1、冰片增強5羥色氨酸抗抑郁作用的研究作者：王榕樂,譚毓治,劉峰,胡華良【摘要】目的研究冰片對5羥色氨酸（5HTP）抗抑郁作用的影響。方法采用小鼠懸尾試驗、大鼠強迫游泳試驗，以動物不動的失望時間為指標；采用利血平致小鼠抑郁模型，以眼瞼下垂程度和體溫為觀察指標,評價冰片對5羥色氨酸抗抑郁作用的影響。結(jié)果冰片可加強5HTP縮短懸尾及強迫游泳試驗中的失望時間；可增強5HTP對抗由利血平所致的小鼠眼瞼下垂和體溫下降。結(jié)論冰片可增強5HTP的抗抑郁作用?！娟P(guān)鍵詞】冰片;5羥色氨酸；抑郁；懸尾試驗；強迫游泳試驗;眼瞼下垂Abstract:ObjectiveTostudytheroleofBorneolinen

2、hancingantidepressanteffectsof5hydroxytryptophane(5HTP).MethodsMousetailsuspensiontest,ratforcedswimmingtestandreserpineinducedmousedepressionmodelwereusedtoevaluatetheroleofborneolinenhancingantidepressanteffectsof5hydroxytryptophane(5HTP).ResultsBorneolsignificantlyenhancedtheeffectsof5HTPtoshorte

3、ndisappointmenttimeinmousetailsuspensiontestandratforceswimmingtestandtoantagonizetheptosis,hypothermiainmiceinducedbyreserpine.ConclusionBorneolenhancesantidepressanteffectsof5hydroxytryptophane.Keywords:borneol,5hydroxytryptophane,depression,tailsuspensiontest,ratforceswimmingtest抑郁癥（depression）是嚴

4、重威脅人類健康的常見疾病，也是各類精神疾病中發(fā)病率最高的疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新調(diào)查表明，全球現(xiàn)在有24億人口正為抑郁癥所苦惱。關(guān)于抑郁癥的發(fā)病機制，較為公認的有單胺遞質(zhì)假說，該假說認為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)去甲腎上腺素（NE）、5羥色胺（serotonin,5HT）等單胺遞質(zhì)的減少可導致抑郁癥的產(chǎn)生。5羥色氨酸（5HTP）是5HT的前體物質(zhì)，補充腦內(nèi)5羥色氨酸，可間接提高腦內(nèi)5HT的濃度。為了提高5HTP的腦內(nèi)濃度，增強療效，將5羥色氨酸和冰片配成復方制劑，采用多種抑郁癥的動物模型觀察其藥效,現(xiàn)報告如下。1實驗材料1.1實驗動物SPF級NIH小鼠和昆明種小鼠，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，雄性，體

5、質(zhì)量2022g，許可證號：SCXK（粵）2003-002，粵監(jiān)證字2005A011。SPF級SD大白鼠，雄性，體質(zhì)量160180g,由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（粵）2003-002，粵監(jiān)證字2005A010。12藥品及試劑5羥色氨酸(5HTP):由深圳勁創(chuàng)生物技術(shù)有限公司提供，產(chǎn)品批號為041028。冰片：廣東藥學院醫(yī)院藥房購買。利血平注射液：廣東邦民制藥廠有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號為050309。阿米替林：由常州四藥制藥有限公司提供，產(chǎn)品批號為KD9149。2實驗方法2.1小鼠懸尾試驗12.1.1實驗分組84只雄性NIH小鼠,體質(zhì)量1822g,隨機分成7組，每組12只，空白

6、對照組每天灌胃給予生理鹽水，阿米替林陽性對照組每天灌胃給予阿米替林20mg/kg，5HTP低、高劑量組分別每天灌胃給予5HTP100mg/kg、200mg/kg，5HTP低劑量+冰片組和5HTP高劑量+冰片組分別每天灌胃給予100mg/kg5HTP+50mg/kg冰片，200mg/kg5HTP+50mg/kg冰片,冰片組只給冰片50mg/kg。連續(xù)給藥3d，第4天給藥后開始實驗。2.1.2小鼠不動時間的測定實驗在上午812時進行，灌胃給藥后30min，把小鼠尾用膠布貼在木條上，使頭離地5cm，以擋板隔離動物視線，開始時小鼠努力掙脫，以后因無法逃脫而停止掙扎，呈現(xiàn)間歇性不動狀態(tài)，以連續(xù)3s以上的

7、不動時間為有效不動時間，記錄6min內(nèi)小鼠累積不動時間。2.2大鼠強迫游泳試驗2.2.1預試將雄性SD大鼠單個放入水深為15cm的玻璃圓筒中（高40cm，直徑18cm），水溫25,水深可稍作調(diào)整，以大鼠后足剛可觸及筒底又不足以支撐身體為宜。初放入時，大鼠強迫游泳并掙扎向上爬或潛入筒底，min后活動逐漸減弱，出現(xiàn)間歇性不動狀態(tài)，且時間越來越長，min后不動狀態(tài)的時間占總時間的80左右，預試15min以后將大鼠吹干。2.2.2實驗分組剔除預試中的不合格者，將合格的70只大白鼠隨機分成7組，每組10只，空白對照組每天灌胃給予生理鹽水，阿米替林陽性對照組每天灌胃給予阿米替林20mg/kg，5HTP低、

8、高劑量組分別每天灌胃給予5HTP100mg/kg、200mg/kg，5HTP低劑量+冰片組和5HTP高劑量+冰片組分別每天灌胃給予100mg/kg5HTP+50mg/kg冰片，200mg/kg5HTP+50mg/kg冰片，冰片組只給冰片50mg/kg。連續(xù)給藥3d，第4天給藥后開始實驗。2.2.3大鼠不動時間的測定實驗在上午812時進行，灌胃給藥后30min，在與預試條件完全相同的情況下，把大鼠放入圓筒中，以連續(xù)3s以上的不動時間為有效不動時間，記錄min內(nèi)大鼠強迫游泳的累積不動時間。2.3利血平所致小鼠抑郁模型(眼瞼下垂試驗)2-4將雄性昆明種小鼠80只,隨機分成8組,正常組不給任何藥物,空

9、白對照組每天灌胃給予生理鹽水，阿米替林陽性對照組每天灌胃給予阿米替林20mg/kg，5HTP低、高劑量組分別每天灌胃給予5HTP100mg/kg、200mg/kg，5HTP低劑量+冰片組和5HTP高劑量+冰片組分別每天灌胃給予100mg/kg5HTP+50mg/kg冰片，200mg/kg5HTP+50mg/kg冰片,冰片組只給冰片50mg/kg。連續(xù)給藥7d,末次給藥30min后,每只小鼠按2.5mg/kg腹腔注射利血平(0.1mL/10g),觀察小鼠眼瞼下垂情況,準確記錄1h內(nèi)的眼瞼下垂度和*體溫,觀察自發(fā)活動、耳尾顏色及腹瀉等情況。按Rubin分級標準,判斷下垂度：0度:正常開目;1度:眼

10、瞼下垂1/4;2度:眼瞼下垂1/2;3度:眼瞼下垂3/4;4度:眼瞼完全閉合。2.4統(tǒng)計學處理試驗數(shù)據(jù)用s表示，試驗中所獲試驗數(shù)據(jù)，進行多組均數(shù)間的顯著性檢驗采用方差分析（ANOVA），再進行兩兩比較,以P0.05為差異有顯著性。3結(jié)果3.1小鼠尾懸掛試驗與生理鹽水對照組相比，5HTP低、高劑量組和加冰片的5HTP低、高劑量組小鼠尾懸掛6min內(nèi)的失望時間均顯著縮短（P0.05或P0.01），并呈一定的劑量依賴性。冰片組不能縮短尾懸掛小鼠6min內(nèi)的失望時間。加冰片的5HTP低、高劑量組縮短尾懸掛小鼠6min內(nèi)的失望時間比5HTP低、高劑量組顯著增強（P0.05）。見表1。表1冰片和5羥色氨酸

11、對小鼠強迫懸尾試驗失望時間的影響（略）Tab.1Effectsofborneoland5hydroxytryptophaneondisappointmenttimeinmousetailsuspensiontest3.2大鼠強迫游泳試驗與生理鹽水對照組相比，5HTP低、高劑量組和加冰片的5HTP低、高劑量組大鼠強迫游泳試驗5min內(nèi)的失望時間均非常顯著縮短（P0.001），并呈劑量依賴性。冰片組無明顯影響。加冰片加5HTP低、高劑量組與單用5HTP低、高劑量組等劑量組比較，加冰片后對大鼠強迫游泳試驗5min內(nèi)的失望時間進一步顯著縮短（分別為P0.01和P0.05）。見表2。3.3對利血平所致小

12、鼠抑郁模型的影響小鼠給予利血平(2.5mg/kg)7d后，出現(xiàn)了明顯的上瞼下垂、運動不能和體溫下降癥狀，小鼠全部閉眼、倦縮,耳、尾皮膚顏色灰暗，并有腹瀉發(fā)生,與正常小鼠比較差異有極顯著性，說明給正常小鼠腹腔注射利血平后,可以造成抑郁動物模型。與生理鹽水對照組相比，5HTP低、高劑量組和加冰片的5HTP低、高劑量組小鼠眼瞼下垂程度和體溫下降幅度均有顯著改善（P0.05P0.001），并呈劑量依賴性。單用冰片組小鼠無明顯影響。冰片加5HTP低、高劑量組與單用5HTP低、高劑量組等劑量組比較，冰片加5HTP低、高劑量組對抗利血平引起的眼瞼下垂和體溫下降作用顯著增強（P0.05或P0.01）。見表3。

13、表2冰片和5HTP對大鼠強迫游泳試驗不動時間的影響（略）Tab.2Effectsofborneoland5hydroxytryptophaneonimmobilitytimeinratforcedswimmingtest表3冰片和5HTP對利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降的影響（略）Tab.3Effectsofborneoland5hydroxytryptophaneonptosisandhypothermiainreserpineinducedmicedepressedmodel4討論抑郁癥的病理生化基礎(chǔ)是人腦內(nèi)5羥色胺（serotonin,5HT）功能不足，濃度低。5HT在腦內(nèi)的生物合成過

14、程是：色氨酸（tryptophan，TP）在色氨酸5羥化酶的作用下，生成5羥色氨酸（5HTP），后者在芳香族L氨酸脫羧酶(AADC)作用下脫羧形成5HT。5HTP是5HT的前體物質(zhì)，補充5HTP可間接提高腦內(nèi)5HT的濃度。早期人們通過化學合成5HT供人體利用或通過增加L色氨酸的吸收來達到人體自身5HT合成量的增加，但由于生產(chǎn)合成過程的不可控性，在產(chǎn)品中夾雜著5HT的某些衍生物及其它雜質(zhì)，無形中增加了該類產(chǎn)品的不安全因素。另外由于色氨酸5羥化酶的特異性較高，只存在于5HT能神經(jīng)元中，且含量少，活性低，是合成5HT的*因子。因此通過增加L色氨酸的吸收來增加自身5HT的合成量有其局限性。5HTP在歐

15、美作為治療抑郁癥的藥物一直在使用，其名稱為Oxitriptan，在德國、法國、意大利、瑞士等國均有制劑銷售5。冰片是龍腦香科植物龍腦香樹脂的加工品，或龍腦香的樹干經(jīng)蒸餾冷卻而得到的結(jié)晶，稱“龍腦冰片”或“梅片”；由菊科多年生草本植物艾納香葉的升華物經(jīng)加工劈削而成，稱“艾片”?，F(xiàn)多用松節(jié)油、樟腦等，經(jīng)化學合成而得的冰片稱“機片”。冰片具有開竅醒神、引藥上行之功效，不僅自身能通過血腦屏障，還能夠促進其它藥物透過血腦屏障6。本研究中，冰片能顯著增強5HTP抗抑郁作用，與不加冰片的5HTP組比較，冰片加5HTP組可更顯著地縮短小鼠尾懸掛6min內(nèi)的失望時間和大鼠游泳5min內(nèi)不動時間,改善利血平所致小

16、鼠眼瞼下垂和體溫下降癥狀。單用冰片則無抗抑郁作用，提示冰片的作用可能是促進5HTP進入腦內(nèi)，從而增強5HTP抗抑郁作用。如將冰片和5HTP研制成復方的抗抑郁癥的新藥，將會提高療效，減少5HTP的用量和不良反應。5HTP除具有抗憂郁癥外，還被用于減肥、戒癮、改善睡眠、緩和經(jīng)前綜合征、治療偏頭痛等。冰片能否增強5HTP在這幾方面的療效，有待進一步研究?！緟⒖嘉墨I】1李明亞，李娟好，季寧東.石菖蒲幾種粗提取物的抗抑郁作用J.廣東藥學院學報，2004，20（4）：141-144.2張均田.現(xiàn)代藥理實驗方法M.北京:北京醫(yī)科大學中國協(xié)和醫(yī)科大*合出版社,1998：1062-1064.3ELAHMADY,MAILLETP,LAURENTE,etal.NewN(benzhydryloxyalkyl)4(carboxy/carbamoylmethyl)piperidinederivativeswithantidepress