維生素A定性檢驗(yàn),陸嶸輝、方芳1502、1503班,1,脂溶性維生素的測(cè)定,1. 維生素、維生素的測(cè)定方法和原理,2. 維生素E、維生素K的檢測(cè)方法,3. 維生素的生理功能,4. 維生素測(cè)定未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì),2,它是指某些能溶于脂肪和大部分有機(jī)溶劑，而不能溶于水的維生素。脂溶性維生素的種類(lèi)： 維生素A、維生素D、維生素K、維生素E,脂溶性維生素的定義：,3,檢測(cè)的一般程序：,三氯化銻比色法,紫外分光光度法,熒光分析法,高效液相色譜法,分離富集,常用檢測(cè)方法：,樣品處理,排除干擾物質(zhì),檢測(cè),4,1維生素A測(cè)定原理 : 維生素A在三氯甲烷中與三氯化銻作用生成藍(lán)色物質(zhì)，其顏色深淺與溶液中的維生素含量成正比。該藍(lán)色物質(zhì)雖不穩(wěn)定，但在一定時(shí)間內(nèi)可用分光光度計(jì)于620nm波長(zhǎng)處測(cè)定。 VitA + SbCl3 藍(lán)色物質(zhì) max 618nm620nm2適用范圍 對(duì)于維生素A含量不高的使用皂化法處理樣品， 對(duì)于維生素A高的樣品使用研磨法處理樣品,5,3.使用儀器：,721-紫外分光光度計(jì),6,4.樣品處理樣品處理：根據(jù)樣品性質(zhì)，分為皂化法、研磨法。（1）皂化法（適用于每克樣品中Va510ug）研磨 提取 濃縮 研磨：精確稱(chēng)25g樣品 放入盛有35倍質(zhì)量的無(wú)水Na2SO4研缽中 研磨至樣品中水分被完全吸收，并均勻質(zhì)化提?。盒⌒牡匕丫鶆蛸|(zhì)化樣品移入錐形瓶?jī)?nèi) 準(zhǔn)確加入50100ml乙醚 振搖抽提2min，使Va溶于乙醚中 使其自行澄清（大約12h），或離心澄清（乙醚易揮發(fā)，溫度高時(shí)應(yīng)在冷水浴中操作）濃縮：取澄清提取乙醚液25ml，至于比色管內(nèi) 在7080水浴上抽干 立即加入1ml三氯甲烷溶解，供比色使用,8,5.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備： 準(zhǔn)確取一定量Va標(biāo)夜于45個(gè)容量瓶?jī)?nèi)，用三氯甲烷配置標(biāo)準(zhǔn)系列 再取相同數(shù)量比色管順次取1ml三氯甲烷和標(biāo)準(zhǔn)系列使用液1ml 各管加入乙酸酐1滴，制成標(biāo)準(zhǔn)比色系列 于620nm波長(zhǎng)處，以三氯甲烷調(diào)節(jié)吸光度至零點(diǎn) 將標(biāo)準(zhǔn)比色系列按照順序移入光路前，迅速加入9ml三氯化銻-三氯甲烷溶液 于6s內(nèi)測(cè)定吸光度 以吸光度為縱坐標(biāo)6.樣品測(cè)定 于一比色管中加入10ml三氯甲烷，加入一滴乙酸酐為空白液 另一管 加入1ml三氯甲烷，其他比色管分別加入1ml樣液及1滴乙酸酐 以下步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線制備注意事項(xiàng)（1）三氯化銻腐蝕性強(qiáng)，不能沾在手上，三氯化銻遇水生成白色沉淀因此用過(guò)的儀器要先用稀鹽酸浸泡后再清洗。（2）維生素A見(jiàn)光易分解，整個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)在暗處進(jìn)行，防止陽(yáng)光照射，或采 用 棕色玻璃避光。,9,1,4,分子中僅含有碳、氫、氧三種元素,不溶于水，而溶于脂肪和大部分有機(jī)溶劑。,脂溶性維生素有相當(dāng)數(shù)量貯存在動(dòng)物機(jī)體的脂肪組織中，若動(dòng)物吸收得多，體內(nèi)貯存的也多,2,3,維生素K可在腸道內(nèi)經(jīng)微生物合成。動(dòng)物皮膚中的7脫氫膽固醇可經(jīng)紫外線照射轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D3。動(dòng)物體內(nèi)不能合成維生素A和維生素E，故均需由飼料提供。,脂溶性維生素共同特點(diǎn),10,-VE主要用于預(yù)防習(xí)慣性流產(chǎn)，男婦不一一孕癥的輔助治療，延緩衰老，溶血性貧血，肌營(yíng)養(yǎng)不良，動(dòng)脈硬化，急慢性肝炎、肝硬化，胃潰瘍，甲狀腺和腎上腺機(jī)能減退癥，痔，腦血管意外后遺癥、放射線損傷等。,VA具有促進(jìn)上皮細(xì)胞合成糖多糖，同時(shí)抑制角蛋白合成的作用，可維持上皮組織的正常結(jié)構(gòu)和功能；也參與視紫紅質(zhì)的合成，維持暗視覺(jué)。,-VD具有促進(jìn)骨鈣化作用。常與VA一起共存于動(dòng)物性食物中，如魚(yú)肝油、肝臟、蛋黃、牛奶等；人體皮下組織中的7-脫氫 一膽固醇受紫外線照射后可轉(zhuǎn)變?yōu)閂D3。,一一一-VK治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松癥，維生素一一 K2生成骨蛋白質(zhì)，再與鈣共同生成骨質(zhì)，增加骨密度，防止骨折，治療維生素K2缺乏性出血癥，促進(jìn)凝血酶原的形成，加速凝血，維持正常的凝血時(shí)間。,功能,脂溶性維生素的功能：,11,脂溶性維生素測(cè)定未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)：,維生素的測(cè)定方法的研究發(fā)展迅猛目前的分析方法就有十幾種，包括：分光度法、熒光法、高壓液相色譜法、雙電壓法、示波法、氣相色譜法等等。但一樣品用不同方法檢得到結(jié)果不盡相同給用者帶來(lái)一定分析困難，同時(shí)檢測(cè)時(shí)樣品的前處理過(guò)程過(guò)于繁瑣，分析時(shí)間過(guò)長(zhǎng)混合物有效成分提取困難，所以未來(lái)的檢測(cè)發(fā)展一定是朝著高靈敏度、高精密度、