學(xué)有目標(biāo)——新課程標(biāo)準(zhǔn)必明記在平時(shí)——核心語句必背1.概述DNA重組技術(shù)所需的三種基本工具及其作用。2．闡明基因工程載體需要具備的條件。3．理解DNA粗提取和鑒定的原理，學(xué)會(huì)DNA的粗提取和鑒定方法。1.限制性內(nèi)切核酸酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。2.E.coliDNA連接酶與T4DNA連接酶都能將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵，但前者連接具有平末端的DNA片段的效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于后者。3.質(zhì)粒作為基因工程的載體需具備的條件：能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并自我復(fù)制；具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；具有標(biāo)記基因。4.DNA粗提取與鑒定的原理：DNA溶于2mol/L的NaCl溶液，不溶于酒精，在沸水浴條件下遇二苯胺會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。項(xiàng)目E.coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源___________________特點(diǎn)都能將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開的___________，但E.coliDNA連接酶連接具有平末端的DNA片段的效率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)______T4DNA連接酶大腸桿菌T4噬菌體磷酸二酯鍵低于2．下圖為DNA在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是(

)A．①④②③ B．①②④③C．③④①② D．①④③②解析：限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端或平末端，因此作用于③；DNA聚合酶用于DNA分子的復(fù)制，能在單鏈上將一個(gè)個(gè)游離的脫氧核苷酸連接起來，因此作用于④；DNA連接酶能將雙鏈DNA片段連接起來，因此作用于①；解旋酶能夠?qū)NA分子的雙螺旋解開，故作用于②。答案：C

[在應(yīng)用中落實(shí)]1．某研究所的研究人員擬將生長(zhǎng)激素基因通過質(zhì)粒介導(dǎo)進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，已知質(zhì)粒中存在兩個(gè)抗性基因：A是鏈霉素抗性基因，B是氨芐青霉素抗性基因；目的基因要插入到基因B中，且大腸桿菌本身不帶有任何抗性基因。下列敘述正確的是(

)A．導(dǎo)入大腸桿菌的質(zhì)粒一定為重組質(zhì)粒B．抗生素抗性基因是目的基因表達(dá)的必要條件C．成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌可以在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)D．能在含鏈霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的大腸桿菌不一定符合生產(chǎn)要求解析：導(dǎo)入大腸桿菌的質(zhì)?？赡転橹亟M質(zhì)粒，也可能為普通質(zhì)粒，A錯(cuò)誤；抗生素抗性基因是標(biāo)記基因，是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來，與目的基因表達(dá)無關(guān)，B錯(cuò)誤；由于目的基因要插入到基因B中，即氨芐青霉素抗性基因被破壞，工程菌不能抗氨芐青霉素，因此成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，C錯(cuò)誤；能在含鏈霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的大腸桿菌可能含有重組質(zhì)粒或普通質(zhì)粒，因此不一定符合生產(chǎn)要求，D正確。答案：D

續(xù)表[在應(yīng)用中落實(shí)]1．(2023·廣東高考)“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的基本過程是：裂解→分離→沉淀→鑒定。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．裂解：使細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)B．分離：可去除混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等C．沉淀：可反復(fù)多次以提高DNA的純度D．鑒定：加入二苯胺試劑后即呈現(xiàn)藍(lán)色解析：DNA主要存在于細(xì)胞核內(nèi)，而裂解的目的是使細(xì)胞破裂，釋放出DNA等物質(zhì)，A正確；DNA、RNA、蛋白質(zhì)和多糖等物質(zhì)在物理和化學(xué)性質(zhì)方面存在差異，可以利用這些差異，通過適當(dāng)?shù)姆蛛x方法去除混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等，B正確；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，通過控制NaCl溶液的濃度使DNA溶解或析出，可反復(fù)多次以提高DNA的純度，C正確；進(jìn)行DNA鑒定時(shí)可以使用二苯胺試劑，