2026年生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方法與技術(shù)題庫一、選擇題（每題2分，共20題）1.在蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot）實(shí)驗(yàn)中，用于將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)移到膜的試劑是？A.Tris-HClB.SDSC.甲醇D.尿素2.PCR反應(yīng)體系中，引物退火溫度通常取決于？A.引物長度B.引物GC含量C.脫氧核苷酸濃度D.基因大小3.用于檢測基因表達(dá)差異的芯片技術(shù)是？A.質(zhì)譜分析B.基因芯片C.流式細(xì)胞術(shù)D.等溫擴(kuò)增4.在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，減少樣品污染常用的方法是？A.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）B.脈沖場凝膠電泳（PFGE）C.脫鹽處理D.超速離心5.以下哪種技術(shù)可用于檢測DNA序列中的小片段缺失？A.Sanger測序B.差異凝膠凝膠電泳（DGGE）C.連接酶檢測反應(yīng)（LDR）D.基因芯片6.基因敲除實(shí)驗(yàn)中，常用的同源重組載體是？A.載脂蛋白A1B.pBR322C.ΦX174D.FLP-FRT系統(tǒng)7.用于檢測蛋白質(zhì)翻譯后修飾的技術(shù)是？A.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）B.活性染色劑C.原位雜交D.免疫熒光8.在代謝組學(xué)研究中，用于檢測小分子代謝物的技術(shù)是？A.基因測序B.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）C.脈沖場凝膠電泳（PFGE）D.電子顯微鏡9.用于檢測RNA剪接異構(gòu)體的技術(shù)是？A.基因芯片B.RT-qPCRC.原位雜交D.基因編輯10.在細(xì)胞培養(yǎng)中，用于維持細(xì)胞生長的培養(yǎng)基通常包含？A.胰島素B.脫氧核糖核酸酶C.膠原蛋白D.乙酸鹽二、填空題（每空1分，共10空）1.WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，蛋白印跡前處理的目的是__________________________。2.PCR反應(yīng)中，引物的設(shè)計原則包括__________________________和__________________________。3.蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，減少樣品污染的方法是__________________________和__________________________。4.基因芯片技術(shù)主要用于__________________________和__________________________。5.DNA測序中，Sanger測序法的原理是__________________________。6.蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括__________________________、__________________________和__________________________。7.代謝組學(xué)研究中，LC-MS技術(shù)的優(yōu)勢在于__________________________和__________________________。8.基因敲除實(shí)驗(yàn)中，CRISPR-Cas9系統(tǒng)的核心酶是__________________________和__________________________。9.細(xì)胞培養(yǎng)中，維持細(xì)胞生長的培養(yǎng)基通常包含__________________________、__________________________和__________________________。10.RNA干擾技術(shù)（RNAi）的機(jī)制是通過__________________________降解靶標(biāo)mRNA。三、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述WesternBlot實(shí)驗(yàn)的基本步驟及其原理。2.PCR反應(yīng)中，引物退火溫度如何優(yōu)化？簡述影響因素。3.基因芯片技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用有哪些？4.蛋白質(zhì)翻譯后修飾有哪些類型？簡述其生物學(xué)意義。四、論述題（每題10分，共2題）1.論述Sanger測序技術(shù)的原理及其在基因組學(xué)研究中的應(yīng)用。2.結(jié)合實(shí)際案例，論述代謝組學(xué)技術(shù)在藥物研發(fā)中的作用。答案與解析一、選擇題答案與解析1.C.甲醇解析：WesternBlot中，將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜時，需用甲醇預(yù)濕膜，以增強(qiáng)蛋白結(jié)合。2.A.引物長度解析：引物長度影響退火溫度，通常長度越長，Tm值越高。GC含量也重要，但長度是主要因素。3.B.基因芯片解析：基因芯片可高通量檢測基因表達(dá)差異，適用于研究疾病或藥物干預(yù)的分子機(jī)制。4.C.脫鹽處理解析：脫鹽可去除鹽離子干擾，提高蛋白質(zhì)組學(xué)分析的準(zhǔn)確性。5.C.連接酶檢測反應(yīng)（LDR）解析：LDR可檢測小片段DNA缺失或插入，適用于基因突變分析。6.D.FLP-FRT系統(tǒng)解析：FLP-FRT系統(tǒng)通過位點(diǎn)特異性重組實(shí)現(xiàn)基因敲除，廣泛應(yīng)用于模式生物研究。7.A.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）解析：LC-MS可檢測磷酸化、乙?；确g后修飾，是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要工具。8.B.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）解析：LC-MS可檢測小分子代謝物，適用于代謝組學(xué)研究。9.B.RT-qPCR解析：RT-qPCR可檢測RNA剪接異構(gòu)體，靈敏度高，適用于表達(dá)分析。10.A.胰島素解析：培養(yǎng)基通常含血清、胰島素等促生長因子，支持細(xì)胞增殖。二、填空題答案與解析1.封閉非特異性位點(diǎn)解析：蛋白印跡前用封閉劑（如BSA）封閉非特異性位點(diǎn)，減少背景噪聲。2.特異性和互補(bǔ)性解析：引物需特異性結(jié)合目標(biāo)序列，且與模板互補(bǔ)才能高效擴(kuò)增。3.脫鹽處理和酶消化解析：脫鹽去除干擾離子，酶消化（如胰蛋白酶）可減少交叉污染。4.基因表達(dá)分析和疾病診斷解析：基因芯片用于研究疾病相關(guān)基因表達(dá)，輔助診斷和預(yù)后評估。5.測序反應(yīng)終止法解析：Sanger測序通過ddNTPs終止延伸，根據(jù)終止位置確定堿基序列。6.磷酸化、乙?；吞腔馕觯哼@些修飾影響蛋白功能，是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵調(diào)控機(jī)制。7.高靈敏度和高通量解析：LC-MS可檢測微量代謝物，適用于復(fù)雜體系分析。8.Cas9核酸酶和向?qū)NA（gRNA）解析：Cas9切割DNA，gRNA引導(dǎo)至目標(biāo)位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)基因敲除。9.氨基酸、維生素和無機(jī)鹽解析：培養(yǎng)基需含必需營養(yǎng)素，支持細(xì)胞正常生長。10.小干擾RNA（siRNA）解析：RNAi通過siRNA降解靶標(biāo)mRNA，抑制基因表達(dá)。三、簡答題答案與解析1.WesternBlot基本步驟及原理-步驟：蛋白提取→SDS電泳→轉(zhuǎn)膜→封閉→一抗孵育→二抗孵育→化學(xué)發(fā)光檢測。-原理：通過抗體特異性識別目標(biāo)蛋白，結(jié)合化學(xué)發(fā)光顯色，實(shí)現(xiàn)定量分析。2.PCR引物退火溫度優(yōu)化-影響因素：引物GC含量、長度、模板復(fù)雜度。-優(yōu)化方法：梯度PCR（如25-75℃）確定最佳Tm值，通常Tm=（GC含量×2+AT含量×4）+5℃。3.基因芯片在疾病診斷中的應(yīng)用-腫瘤：檢測腫瘤相關(guān)基因表達(dá)，輔助分型。-感染：快速檢測病原體基因組，指導(dǎo)抗生素選擇。-藥物：分析藥物靶點(diǎn)，預(yù)測個體化用藥反應(yīng)。4.蛋白質(zhì)翻譯后修飾類型及意義-類型：磷酸化（信號轉(zhuǎn)導(dǎo)）、乙?；ㄈ旧|(zhì)調(diào)控）、糖基化（蛋白折疊）。-意義：調(diào)控蛋白活性、穩(wěn)定性及相互作用，影響細(xì)胞功能。四、論述題答案與解析1.Sanger測序技術(shù)原理及應(yīng)用-原理：通過ddNTPs終止延