本方法規(guī)定了采用Tg(5×ERE:GFP)轉(zhuǎn)基GB/T34713-2017化學(xué)品體外毒性試驗(yàn)替代3.2受精后小時(shí)Hourspost-fe生物學(xué)術(shù)語(yǔ)，受精卵受精后的小時(shí)數(shù)，Hourspost-fert雌激素可與雌激素受體（EstrogenReceptor,ER）發(fā)生特異性結(jié)合，形成雌激素-受體復(fù)合物；該復(fù)合物可進(jìn)一步結(jié)合下游雌激素反應(yīng)元件（Estrogen在本研究采用的Tg(5×ERE:GFP)轉(zhuǎn)基因雌激素?zé)晒獍唏R魚(yú)模型中，GFP的存在與否；同時(shí)，以熒光信號(hào)的陽(yáng)性/陰性響應(yīng)率為核心指標(biāo)，可進(jìn)一步評(píng)CaCl2、0.33mmol/LMgSO4，pH7.4）。）：）：離心管中，用稀釋液定容至1mL，渦旋混勻，得到第一級(jí)儲(chǔ)備液（濃度為轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中。用標(biāo)準(zhǔn)稀釋水定容至10mL刻度線，顛倒混勻，即）：用電子天平稱取3.5gCMC-Na于500mL燒杯中，加入100mL預(yù)熱的雙蒸水，加熱攪拌過(guò)夜，使CMC-Na與水充分混勻，直至呈透明狀，轉(zhuǎn)移到玻璃）：溶解并定容至100mL，若不溶可放入超斑馬魚(yú)孵箱的溫度28℃,晝夜明暗交替時(shí)間六孔培養(yǎng)板、10cm培養(yǎng)皿、移液槍、15例置于繁殖缸內(nèi)，采用隔板分隔雌、雄魚(yú)。維持常規(guī)飼養(yǎng)光照周期，次日早晨實(shí)驗(yàn)第2天：選取發(fā)育至24hpf的斑馬魚(yú)胚胎，每孔計(jì)數(shù)30枚并轉(zhuǎn)移至六孔板中。棄去原有培養(yǎng)液，每孔加入5mL含待測(cè)樣品的培養(yǎng)液，建立受試物暴隨機(jī)選取至少6尾作為觀測(cè)樣本。采用CMC-Na溶液對(duì)樣本進(jìn)行固定，隨后置避免因儀器差異、環(huán)境波動(dòng)及操作時(shí)長(zhǎng)過(guò)長(zhǎng)對(duì)a)試驗(yàn)依據(jù)：明確試驗(yàn)所遵循的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)規(guī)范或自主建立的試驗(yàn)方案依b)試驗(yàn)?zāi)康募霸恚宏U述本試驗(yàn)的核心研究目標(biāo)，以及基于轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)模型c)試驗(yàn)項(xiàng)目：詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)涵蓋的檢測(cè)項(xiàng)目，包括熒光表型觀察、陽(yáng)性/陰性響d)受試物與陽(yáng)性對(duì)照信息：記錄受試物的來(lái)源、濃度梯度、處理方式等關(guān)鍵參e)斑馬魚(yú)相關(guān)信息：注明斑馬魚(yú)的來(lái)源、品系（如Tg(5×ERE:GFP)轉(zhuǎn)基因熒光f)試驗(yàn)條件與方法：詳述試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案（如分組設(shè)置、樣本量）、試驗(yàn)所用儀g)試驗(yàn)周期：明確試驗(yàn)啟動(dòng)至完成的具體日期，精準(zhǔn)記h)試驗(yàn)結(jié)果：全面呈現(xiàn)試驗(yàn)獲得的原始熒光成像圖等圖像數(shù)據(jù)，及分組熒光表i)數(shù)據(jù)處理與結(jié)果評(píng)價(jià)方法：說(shuō)