組織支架，搭載種子細胞體外構建功能性肝組織，或直接植入體內(nèi)引導組織再生。然而，老年肝臟的病理生理特性顯著區(qū)別于年輕肝臟：其細胞外基質（ECM）成分異常沉積（如Ⅰ型膠原過度表達）、肝小葉結構紊亂、竇狀內(nèi)皮細胞（SECs）fenestrae減少、肝細胞（Hepatocytes）功能減退（如細胞色素P450酶活性下降），這些變化使得“通用型”肝臟支架難以滿足老年組織的修復需求。引言：老年肝臟疾病現(xiàn)狀與組織支架構建的迫切需求因此，基于老年肝臟特異性病理特征，開發(fā)具有生物相容性、仿生結構、生物活性的3D打印支架，已成為組織工程與再生醫(yī)學領域的前沿熱點。本文將從材料選擇、結構設計、細胞負載、體外成熟及體內(nèi)整合五個維度，系統(tǒng)闡述生物3D打印老年肝臟組織支架的構建策略，以期為老年肝病的臨床轉化提供理論依據(jù)與技術支撐。03老年肝臟組織的病理生理特征與支架構建的特殊需求1老年肝臟的結構與功能變化老年肝臟的退行性改變主要體現(xiàn)在宏觀與微觀兩個層面。宏觀上，肝臟體積縮?。?0歲后較30歲減少約26%），包膜增厚，質地變硬；微觀上，肝小葉結構紊亂，中央靜脈周圍纖維化加重，肝索排列不規(guī)則，竇狀間隙因SECsfenestrae直徑減?。◤哪贻p肝臟的100-150nm縮小至老年期的50-100nm）而變窄，導致血流阻力增加、物質交換效率下降。功能上，老年肝細胞的合成（如白蛋白）、代謝（如藥物解毒、糖原儲存）與解毒功能顯著減退，同時肝星狀細胞（HSCs）被持續(xù)激活，轉化為肌成纖維細胞，過度分泌ECM（如膠原蛋白、纖連蛋白），形成“纖維化微環(huán)境”，進一步抑制肝細胞再生。2老年肝臟支架構建的核心需求針對上述特征，老年肝臟組織支架需滿足以下特殊需求：-力學適配性：老年肝臟硬度增加（彈性模量從年輕肝臟的2-3kPa升至老年期的5-8kPa），支架需匹配這一力學環(huán)境，避免因“力學不匹配”導致細胞變形或功能抑制；-生物信號響應性：需模擬年輕肝臟ECM的組成與結構（如富含層粘連蛋白、Ⅳ型膠原），通過生物活性因子（如肝細胞生長因子HGF、成纖維細胞生長因子FGF）激活肝細胞再生信號通路；-結構仿生性：需重建肝小葉單元的三維結構（中央靜脈、肝索、竇狀隙的空間排布），并為SECs、HSCs等非實質細胞提供定植位點，恢復肝臟的“細胞-細胞”“細胞-基質”交互網(wǎng)絡；2老年肝臟支架構建的核心需求-動態(tài)調(diào)控能力：老年組織再生能力弱，支架需具備動態(tài)響應性（如pH/酶響應性降解、生長因子緩釋），在修復初期提供支撐，后期逐步降解為新生組織騰空間。04生物3D打印老年肝臟組織支架的關鍵材料選擇策略生物3D打印老年肝臟組織支架的關鍵材料選擇策略材料是支架構建的“物質基礎”，其生物相容性、可打印性、降解性與生物活性直接決定支架的功能。針對老年肝臟的特殊需求，材料選擇需兼顧“仿生性”與“功能性”，以下從天然高分子材料、合成高分子材料、生物活性因子及脫細胞ECM材料四個維度展開闡述。1天然高分子材料：模擬ECM的天然骨架天然高分子材料因其良好的細胞親和性與生物降解性，成為老年肝臟支架的首選，主要包括明膠、透明質酸（HA）、殼聚糖及膠原蛋白。1天然高分子材料：模擬ECM的天然骨架1.1明膠（Gelatin）明膠是膠原的降解產(chǎn)物，保留了精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列，可促進細胞黏附。但天然明膠水溶性高、力學強度低，需通過化學改性（如甲基丙烯?；髂zatinMethacryloyl,GelMA）提升穩(wěn)定性。GelMA的交聯(lián)密度可通過紫外光照時間調(diào)控，從而匹配老年肝臟的力學模量（如5-8kPa）。此外，GelMA的親水性有利于營養(yǎng)物質擴散，適合老年肝臟低代謝狀態(tài)下的物質交換需求。3.1.2透明質酸（HyaluronicAcid,HA）HA是ECM的重要成分，在年輕肝臟中含量豐富（約占ECM干重的0.5%），但老年肝臟中HA因透明質酸酶（HYAL）活性下降而積累，導致組織硬度增加。為此，需選擇低分子量HA（<50kDa）通過氧化交聯(lián)構建支架，其降解速率可通過調(diào)控氧化程度匹配老年ECM的更新周期（約60-90天）。同時，HA可通過修飾（如硫酸化HA）模擬肝竇基底膜的負電荷特性，促進SECs黏附與fenestrae維持。1天然高分子材料：模擬ECM的天然骨架1.3膠原蛋白（Collagen）膠原蛋白（尤其是Ⅰ型、Ⅳ型）是肝臟ECM的主要結構蛋白，老年肝臟中Ⅰ型膠原占比從年輕期的60%升至80%，而具有生理功能的Ⅳ型膠原（基底膜核心成分）減少。因此，支架材料需以Ⅳ型膠原為主要成分，并通過“共混打印”（如Ⅳ型膠原與GelMA共混）提升力學強度。研究證實，Ⅳ型膠原濃度≥3mg/mL時，可顯著促進老年肝細胞的極化表達（如膽管側膜標志物MDR1、竇狀側膜標志物OATP1B1）。2合成高分子材料：調(diào)控力學與降解性能天然材料雖生物相容性優(yōu)異，但力學強度與降解可控性不足，需與合成高分子材料復合。3.2.1聚己內(nèi)酯（Polycaprolactone,PCL）PCL是可降解聚酯，具有優(yōu)異的力學性能（拉伸強度20-40MPa）、降解周期長（1-2年），適合作為老年肝臟支架的“強化相”。但PCL疏水性強、細胞親和性差，需通過表面改性（如堿水解、接枝RGD肽）或與天然材料共混（如PCL/GelMA質量比30:70）提升生物相容性。此外，PCL的慢速降解特性可為老年肝臟長期修復提供力學支撐，避免因支架過早塌陷導致組織再生失敗。3.2.2聚乳酸-羥基乙酸共聚物（Poly(lactic-co-glycoli2合成高分子材料：調(diào)控力學與降解性能cacid),PLGA）PLGA的降解速率可通過乳酸（LA）與羥基乙酸（GA）比例調(diào)控（如75:25的PLGA降解周期約1-3個月），匹配老年ECM的更新節(jié)奏。但其降解產(chǎn)物（乳酸、GA）呈酸性，可能導致局部pH下降，影響細胞活性。為此，需在PLGA中添加堿性物質（如β-磷酸三鈣，β-TCP）中和酸性，或通過“核殼結構”設計（PLGA為核、GelMA為殼）隔離酸性產(chǎn)物。3生物活性因子：激活老年肝臟再生信號老年肝細胞的再生能力弱，需通過支架搭載生物活性因子，激活Wnt/β-catenin、HGF/c-Met等再生通路。3生物活性因子：激活老年肝臟再生信號3.1肝細胞生長因子（HGF）HGF是肝再生的關鍵因子，可促進肝細胞增殖與基質金屬蛋白酶（MMPs）分泌，降解過度沉積的ECM。但HGF半衰期短（<10min），需通過“載體包埋”實現(xiàn)緩釋：如將HGF負載于殼聚糖納米粒（粒徑100-200nm），再混入打印墨水，利用殼聚糖的陽離子性與ECM中帶負電的糖蛋白結合，實現(xiàn)HGF的局部持續(xù)釋放（釋放周期>14天），有效激活老年肝細胞的DNA合成能力。3生物活性因子：激活老年肝臟再生信號3.2成纖維細胞生長因子-21（FGF-21）FGF-21特異性作用于肝細胞，可改善老年肝臟的胰島素抵抗與脂代謝紊亂，同時抑制HSCs活化。研究表明，將FGF-21與熱敏性水凝膠（如泊洛沙姆407）復合，通過3D打印構建“溫度響應型支架”，在37℃體溫下快速凝膠化，實現(xiàn)FGF-21的原位固定與長效釋放（>21天），顯著提升老年肝細胞的糖原合成能力。4脫細胞ECM材料：重建老年肝臟的微環(huán)境脫細胞ECM（dECM）保留了天然ECM的成分（膠原蛋白、糖胺聚糖、生長因子）與結構，是“仿生支架”的理想材料。4脫細胞ECM材料：重建老年肝臟的微環(huán)境4.1老年來源dECM的制備與優(yōu)勢傳統(tǒng)dECM多來源于年輕動物（如豬、大鼠），但老年肝臟dECM更能模擬老年組織的病理微環(huán)境（如高膠原沉積、低HA含量）。通過“TritonX-100/SDS聯(lián)合脫細胞法”處理老年大鼠肝臟，可徹底去除細胞成分while保留ECM骨架（膠原蛋白保留率>85%，生長因子保留率>70%）。將老年肝臟dECM凍干后研磨成粉末，與GelMA混合（質量比20:80）打印，可顯著促進老年肝細胞的黏附（黏附率提升40%）與功能（白蛋白分泌量提升2.3倍）。4脫細胞ECM材料：重建老年肝臟的微環(huán)境4.2種屬特異性dECM的考量臨床轉化需避免異種免疫排斥，因此人源老年肝臟dECM更具優(yōu)勢。但目前人源老年肝臟組織獲取困難，可通過“基因工程改造”構建“人源化dECM”：如將小鼠成纖維細胞用人老年肝細胞條件培養(yǎng)基誘導，提取其ECM，通過3D生物打印構建“人源化微環(huán)境”，為后續(xù)臨床應用提供過渡方案。05生物3D打印老年肝臟組織支架的結構設計策略生物3D打印老年肝臟組織支架的結構設計策略老年肝臟的結構復雜性（肝小葉單元、血管網(wǎng)絡、膽管系統(tǒng)）對支架的3D結構設計提出了極高要求。需通過“宏觀-微觀-多尺度”仿生設計，重建肝臟的“三維空間架構”，為細胞定植與功能發(fā)揮提供物理支撐。1肝小葉單元的仿生構建：從“結構模擬”到“功能重建”肝小葉是肝臟的基本功能單位，呈六邊形棱柱體，中心為中央靜脈（CV），周圍以放射狀排列肝索，肝索間為竇狀隙（Disse間隙）。老年肝小葉的CV壁增厚、肝索斷裂，需通過3D打印精準重建這一結構。1肝小葉單元的仿生構建：從“結構模擬”到“功能重建”1.1中央靜脈與門管區(qū)的空間定位基于Micro-CT成像的老年肝臟數(shù)據(jù)，構建“中央靜脈-肝索-門管區(qū)”的三維模型，通過“犧牲墨水打印技術”構建中空管道：以聚乙二醇（PEG）為犧牲墨水打印中央靜脈通道（直徑50-100μm），周圍包裹GelMA/膠原蛋白墨水，經(jīng)交聯(lián)后洗去PEG，形成中央靜脈腔體。同理，在肝小葉邊緣打印門管區(qū)結構（包含肝動脈、門靜脈、膽管管腔，直徑30-50μm），模擬肝臟的“流入-流出”血管系統(tǒng)。1肝小葉單元的仿生構建：從“結構模擬”到“功能重建”1.2肝索的梯度排布與孔隙優(yōu)化肝索由肝細胞板層疊而成，板間距離在年輕肝臟為20-30μm，而老年肝臟因ECM沉積增至40-60μm，需通過“梯度打印”調(diào)整肝索間距：靠近中央靜脈區(qū)域（肝細胞代謝活躍區(qū)）間距設為20μm，靠近門管區(qū)區(qū)域（物質交換區(qū)）間距設為40μm，以匹配老年肝臟的功能分區(qū)。同時，肝索間孔隙率需控制在60%-70%，既保證細胞營養(yǎng)供應，又避免過度疏松導致支架塌陷。2竇狀隙結構的仿生設計：恢復物質交換界面竇狀隙是肝細胞與血液物質交換的關鍵場所，其內(nèi)襯SECsfenestrae（直徑100-150nm）與基底膜（Ⅳ型膠原、層粘連蛋白構成）。老年竇狀隙因SECsfenestrae減少、基底膜增厚（厚度從年輕期的50-100nm增至200-300nm），導致物質交換效率下降50%以上。2竇狀隙結構的仿生設計：恢復物質交換界面2.1SECsfenestrae的納米級結構構建通過“靜電紡絲-3D打印復合技術”構建仿生基底膜：以PLGA為原料，通過靜電紡絲制備納米纖維（直徑200-300nm，模擬基底膜膠原纖維），再通過3D打印在納米纖維表面“雕刻”直徑100-150nm的微孔（利用飛秒激光加工技術），模擬SECsfenestrae。研究表明，這種“納米纖維+微孔”結構可促進SECs黏附與fenestrae形成，老年SECs的fenestrae密度提升至年輕水平的80%。2竇狀隙結構的仿生設計：恢復物質交換界面2.2竇狀隙的流體動力學模擬老年肝臟竇狀隙血流速度減慢（從年輕期的5-10cm/s降至2-5cm/s），易形成血栓。需通過計算流體力學（CFD）模擬優(yōu)化竇狀隙結構：將竇狀隙設計為“螺旋狀通道”（而非直線型），延長血流路徑，同時通過“支流腔室”（直徑50-100μm）促進血流混合，提高物質交換效率。打印時可采用“雙噴頭技術”，主噴頭打印GelMA/膠原蛋白主體結構，輔噴頭打印“犧牲墨水”構建支流腔體，洗去犧牲墨水后形成多孔結構。3多尺度孔隙網(wǎng)絡的構建：兼顧細胞定植與營養(yǎng)擴散老年肝臟ECM過度沉積導致孔隙率降低（從年輕期的70%-80%降至40%-50%），影響細胞遷移與營養(yǎng)擴散。支架需構建“宏觀（100-500μm）-微觀（10-100μm）-納米（<1μm）”多級孔隙網(wǎng)絡。3多尺度孔隙網(wǎng)絡的構建：兼顧細胞定植與營養(yǎng)擴散3.1宏觀孔隙：促進細胞遷移與血管化通過“氣體發(fā)泡法”或“致孔劑致孔法”構建宏觀孔隙：在打印墨水中添加NaCl顆粒（粒徑200-400μm），打印后溶解NaCl，形成相互連通的宏觀孔隙（孔隙率60%-70%）。這種大孔結構有利于種子細胞（如肝祖細胞）的均勻分布與遷移，同時為后續(xù)血管內(nèi)皮細胞（ECs）長入提供通道，加速支架血管化。3多尺度孔隙網(wǎng)絡的構建：兼顧細胞定植與營養(yǎng)擴散3.2微觀/納米孔隙：模擬ECM微觀結構通過“低溫3D打印”技術構建微觀孔隙：將打印墨水（如GelMA/HA）在-20℃下冷凍，形成冰晶模板，經(jīng)冷凍干燥后去除冰晶，留下多孔結構（孔徑10-50μm）。這種孔隙結構可模擬ECM的纖維網(wǎng)絡，促進細胞偽足延伸與細胞外基質分泌。同時，通過“靜電紡絲納米纖維”覆蓋宏觀孔隙表面（纖維直徑500-1000nm），構建“宏觀孔道+納米纖維”復合結構，進一步提升細胞黏附效率。06生物3D打印老年肝臟組織支架的細胞負載策略生物3D打印老年肝臟組織支架的細胞負載策略支架是“靜態(tài)骨架”，細胞是“功能核心”。老年肝臟細胞的特殊性（增殖能力弱、功能減退）對細胞負載策略提出了更高要求，需從種子細胞選擇、細胞-基質交互、共培養(yǎng)體系三方面優(yōu)化。1種子細胞的選擇：兼顧“功能性”與“安全性”老年肝臟修復需具備“合成、代謝、解毒”功能的肝細胞，同時需非實質細胞（如SECs、HSCs）構建微環(huán)境。1種子細胞的選擇：兼顧“功能性”與“安全性”1.1原代老年肝細胞：功能保留但增殖能力弱直接從老年患者肝穿刺獲取原代老年肝細胞，雖保留了特異性功能（如細胞色素P450酶活性），但體外擴增困難（傳代次數(shù)<3次），且凋亡率高（>60%）。為此，需通過“3D微載體培養(yǎng)”提升存活率：將肝細胞負載于明膠微載體（粒徑150-200μm）上，與支架共培養(yǎng)，微載體的三維結構可減少細胞凋亡（凋亡率降至30%），同時促進細胞極化表達（如膽管側膜標志物CK19、竇狀側膜標志物ASGPR1）。5.1.2誘導多能干細胞（iPSCs）來源肝細胞樣細胞（HLCs）iPSCs可通過重編程老年患者體細胞（如皮膚成纖維細胞）獲得，定向分化為HLCs，具備無限增殖能力與肝細胞功能。但iPSC-HLCs的成熟度低（僅相當于胎兒肝細胞），需通過“3D培養(yǎng)+力學刺激”促進成熟：將iPSC-HLCs與支架共培養(yǎng)，同時施加“循環(huán)力學刺激”（如0.5Hz、10%應變模擬肝臟脈動血流），可提升其白蛋白分泌量（提升2.1倍）與尿素合成能力（提升1.8倍），接近原代老年肝細胞水平。1種子細胞的選擇：兼顧“功能性”與“安全性”1.3肝祖細胞（HPCs）：再生潛能強的“后備力量”HPCs位于Hering管內(nèi)，具有雙向分化能力（可分化為肝細胞或膽管細胞），且在老年肝臟中仍保留一定增殖能力。通過“CD133+磁珠分選”從老年肝臟組織中獲取HPCs，負載于支架后，在“HGF+FGF-4”誘導下可分化為成熟肝細胞，分化效率達70%以上，且增殖能力顯著優(yōu)于原代肝細胞（傳代次數(shù)>5次）。2細胞-基質交互：優(yōu)化細胞黏附與功能表達老年ECM成分改變（如RGD序列暴露減少）導致細胞黏附力下降，需通過基質修飾增強細胞-基質交互。2細胞-基質交互：優(yōu)化細胞黏附與功能表達2.1ECM蛋白包被：提升細胞黏附效率在打印支架表面包被層粘連蛋白（LN，濃度10μg/cm2），可特異性結合肝細胞表面的整合素α6β1，顯著提升細胞黏附率（從40%升至85%）。同時，LN可促進肝細胞極化表達，形成“膽管側-竇狀側”功能極性，恢復肝臟的物質轉運能力。2細胞-基質交互：優(yōu)化細胞黏附與功能表達2.2生物活性因子共價偶聯(lián)：長效激活細胞功能將HGF通過“碳二亞胺（EDC/NHS）法”共價偶聯(lián)于支架材料（如GelMA）的羧基上，實現(xiàn)HGF的原固定與緩釋（釋放周期>21天）。這種“定點釋放”方式可避免HGF的快速擴散，持續(xù)激活肝細胞的c-Met受體，促進其增殖與功能恢復（白蛋白分泌量提升3.2倍）。3共培養(yǎng)體系：模擬肝臟微環(huán)境的“細胞對話”肝臟是“實質細胞+非實質細胞”的協(xié)同功能體，單一細胞難以模擬生理功能，需構建多細胞共培養(yǎng)體系。3共培養(yǎng)體系：模擬肝臟微環(huán)境的“細胞對話”3.1肝細胞-SECs共培養(yǎng)：重建物質交換界面將肝細胞與SECs以“肝細胞:SECs=4:1”的比例共負載于支架，SECs優(yōu)先定植于竇狀隙結構，形成“內(nèi)皮屏障”，同時分泌一氧化氮（NO），抑制HSCs活化。研究表明，共培養(yǎng)體系中肝細胞的白蛋白合成量較單獨培養(yǎng)提升1.8倍，細胞色素P450酶活性（CYP3A4）提升2.1倍，更接近生理狀態(tài)。3共培養(yǎng)體系：模擬肝臟微環(huán)境的“細胞對話”3.2肝細胞-HSCs共培養(yǎng)：調(diào)控ECM動態(tài)平衡HSCs在老年肝臟中持續(xù)活化，過度分泌ECM，但與肝細胞共培養(yǎng)時，肝細胞可分泌“HSCs抑制因子”（如骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7，BMP-7），抑制其轉化為肌成纖維細胞。在支架中構建“肝細胞區(qū)-HSCs區(qū)”的空間分區(qū)（通過分區(qū)打印實現(xiàn)），可促進二者旁分泌交互，使活化HSCs比例從單獨培養(yǎng)的65%降至25%，同時ECM分泌量減少50%，有利于老年肝臟的纖維化逆轉。3共培養(yǎng)體系：模擬肝臟微環(huán)境的“細胞對話”3.3三細胞共培養(yǎng)：模擬肝臟完整功能單元進一步納入庫普弗細胞（KCs，肝臟巨噬細胞），構建“肝細胞-SECs-HSCs-KCs”四細胞共培養(yǎng)體系。KCs可吞噬衰老細胞與病原體，同時分泌白細胞介素-10（IL-10），抑制炎癥反應。研究表明，四細胞共培養(yǎng)體系的肝臟特異性功能（白蛋白、尿素、膽紅素代謝）接近原代肝臟組織的80%，且對炎癥刺激的耐受性顯著提升，更適合老年肝臟的修復需求。07生物3D打印老年肝臟組織支架的體外成熟與體內(nèi)整合策略生物3D打印老年肝臟組織支架的體外成熟與體內(nèi)整合策略打印完成的“支架-細胞”復合體需先在體外成熟，恢復部分功能，再植入體內(nèi)引導組織再生。老年患者的特殊性（免疫力低下、合并癥多）對體外成熟與體內(nèi)整合提出了更高要求。1體外成熟：模擬生理環(huán)境，激活細胞功能體外成熟是支架功能化的關鍵，需通過“生物反應器+培養(yǎng)基優(yōu)化”模擬肝臟的生理微環(huán)境。1體外成熟：模擬生理環(huán)境，激活細胞功能1.1生物反應器的選擇：提供力學與化學刺激-灌注生物反應器：通過循環(huán)培養(yǎng)基（流速1-2mL/min）模擬肝臟血流，為細胞提供剪切力（0.5-2dyn/cm2），促進SECsfenestrae形成與肝細胞極化。老年肝細胞在灌注生物反應器中培養(yǎng)7天后，白蛋白分泌量較靜態(tài)培養(yǎng)提升2.5倍，CYP3A4活性提升1.9倍。-旋轉壁生物反應器（RWV）：通過模擬微重力環(huán)境，減少細胞沉降，促進3D細胞團塊形成。RWV培養(yǎng)的老年肝細胞可形成“類肝板”結構（板層厚度20-30μm），更接近體內(nèi)肝索形態(tài)，同時ECM分泌量顯著增加（膠原蛋白Ⅰ型分泌量提升1.8倍），有利于支架與宿主組織的整合。1體外成熟：模擬生理環(huán)境，激活細胞功能1.2培養(yǎng)基的優(yōu)化：針對老年細胞的代謝需求老年肝細胞的糖代謝與脂代謝紊亂，需在基礎培養(yǎng)基（如Williams’EMedium）中添加“老年特需營養(yǎng)因子”：-煙酰胺（10mM）：提升NAD+水平，激活Sirt1通路，抑制肝細胞凋亡；-?；撬幔?mM）：改善線粒體功能，減少活性氧（ROS）生成；-胰島素-轉鐵硒-亞硒酸鈉（ITS）：促進肝細胞增殖與糖原合成。此外，需添加“低氧誘導因子（HIF）穩(wěn)定劑”（如FG-4592），模擬肝臟生理低氧環(huán)境（氧分壓5-8%），激活HIF-1α通路，促進VEGF分泌，加速支架血管化。2體內(nèi)整合：克服免疫排斥，實現(xiàn)功能重建體外成熟的支架-細胞復合體植入老年患者體內(nèi)后，需解決“免疫排斥”“血管化”“功能整合”三大挑戰(zhàn)。2體內(nèi)整合：克服免疫排斥，實現(xiàn)功能重建2.1免疫排斥的應對策略老年患者免疫力低下，但異種支架（如豬源dECM）仍可能引發(fā)急性排斥反應。需通過“免疫修飾”降低免疫原性：-材料表面修飾：在支架表面接枝“CD47蛋白”（“別吃我”信號分子），抑制巨噬細胞吞噬，延長支架體內(nèi)留存時間；-細胞預處理：將種子細胞用“γ-干擾素（IFN-γ）”預處理，上調(diào)MHC-Ⅰ類分子表達，促進免疫耐受；-局部免疫調(diào)節(jié)：在支架中負載“調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）”，通過分泌IL-10與TGF-