1 密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 博士學(xué)位論文 生物素對肉仔雞生理生化特性與免疫功能 的影響及其機(jī)理研究 on 2 on y I 摘 要 本論文通過七個試驗(yàn)系統(tǒng)研究了生物素對肉仔雞生長性能、血清生理生化指標(biāo) 、肝臟丙酮酸羧化酶活性、組織脂肪酸沉積、腸道微生物菌群和免疫功能的影響，并采用分子生物學(xué)方法對生物素的免疫機(jī)理進(jìn)行了深入研究和探討。 試驗(yàn)一： 研究了玉米 探討了生物素的適宜添加水平。將 960 只 1 日齡 仔雞隨機(jī)分成 6 個處理，每個處理 10 個重復(fù)，每個重復(fù) 16 只雞（公母各半）；在玉米 .1 mg/.2 mg/0.3 mg/0.4 mg/ 0.5 mg/ 5 個水平的生物素，包括對照 組總計(jì) 6 種日糧處理。試驗(yàn)結(jié)果表明：在玉米 均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化效率影響都不顯著（ P但添加生物素提高了肝臟丙酮酸羧化酶的活性，其中 0.3 mg/.4 mg/ 0.5 mg/理組顯著高于對照組（ 綜合考慮生長性能和肝臟丙酮酸羧化酶活性等指標(biāo)，在玉米 .3 mg/ 試驗(yàn)二： 研究了玉米 組織脂肪酸沉積的影響。將 180 只 1 日齡 仔雞隨機(jī)分成 6 個處理，每個處理 30 只雞（公母各半）；在玉米.1 mg/0.2 mg/0.3 mg/0.4 mg/ 0.5 mg/ 5 個水平的生物素，包括對照組總計(jì) 6 種日糧處理。試驗(yàn)結(jié)果表明：（ 1）添加 生物素對血清生理生化指標(biāo)影響不顯著（ P其中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性呈下降趨勢（ P 總蛋白和球蛋白水平呈上升趨勢 （ P 鈣、磷、葡萄糖含量和堿性磷酸酶活性呈下降 趨勢 （ P； 膽固醇、磷脂、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白呈上升趨勢（ P胰高血糖素呈下降趨勢（ P而甲狀腺素 三碘甲狀原氨酸 島素和生長激素呈上升趨勢（ P（ 2）生物素添加促進(jìn)了肉仔雞組織脂肪酸的沉積， 顯著提高了肝臟組織中總脂肪酸（ 飽和脂肪酸含量（ 、 和 等脂肪酸 的含量（ ； 顯著提高了 、 和 脂肪酸的含量和 18:2 比值（ 而厭氧菌總數(shù)呈下降趨勢（ P（ 2）顯著降低盲腸中大腸桿菌數(shù)量（ 乳酸桿菌數(shù)量沒有變化。 驗(yàn)四： 研究了不同生物素供應(yīng)狀況（缺乏、充分和超量）對肉仔雞生長性能及其血清生理生化指標(biāo)的影響。將 576 只 1 日齡 仔雞隨機(jī)分成 4 個處理，每個處理 9 個重復(fù)，每個重復(fù)16 只雞（公 母各半）；在小麥 魚粉型基礎(chǔ)日糧中分別添加 mg/mg/ 2.7 mg/ 3 個水平的生物素，包括對照組共計(jì) 4 種日糧處理。試驗(yàn)結(jié)果表明：（ 1）生物素缺乏將嚴(yán)重抑制肉仔雞的采食和生長，生物素缺乏組肉仔雞的平均日采食量和平均日增重極顯著低于各生物素添加組（ （ 2）添加生物素提高了血清磷脂水平（ P= 0.9 mg/理組的血清磷脂和高密度脂蛋白 含量 顯著高于對照組（ （ 3） 添加生物素后，血清胰島素和生長激素水平呈上升趨勢（ P而胰高血糖素呈下降趨勢（ P 試驗(yàn)五： 系統(tǒng)研究了生物素對肉仔雞免疫器官發(fā)育、機(jī)體免疫反應(yīng)、 T 淋巴細(xì)胞亞群和神經(jīng)內(nèi)分泌激素的影響。將 400 只 1 日齡 仔雞隨機(jī)分成 4 個處理，每個處理 5 個重復(fù)，每個重復(fù) 20 只雞（公母各半）；在小麥 魚粉型基礎(chǔ)日糧中分別添加 mg/mg/2.7 mg/ 3 個水平的生物素，包括對照組 共計(jì) 4 種日糧處理。試驗(yàn)結(jié)果表明：（ 1）生物素缺乏抑制了免疫器官的發(fā)育，降低其重量指數(shù)；添加生物素可促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，提高其重量指數(shù)。（ 2）生物素添加促進(jìn)了體液免疫反應(yīng)，提高了血清中球蛋白水平，但處理效應(yīng)不顯著（ P提高了血清中新城疫抗體滴度和 平。就 新城疫抗體滴度而言， 0.9 mg/ 2.7 mg/理組顯著高于對照組和 0.3 mg/理組（ 提高了 T 淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率（ P各生物素添加組高于對照組（ P 極顯著提高了脾臟中 T 淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率（ 就 B 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率而言， 2.7 mg/理組顯著高 于對照組（ （ 4）添加生物素影響了脾臟和血液中的 T 淋巴細(xì)胞亞群。 添加生物素極顯著降低血液中表達(dá) 細(xì)胞含量（ 生物素的添加極顯著降低脾臟中表達(dá) 細(xì)胞含量（ 且各生物素添加組之間也無顯著差異（ P 試驗(yàn)六： 采用 法研究了生物素對脾臟細(xì)胞 因的 達(dá)的影響，從基因表達(dá)水平上探討了生物素調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用機(jī)理。將 60 只 1 日齡 肉仔雞隨機(jī)分成 3 個處理，每個處理 20 只雞；小麥 魚粉型基礎(chǔ)日糧中分別添加 mg/.7 mg/ 2 個水平的生物素，包括對照組共計(jì) 3 種日糧處理。試驗(yàn)結(jié)果表明：添加生物素促進(jìn)了脾臟細(xì)胞免疫因子 基因表達(dá)，極顯著提高了 因的表達(dá)產(chǎn) 表達(dá)量 ( 試驗(yàn)七： 采用分子生物學(xué)方法研究了生物素對脾臟細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原（ 因的達(dá)的影響 ，從基因表達(dá)水平上來探討生物素促進(jìn)脾臟細(xì)胞增殖的作用機(jī)理。試驗(yàn)結(jié)果表明：生物素對脾臟細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用，添加生物素極顯著提高了脾臟細(xì)胞 因的表達(dá)產(chǎn)物 表達(dá)量 ( 總之，在玉米 提高了肝臟丙酮酸羧化酶的活性；促進(jìn)了肝臟和肌肉組織中脂肪酸的沉積，改變了腸道中的微生物菌 群數(shù)量，促進(jìn)了乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌的增殖。當(dāng)生物素缺乏時，嚴(yán)重抑制肉仔雞的生長和采食；添加生物素促進(jìn)了肉仔雞免疫器官的發(fā)育，改善了體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)，改變了脾臟和血液中 T 淋巴細(xì)胞亞群，降低了脾臟和血液中表達(dá) 細(xì)胞含量，促進(jìn)了脾臟細(xì)胞 因的 達(dá)。生物素調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的機(jī)理是：通過提高脾臟細(xì)胞 因的 達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞因子 翻譯與合成，提高體內(nèi) 水平和促進(jìn)脾臟細(xì)胞 制與脾臟細(xì)胞的增殖分化，改善脾臟的代謝狀況和促進(jìn)機(jī)體免疫反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)對機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)。 關(guān)鍵詞： 肉仔雞，生物素，脂肪酸，腸道微生物菌群，免疫功能，作用機(jī)理 to of on in by : to of in on in to of 960 AA 10 16 in .1 mg/0.2 mg/0.3 mg/0.4 mg/kg .5 mg/ of as of in P .3 mg/0.4 mg/kg .5 mg/kg of of .3 mg/kg in on : to of in on in as 180 AA 30 in .1 mg/0.2 mg/0.3 mg/0.4 mg/kg .5 mg/ of (1) of LT ST P P of LK a to P DL a to P of P 3, P (2) in In , 24:0 by of a 20:0, 20:420:418:2 a to in in P (2) of to a .4 mg/kg of (2) of P= .9 mg/kg of (3) of P P : to of on in 400 AA 5 20 in .3 mg/0.9 mg/kg .7 mg/ of as (1) of of (2) of P gG by of .9 mg/kg .7 mg/kg of .3 mg/kg of of P of .7 mg/kg of (6) in In of by of (8) 3, P s no P : to of on in to of 60 AA 20 in .3 mg/kg .7 mg/ of as of : to of on in to of as of of in In in no on P in in of of in of in It of 略詞表 縮略詞 英文 中文 均日增重 均日采食量 F/G 料 /增重 準(zhǔn)差 果酸脫氫酶 門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 蛋白 蛋白 蛋白 性磷酸酶 密度脂蛋白 ow 低密度脂蛋白 油三酯 脂 固醇 脂肪酸 和脂肪酸 不飽和脂肪酸 不飽和脂肪酸 射免疫分析法 碘甲狀腺原氨酸 狀腺素 2 前列腺素 物血凝素 豆素 A 多糖 分鐘閃爍數(shù) 激指數(shù) 35 略詞 英文 中文 甲基噻唑二苯基四唑溴鹽 二胺四乙酸 謝能 蛋白 利用磷 氨酸 氨酸 肪肝腎綜合癥 死綜合癥 面免疫球蛋白 免疫球蛋白 G 硫氰酸熒光素 脂酰乙醇胺 of 分化抗原 助性 T 細(xì)胞 胞毒性 T 細(xì)胞 制性 T 細(xì)胞 合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 轉(zhuǎn)錄 增殖細(xì)胞核抗原 介素 擾素 氧核糖核酸 使 碳酸二乙酯 補(bǔ) X 目 錄 中文摘要 英文摘要 略縮詞 第一部分 文獻(xiàn)綜述 1 1 研究歷史概述 1 2 化學(xué)結(jié)構(gòu)、物理化學(xué)特性和頡頏因子 1 3 分析方法 2 4 消化吸收和代謝 4 5 生理功能 7 6 生物素來源 10 7 缺乏癥 11 8 需要量及其影響因素 12 9 應(yīng)用效果研究 13 10 對免疫機(jī)能的影響及機(jī)理研究 14 11 有待進(jìn)一步研究的問題 16 第二部分 主要研究內(nèi)容、技術(shù)路線和方法 17 第三部分 試驗(yàn)研究 19 試驗(yàn)一 肉仔雞玉米 19 1 試驗(yàn)材料與方法 20 2 試驗(yàn)結(jié)果與討論 22 3 試驗(yàn)小結(jié) 27 試驗(yàn)二 生物素對 肉仔雞血清生理生化指標(biāo)和組織脂肪酸沉積的影響 28 1 試驗(yàn)材料與方法 29 2 試驗(yàn)結(jié)果與討論 30 3 試驗(yàn)小結(jié) 50 試驗(yàn)三 生物素對肉仔雞腸道微生物菌群的影響 51 1 試驗(yàn)材料與方法 52 2 試驗(yàn)結(jié)果與討論 53 3 試驗(yàn)小結(jié) 56 試驗(yàn)四 半純合日糧中添加生物素對肉仔雞生長性能及 血清生理生化指標(biāo)的影響 57 試驗(yàn)材料與方法 58 2 試驗(yàn)結(jié)果與討論 59 3 試驗(yàn)小結(jié) 69 試驗(yàn)五 生物素對肉仔雞免疫器官的發(fā)育和免疫功能的影響 70 1 試驗(yàn)材料與方法 71 2 試驗(yàn)結(jié)果與討論 72 3 試驗(yàn)小結(jié) 88 試驗(yàn)六 生物素促進(jìn)免疫因子 89 1 試驗(yàn)材料與方法 90 2 試驗(yàn)結(jié)果與討論 92 3 試驗(yàn)小結(jié) 95 試驗(yàn)七 生物素促進(jìn)脾臟細(xì)胞增殖的作用機(jī)理 96 1 試驗(yàn)材料與方法 97 2 試驗(yàn)結(jié)果與討論 98 3 試驗(yàn)小結(jié) 100 第四部分 論文總結(jié) 101 1 基本結(jié)論 101 2 創(chuàng)新之處 102 3 有待進(jìn)一步研究的問題 102 附錄：主要指標(biāo)測定方法 103 附錄 1：脾臟 因的 達(dá)量