密級(jí) : 論文編號(hào) : 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 博士學(xué)位論文 花生短肽制備及其功能活性研究 on of s s on of 1 摘 要 對(duì)酶解過(guò)程中 各種 影響因素進(jìn)行了系統(tǒng)研究，通過(guò)正交旋轉(zhuǎn)組合建立了短肽得率及水解度與各種影響因素的回歸模型；在此基礎(chǔ)上，選用 為花生蛋白酶解工具酶，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)確定出了 解花生蛋白的最適參數(shù)組合為水 解溫度 53，底物濃度 4%，酶用量3637U/g，水解時(shí)間 105此條件作用下，花生短肽得率為 水解度為 在花生蛋白 解的研究基礎(chǔ)上，對(duì)影響復(fù)合酶解 過(guò)程中 各種影響因素進(jìn)行了系統(tǒng)研究，通過(guò)均勻設(shè)計(jì)建立了短肽得率與各種影響因素的回歸模型；基于以上研究，選用 復(fù)合酶解 的工具酶，確定了 續(xù) 解花生蛋白的最適參數(shù)組合為 水解時(shí)間65水解溫度 57，酶底比 2061U/g， 終花生短肽得率為 水解度為 在以上研究基礎(chǔ)上， 對(duì)花生蛋白酶解動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究 。建立了 解動(dòng)力學(xué)模型： ， ， 3352.0b ， 失活 常 數(shù) 為 得 到 續(xù) 解 動(dòng) 力 學(xué) 模 型 為 ，動(dòng)力學(xué)常數(shù) 2629.0b ，失活常數(shù)為 建立了陰陽(yáng)離子混合床脫鹽法，確定了短肽脫鹽最適參數(shù)組合為：水解液過(guò)柱速度為 510 倍柱體積 /h、水解液 陽(yáng)離子樹(shù)脂比例為 3:2，在此條件下花生短肽脫鹽率和回收率均大于 80%，效果優(yōu)于傳統(tǒng)脫鹽方法 ； 指標(biāo)測(cè)定結(jié)果表明，脫鹽花生肽純度達(dá)到 分子量主要分布在 126 949間，游離氨基酸含量為 g。 采用超濾技術(shù)對(duì)花生短肽進(jìn)行分離， 確定了 一級(jí)超濾最適操作條件為操作壓力 液濃度 5% 操作溫度 35； 二級(jí)超濾最適操作條件為操作壓力 操作溫度 40。 超濾后分子量小于 1花生短肽總得率為 利用體外化學(xué)模型證明 了 花生短肽具有抗氧化和 制活性，其中 制活性非常突出， 為 鹽可以增強(qiáng)花生肽的 制活性，超 濾 則可富集 中分子量小于 1花生短肽的 制 mg/ 通過(guò) 機(jī)理研究 證明 了 分子量小于 1花生短肽對(duì) 抑制 屬于競(jìng)爭(zhēng) 性 抑制 且對(duì) 消化酶的水解具有一定的抗性；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明分子量小于 1花生短肽可顯著降低原發(fā)性高血壓大鼠的尾動(dòng)脈收縮壓（ p 對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠的心率無(wú)影響 ， 降壓作用平穩(wěn)，不會(huì)因服用劑量偏差而造成低血壓現(xiàn)象 ，且可被 完整吸收進(jìn)入血液循環(huán)進(jìn)。 通過(guò) 散點(diǎn)圖和非線性回歸模型， 證明了 蛋白質(zhì)中側(cè)鏈不帶電的極性氨基酸、堿性氨基酸和酸性氨基酸含量對(duì)蛋白質(zhì)水解物 制活性無(wú)明顯影響；疏水氨基酸、芳香族氨基酸和支鏈氨基酸含量高的蛋白質(zhì)更適合作為酶法生產(chǎn) 制肽的原料。 基于以上研究，對(duì)花生短肽制 備工藝參數(shù)進(jìn)行放大，放大實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，需 采用 截流分子量為150 納濾 對(duì)花生蛋白酶解液進(jìn)行預(yù)脫鹽 ， 納濾 過(guò)程中樣品稀釋倍數(shù)為 10 倍時(shí)可有效提高混合床脫鹽效率； 放大實(shí)驗(yàn)最終得到短肽產(chǎn)品純度均大于 85%；總得率為 其中小于 1制 為 明花生短肽制備工藝 可以應(yīng)用到 花生短肽產(chǎn)業(yè)化中。 關(guān)鍵詞： 低變性 花生蛋白 粉 ， 短肽 ，酶解，精制， 降血壓活性 2 he of H, of by on to to of 3 , % , 637 U/g, 05 pH DH by of of by on to 5 7 , 061 U/g, pH DH on of , , 3352.0b , 120P , 1 4 5 1 5 6 2629.0b , by to of V/h, pH of .5 :2. 0%, of 26 949Da of g. by to of of % 5 of 0 . of KD CE of by CE of CE of CE 3 of CE of of KD mg/KD to to CE of by BP by KD KD BP be to to of CE of of of CE of of of CE of of on of be by of 50Da of of 0 of by 5%; of CE of KD mg/So of be to 4 目 錄 圖標(biāo)索引 . I 縮 略 表 . 一章 引 言 . 1 生資源概況 . 1 國(guó)花生利用狀況 . 2 生蛋白的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與利用 . 3 生蛋白的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值 . 3 生蛋白國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀 . 3 能性短肽的生物學(xué)意義 . 5 能性短肽的吸收機(jī)制 . 5 能性短肽的功能活性 . 6 能性短肽的制備 . 9 白酶解法 . 9 成法 . 13 能性短肽的產(chǎn)業(yè)化及其存在的問(wèn)題 . 15 外功能性短肽的產(chǎn)業(yè)化 . 15 內(nèi)功能性短肽的產(chǎn)業(yè)化及存在的問(wèn)題 . 17 題意義和主要研究?jī)?nèi)容 . 17 第二章 單一酶 法制備花生短肽研究 . 19 言 . 19 料與方法 . 19 劑與材料 . 19 要設(shè)備 . 19 驗(yàn)方法 . 20 果與討論 . 23 溶性氮測(cè)定方法的改良 . 23 白酶的篩選 . 24 解花生蛋白的單因素試驗(yàn) . 25 解花生蛋白的正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn) . 28 章小結(jié) . 32 第三章 復(fù)合酶 法制備花生短肽研究 . 33 言 . 33 料 與方法 . 33 劑與材料 . 33 要設(shè)備 . 33 驗(yàn)方法 . 34 果與討論 . 36 5 花生蛋白的酶解 . 36 合酶解蛋白酶的篩選 . 36 120P 水解花生蛋白的單因素試驗(yàn) . 37 章小結(jié) . 40 第四章 花生蛋白酶解動(dòng)力學(xué)研究 . 41 言 . 41 料與方法 . 41 劑與材料 . 41 要設(shè)備 . 42 驗(yàn)方法 . 42 果與討論 . 42 解動(dòng)力學(xué)模型的推導(dǎo) . 42 力學(xué)模型參數(shù)的推導(dǎo) . 46 白酶失活常數(shù)的推導(dǎo) . 49 力學(xué)模型的驗(yàn)證 . 51 章小結(jié) . 52 第五章 花生短肽的精制 研究 . 53 言 . 53 料與方法 . 53 劑與材料 . 53 要設(shè)備 . 54 驗(yàn)方法 . 54 果與討論 . 57 生短肽的脫鹽 . 57 生短肽指標(biāo)測(cè)定 . 59 生短肽的超濾 . 61 濾產(chǎn)物分析 . 63 章小結(jié) . 66 第六章 花生短肽降血壓活性的研究 . 67 言 . 67 料與方法 . 67 劑與材料 . 67 要設(shè)備 . 68 驗(yàn)方法 . 68 果與討論 . 71 生短肽功能活性的初步研究 . 71 制對(duì)花生短肽 制活性的影響 . 73 生短肽 制活性機(jī)理研究 . 74 生短肽 體內(nèi)降血壓活性 的研究 . 76 生短肽的凝膠過(guò)濾分 離 . 79 白質(zhì)氨基酸組成與其水解物 制活性關(guān)系的分析 . 80 6 章小結(jié) . 84 第七章 花生短肽制備工藝放大研究 . 85 言 . 85 料與方法 . 85 要材料 . 85 要設(shè)備