實驗一普通光學顯微鏡的使用,一、實驗目的,1、掌握普通光學顯微鏡的構造及原理2、學習并掌握正確的使用方法3、通過永久裝片及新鮮切片觀察，掌握一些細胞結構或細胞活動的特點,二、實驗內(nèi)容,（一）顯微鏡的使用（二）永久標本片的觀察（三）制作新鮮標本片（四）作業(yè),（一）顯微鏡的使用,顯微鏡是觀察微小物體的精密儀器,1、光學顯微鏡的組成光學、照明、機械2、顯微鏡的性能指標3、顯微鏡的使用步驟,顯微鏡的組成,2、顯微鏡的性能指標,（1）分辨力（2）放大率,顯微鏡分辨能力的高低決定于光學系統(tǒng)的各種條件。被觀察的物體必須放大率高，而且清晰，物體放大后，能否呈現(xiàn)清晰的細微結構，首先取決于物鏡的性能，其次為目鏡和聚光鏡的性能。,（1）分辨力R顯微鏡能分辨兩物點間的最小距離。R=0.61/NA,數(shù)值孔徑NA也叫做鏡口率（或開口率），在物鏡和聚光器上都標有它們的數(shù)值孔徑，數(shù)值孔徑是物鏡和聚光器的主要參數(shù)，也是判斷它們性能的最重要指標。,數(shù)值孔徑可用下式表示：NA=nsin式中：n物鏡與標本之間的介質(zhì)折射率物鏡的鏡口角的1/2，即半孔徑角。,鏡口角是指從物鏡光軸上的物點發(fā)出的光線與物鏡前透鏡有效直徑的邊緣所張的角度，見圖。,鏡口角總是小于180。因為空氣的折射率為1，所以干燥物鏡的數(shù)值孔徑總是小于1，一般為0.050.95；油浸物鏡如用香柏油（折射率為1.515）浸沒，則數(shù)值孔徑最大可接近1.5。雖然理論上數(shù)值孔徑的極限等于所用浸沒介質(zhì)的折射率，但實際上從透鏡的制造技術看，是不可能達到這一極限的。通常在實用范圍內(nèi)，高級油浸物鏡的最大數(shù)值孔徑是1.4。幾種物質(zhì)的介質(zhì)的折射率如下：空氣為1.0，水為1.33，玻璃為1.5，甘油為1.47，香柏油為1.52。,可見光的波長為0.40.7微米，平均波長為0.55微米。若用數(shù)值孔為0.65的物鏡，則R=0.610.55微米/0.65=0.52微米。這表示被檢物體在0.52微米以上時可被觀察到，若小于0.52微米就不能視見。如果使用數(shù)值孔徑為1.25的物鏡，則R=0.27微米。凡被檢物體長度大于這個數(shù)值，均能視見。紫外線作光源的顯微鏡和電子顯微鏡就是利用短光波來提高分辨力以檢視較小的物體的。物鏡分辨力的高低與造象是否清楚有密切的關系。目鏡沒有這種性能。目鏡只放大物鏡所造的象。,可通過：_；_；_來提高分辨力。,減低波長,增大折射率,加大鏡口角,R值愈_，分辨力愈高，物象愈清楚。,小,練習,（2）放大率顯微鏡的放大率（V）等于物鏡放大率（V1）和目鏡放大率（V2）的乘積，即：V=V1V2,安放,對光,調(diào)焦,觀察,放片,3、顯微鏡的使用步驟,對光：以視野明亮均勻為宜。,調(diào)焦：先在低倍鏡下，以粗準焦螺旋調(diào)，再以細準焦螺旋調(diào)?？辞宄锵蠛笤俎D至高倍鏡下，調(diào)細準焦螺旋。注意：高倍鏡不要使用粗準焦螺旋調(diào)焦。,（二）永久標本片的觀察,胞間連絲有絲分裂血細胞肝細胞人染色體草履蟲人口粘膜上皮細胞植物根尖縱切,、胞間連絲,貫穿兩個相鄰的植物細胞的細胞壁，并連接兩個細胞的原生質(zhì)細絲。胞間連絲中有連絲微管(desmotubule)通過,它是由兩個細胞的光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)衍生而來。胞間連絲不僅使相鄰細胞的細胞質(zhì)膜、細胞質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)交融在一起,而且也是植物細胞間物質(zhì)運輸和傳遞刺激的重要渠道。,胞間連絲切片(柿胚乳),、有絲分裂,植物細胞有絲分裂洋蔥根尖（16條染色體）動物細胞有絲分裂馬蛔蟲受精卵（4條染色體）,洋蔥根尖細胞有絲分裂圖,1,2,4,3,馬蛔蟲子宮切片400鐵蘇木精染色,卵殼,圍卵腔,受精卵,馬蛔蟲受精卵有絲分裂圖,4,3,1,2,、血細胞,、肝細胞切片,肝板和肝血竇（示肝細胞、肝血竇、巨噬細胞）,肝細胞,NOR,、人染色體NOR,人染色體NOR,、草履蟲,、人口粘膜腔上皮細胞,植物根尖根冠、分生區(qū),、植物根尖縱切,分生區(qū),根冠,植物根尖縱切（示伸長區(qū)）,植物根尖縱切（示成熟區(qū)）,細胞骨架,（三）制作新鮮標本片,1、胞間連絲的觀察試材：紅椒（青椒）2、葉綠體的觀察試材：菠菜葉,（四）作業(yè),1、說明普通光學顯微鏡的構造2、試分析提高顯微鏡分辨力的方法3、繪圖（1）有絲分裂細胞（前、中、后、末四個時期中的三個）（2）玉米根尖縱切（示根尖結構，每個區(qū)域繪幾個代表性的細胞。）（3）胞間連絲（4）草履蟲（顯示大、小核）,實驗室規(guī)則和注意事項,1每次實驗前，必須認真預習實習指導，明確本次實驗的目的、要求和注意事項，熟悉實驗內(nèi)容、方法和步驟。對于比較復雜的實驗還應寫出簡要的實驗操作程序2上實驗課時必須攜帶講義、實驗指導、實驗報告及繪圖文具等。進入實驗室要穿好白大衣，按規(guī)定座位入座。3做實驗前，要認真檢查所用儀器藥品等是否完好、齊全，如有缺損應及時向任課教師報告，自己不得隨意調(diào)換標本、儀器等。4實驗時要遵守紀律，聽從教師指導，保持肅靜。有問題舉手提問，嚴禁在實驗室談笑喧嘩、隨意走動和進行與實驗無關的活動。,5實驗時要嚴格按操作規(guī)程進行，操作要正規(guī)，觀察、記錄要認真，自覺養(yǎng)成一絲不茍的科學作風。6要愛護儀器、標本和設備，注意節(jié)約實驗材料、藥品和水電等。如有損壞，必須向任課教師說明情況，按學校有關規(guī)定處理。7根據(jù)自己的觀察或操作按