G 中華人民共和國國家標準  9696 2013 食品安全國家標準  牛奶中阿維菌素類藥物 多 殘留 的測定  高效液相色譜法  in 013布  2014施  中華人民共和國農(nóng)業(yè)部  中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會  發(fā)布  I 目   次  目   次  . I 前   言  . 奶中阿維菌素類藥物 多 殘留 的測定  高效液相色譜法  .  1 范圍  .  2 規(guī)范性引用文件  .  3 原理  .  4 試劑和材料  .  5  儀器和設(shè)備  .  6  試料的制備與保存  .  料的制備  .  料的保存  .  7  測定步驟  .  準曲線的制備  .  取  .  化  .  生化  .  測定  .  空白試驗  .  8  結(jié)果計算和表述  .  9  檢測方法靈敏度、準確度和精密度  .  敏度  .  確度  .  密度  .     言  本標準的附錄 A 為資料性附錄。  本標準系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標準。    牛奶中阿維菌素類藥物殘留檢測  高效液相色譜法  1 范圍  本標準規(guī)定了牛奶中 阿維菌素類藥物 殘留量檢測的制樣和高效液相色譜 測定 方法。  本標準適用于牛奶中伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和埃普利諾菌素 單個或多個藥物殘留量的檢測。  2 規(guī)范性引用文件  下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研 究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。   準化工作導(dǎo)則  第 1 部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則   6682  分析實驗室用水規(guī)則和試驗方法  3 原理  試料中殘留的阿維菌素類藥物， 用乙腈提取， 凈化，三氟乙酸酐和  高效液相色譜 標法定量。  4 試劑和材料  以下所用試劑，除特別注明外均為分析純試劑，水為符合  6682 規(guī)定的一級水。  4. 1  埃普利諾菌素、阿維菌素、伊維菌素標準品： 含量 98%； 多 拉菌素標準品： 含量   甲醇 ： 色譜純 。  乙腈 ： 色譜純 。  三氟乙酸酐  三乙胺  異辛烷     18固相萃取柱 ： 500  相當者 。  洗滌液： 取乙腈 30  70 三乙胺 20 L，混勻。  衍生化試劑 A 液 ： 取  腈 1 勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。  衍生化試劑 B 液 ： 取三氟乙酸酐 1 腈 2 勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。  200 g/維菌素類藥物混合標準 貯備 液： 精密 稱取埃普利諾菌素、阿維菌素、多拉菌素和伊維菌素標準品各 10  50 瓶中，用乙腈溶解并 稀釋至刻度 ，配制成濃度為 200 g/阿維菌素類藥物混合標準貯備液 。 28 以下保存，有效期 6 個月。  10 g/維菌素類藥物混合標準 工作 液 ： 精密量取 200 g/維菌素類藥物混合標準貯備液 0.5  10 瓶中，用 乙腈 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 10 g/阿維菌素類藥物標準工作液。 28 以下保存，有效期 6 個月。  5  儀器和設(shè)備   高效液相色譜儀 ： 配熒光檢測器 。  分析天平： 感量 1 g。  天平： 感量 g。  渦旋混合儀  離心機  固相萃取裝置  氮吹儀  微孔濾膜 :  m。  6  試料的制備與保存  料 的制備  取適量新鮮或 解凍 的空白或供試牛奶， 混合均勻 。  取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。  取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。  取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準 工作 ，作為空白添加試料。     料 的保存  以下 保存 。  7  測定步驟  準曲線的制備  精密 量取 10 g/維菌素類藥物 混合標準貯備 液適量，用乙腈稀釋 ， 配制 成濃度為 2、 5、 10、50、 100、 500 和 1 000 ng/系 列標準 溶 液 ， 各 取 1.0  5 管中， 于 60 水浴氮氣吹干，依次加衍生化試劑 A 液 100 L 和 衍生化試劑 B 液 150 L，密閉，渦動 10 s，依次加冰醋酸 和 三乙胺各 50 L，渦動 10 s，與樣品溶液同步密閉反應(yīng) 30  650 L 甲醇混勻， 供高效液相色譜測定。以測得峰面積 為縱坐標，對應(yīng)的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。  取  稱取 試料（ 5+g 于 50 心管中，加乙腈 8 動 1 4 500 r/ 心 10  上清液。 殘渣 中 加乙腈 8 重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，加水 20 三乙胺 50 L，混勻，備用。   化  依次用乙腈 5  洗滌液 5 化 ， 取 備用液過柱，自然流干 ， 抽 干 5 異辛烷 3 滌，抽 干 5 乙腈 5 脫，收集洗脫液于 10 管中， 于 60 水浴氮氣吹干，備用。  生化  于 備用 試管中依次加衍生化試劑 A 液 100 L、 衍生化試劑 B 液 150 L，密閉，渦動 10 s，依次加冰醋酸 50 L 和 三乙胺 50 L，渦動 10 s， 于室溫 密閉反應(yīng) 30 甲醇 650 L 混勻。過 濾 ，供高效液相色譜法測定 。  測定  液相色譜參考條件  色譜柱： 18（ 250 .6 粒徑 5 m） ，或相當者 ；    流動相：乙腈 +水 （ 90+10， v/v） ；  流速： 1 mL/ 柱溫： 30 ；  激發(fā)波長： 365  發(fā)射波長： 475  進樣量： 20 L。  測定法  取試樣溶液和相應(yīng)的標準溶液，作單點或多點校準，按外標法，以峰面積計算 。 標準溶液及試樣溶液中阿維菌素類藥物響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。 在上述色譜條件下， 標準 溶液 和空白添加試樣 溶液 的高效液相色譜圖 見附錄 A。  空白試驗  除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。  8  結(jié)果計算和表述  試料中 阿維菌素類藥物的殘留量 (g/ 按下式計算    X= CV m 式中：   X供試 試料中 相應(yīng)的 阿維菌素類藥物的殘留量 ， g/ C試樣 溶 液中 相應(yīng)的 阿維菌素類藥物 的濃度， g/ V試樣液 總體積 ，  m供試試料質(zhì)量 ， g。  注：計算結(jié)果需扣除空白 值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。  9  檢測方法靈敏度、準確度和精密度  敏度  本方法 的檢測限 為 1 g/量限 為 2 g/  確度  本方法在 2 100 g/平上 的回收率為 70% 120%。  密度  本方法的批內(nèi) 相對標準偏差 15%，批間 相對標準偏差 20%。    附錄 A （資料