實驗二細(xì)菌涂 抹 片的制備和革蘭氏染色 目的要求 1 掌握細(xì)菌抹片的制備方法和常用染色方法 2 認(rèn)識革蘭氏染色和抗酸性染色的反應(yīng)特性 實驗內(nèi)容 1 細(xì)菌抹片的制備 玻片準(zhǔn)備 透明 潔凈 無油漬 抹片 液體材料 非液體材料 組織臟器材料的抹片方法講解 示范 干燥固定 火焰固定和化學(xué)固定的示范 講解其目的及注意事項 2 細(xì)菌涂片的制備 講解并示范涂片 干燥 固定的方法 3 細(xì)菌常用染色方法 革蘭氏染色法 細(xì)菌抹片的制備 革蘭氏染色法 1 制片 取待檢病料或細(xì)菌培養(yǎng)物常規(guī)抹 涂 片 干燥 固定 2 初染 滴加結(jié)晶紫 染色1 2分鐘 水洗 3 媒染 用碘液沖去殘水 并用碘液覆蓋約1分鐘 水洗 4 脫色 用濾紙吸取或甩去載玻片上的殘水 將載玻片傾斜 在白色背景下 用滴管流加95 乙醇脫色 直至流出的乙醇無紫色時 20 30秒 立即水洗 5 復(fù)染 用復(fù)紅液復(fù)染約2分鐘 水洗 6 鏡檢 用濾紙吸水 干燥后 顯微鏡油鏡觀察 革蘭氏染色法原理 革蘭氏染色法將細(xì)菌分為G 和G 這由兩類細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和組成的不同而決定 用結(jié)晶紫初染后 所有的細(xì)菌都染上藍(lán)紫色 碘作為媒染劑能與結(jié)晶紫結(jié)合形成結(jié)晶紫 碘的復(fù)合物 增強(qiáng)了染料與菌體的結(jié)合力 用乙醇脫色處理時 兩類細(xì)菌的脫色效果是不同的 G 細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成 且壁厚 類脂含量低 用乙醇脫色時使細(xì)胞壁脫水 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小 通透性降低 使得結(jié)晶紫 碘的復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi) 雖經(jīng)洗脫和復(fù)染仍然保持初染劑的藍(lán)紫色 G 細(xì)菌則不同 由于其細(xì)胞壁肽聚糖層較薄 類脂含量高 所以在脫色處理時 類脂被乙醇溶解 細(xì)胞壁的通透性增大 使結(jié)晶紫 碘的復(fù)合物比較容易被洗脫出來 用復(fù)染劑復(fù)染后 細(xì)胞被染上復(fù)染劑的顏色 G 菌與G 菌細(xì)胞壁的區(qū)別 細(xì)胞壁革蘭陽性菌革蘭陰性菌強(qiáng)度較堅韌較疏松厚度21 80nm10 15nm肽聚糖層可達(dá)50層1 2層肽聚糖量50 80 5 80 糖類量約45 15 20 脂類量1 4 11 22 磷壁酸 外膜 革蘭氏染色法過程示意圖 革蘭氏染色法動畫 革蘭陽性菌革蘭陰性菌 革蘭氏染色法 革蘭氏染色法動畫 實驗報告 1 細(xì)菌抹片或涂片革蘭氏染色的顯微鏡觀察結(jié)果 2 革蘭氏染色法的具體程序和注意事項 細(xì)菌的單染色 細(xì)菌抗酸染色 1 初染 用玻片夾夾持涂片標(biāo)本 滴加石炭酸復(fù)紅2 3滴 在火焰高處徐徐加熱 切勿沸騰 出現(xiàn)蒸汽即暫時離開 若染液蒸發(fā)減少 應(yīng)再加染液 以免干涸 加熱3 5分鐘 待標(biāo)本冷卻后用水沖洗 2 脫色