1、2021/7/91離體心臟灌流離體心臟灌流 Cardiac Perfusion in Vitro2021/7/92離體心臟灌流的基本原理離體心臟灌流的基本原理將動物的心臟從體內(nèi)取出放入特定的生理代用液中，根據(jù)不同的實驗?zāi)康暮筒煌N屬動物特點進行恒溫、通氧或恒溫灌流及建立與動物機體內(nèi)環(huán)境基本相似的人工環(huán)境，以保證心臟維持正?；顒訝顟B(tài)。2021/7/93離體心臟灌流的意義離體心臟灌流的意義在離體條件下觀察并記錄心臟的生理活動、病理變化以及各種藥物和試劑等施加因素對其生理生化及形態(tài)變化的影響。 2021/7/94離體心臟灌流的優(yōu)點離體心臟灌流的優(yōu)點 排除在整體情況下體內(nèi)各種復(fù)雜因素的干擾，直接觀測離

2、體心臟標(biāo)本的各項指標(biāo)。易于嚴(yán)格控制實驗環(huán)境，方法簡便精確，有利于分析作用機制及對藥物的藥效作定量研究。易于獲得準(zhǔn)確、精細(xì)的結(jié)果。2021/7/95缺點和局限性 失去了機體完整統(tǒng)一的內(nèi)環(huán)境和神經(jīng)體液調(diào)控作用，失去了體內(nèi)各種組織、細(xì)胞之間的相互關(guān)系，不能完全反映心臟在整體情況下的活動規(guī)律與正常整體情況。2021/7/96離體心臟灌流方法離體心臟灌流方法兩棲類動物： 蟾蜍、青蛙等 Straub法、八木法哺乳類動物：大鼠、家兔、貓等 Langendroff 法2021/7/97經(jīng)典的離體蛙心灌流經(jīng)典的離體蛙心灌流Straub法法 灌流途徑與正常循環(huán)途徑不同，蛙心插管通過主動脈瓣直接插入心室腔內(nèi)，灌流液

3、通過同一蛙心插管進入心室腔和流出，前負(fù)荷和后負(fù)荷相等。2021/7/98方方 法法1. 破壞腦脊髓，暴露心臟。 2021/7/992. 心室插管3. 游離蛙心4. 使用張力傳感器5. 改變灌流液成分2021/7/910 不能損傷或結(jié)扎靜脈竇 插管一定要進入心室腔 出現(xiàn)作用后立即用新鮮任氏液換洗三次，以免心肌受損 蛙心插管內(nèi)液面應(yīng)保持恒定，以免影響結(jié)果注注 意意2021/7/9119、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-3-222022-3-22Tuesday, March 22, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-3-222022-3-222022-3-223/2

4、2/2022 11:33:10 PM11、人總是珍惜為得到。2022-3-222022-3-222022-3-22Mar-2222-Mar-2212、人亂于心，不寬余請。2022-3-222022-3-222022-3-22Tuesday, March 22, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-3-222022-3-222022-3-222022-3-223/22/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月22日星期二2022-3-222022-3-222022-3-2215、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年3月2022-3-222022-3-

5、222022-3-223/22/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-3-222022-3-22March 22, 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022-3-222022-3-222022-3-222022-3-222021/7/912八木法離體蛙心灌流八木法離體蛙心灌流 特點： 灌流途徑按正常循環(huán)途徑設(shè)計，一根蛙心插管插入左肝靜脈并進入靜脈竇，另一根蛙心插管僅插入主動脈，并不穿過主動脈瓣進入心室腔內(nèi)，可以根據(jù)實驗要求設(shè)定不同的前負(fù)荷和后負(fù)荷。 2021/7/913注意事項注意事項 不能損傷或結(jié)扎靜脈竇； 主動脈內(nèi)的插管不要過深以免抵住主動脈瓣 兩根插管有

6、一定相對位置，插管前要考慮好方向，插管后應(yīng)避免血管扭曲，保證灌流暢通 避免氣泡進人心臟。 2021/7/914哺乳類動物離體心臟灌流哺乳類動物離體心臟灌流 Langendorff 法法 Langendorff首次描述了保持哺乳動物離體心臟存活的方法，采用恒壓或恒流方式，從主動脈根部逆向用含氧灌流液灌流心臟，這種方式的逆向灌注關(guān)閉了主動脈瓣，使得灌注液經(jīng)冠狀動脈分布，并流入冠狀竇和右心房。2021/7/915實驗方法實驗方法 1.麻醉、取出心臟：在戊巴比妥鈉麻醉和人工呼吸的情況下迅速取出心臟，置于盛滿37 氧飽和的Ringers液的盤中，去除粘附的心包和肺組織，確定主動脈的位置，并恰好在其分支下

7、方切斷。 2. 主動脈插管：將一個玻璃或塑料的插管插入主動脈，注意插管不要過深以免損傷主動脈瓣，結(jié)扎固定。2021/7/9163. 灌流：將心臟轉(zhuǎn)移到一個雙層壁的玻璃浴槽（類似于做離體小腸平滑肌灌流用的恒溫浴槽或麥?zhǔn)显〔郏┲?，浴槽?nèi)加入Ringers液或KrebsHenseheit緩沖液，利用恒溫水浴使這一裝置保持在37。經(jīng)主動脈插管灌注氧飽和的Ringers液或KrebsHenseheit緩沖液，持續(xù)保持適當(dāng)?shù)墓嘧骸?021/7/9174. 連接記錄裝置：將一特制的金屬小鉤固定在心尖部，利用張力傳感器與多導(dǎo)記錄儀相連并描記心臟收縮曲線和測定收縮力等指標(biāo)。Langendorff離體心臟灌流裝

8、置可用于測定不同種生理學(xué)試劑和藥物的直接效應(yīng)，以及對這些藥物的拮抗作用。還可觀察冠脈流量的變化。2021/7/9182021/7/919 取心臟和插管操作需迅速。 插管不易過深，以免損傷主動脈瓣。 灌流壓大小恰當(dāng)，壓力過低則冠狀動脈灌流量不足，過高則因主動脈根部過于擴張導(dǎo)致主動脈瓣關(guān)閉不全。 灌流液溫度恒定：37 (95% O2 + 5% CO2飽和)。注意事項注意事項2021/7/920Langendorff 法的缺陷與改進法的缺陷與改進 由于在實驗過程中心室不充盈，心室不按照容量壓力曲線作功。 后來其實驗方法被不斷改進，以適應(yīng)各種不同研究的需要，如在按上述灌流方法進行灌流以保持心臟存活的同

9、時，在用另一根插管插入右心房灌流心臟，則可研究壓力容積作功關(guān)系。2021/7/921將可充水的小球囊固定在一根導(dǎo)管末端，經(jīng)肺靜脈、左心房和二尖瓣放入左心室。球囊內(nèi)注水量與左心室容積相等，相當(dāng)于前負(fù)荷大小，可根據(jù)實驗要求選擇預(yù)定的前負(fù)荷或改變前負(fù)荷。心臟收縮舒張過程給球囊一個有節(jié)律的壓力，傳導(dǎo)到壓力傳感器上。優(yōu)點：壓力變化和前負(fù)荷大小可以讀出(mmHg)，可記錄左心室收縮曲線，并記錄心率。 Gottlieb等的改進等的改進(1904) 2021/7/922在肺靜脈或左心房內(nèi)插入另一根導(dǎo)管，灌流液經(jīng)此導(dǎo)管進入左心房，并通過二尖瓣進入左心室，左心室收縮時將灌流液通過主動脈泵出，該方法可改變心臟的前后

10、負(fù)荷，測定心輸出量、壓力容積作功關(guān)系等。 Necly等的改進等的改進(1967) 2021/7/923小球囊插入左心室，通過一個插管將球囊內(nèi)的液體泵人一個體外的閉合循環(huán)通路中，并由兩個彈性瓣膜控制其單向流動。每次心臟收縮時，由球囊排除的液體量相當(dāng)于心臟的每搏輸出量，可以通過順序連接的一個流量計探頭和一個積分儀進行測量。前負(fù)荷和后負(fù)荷可以分別調(diào)整。經(jīng)主動脈逆灌進入冠狀動脈的灌注液流量也可單獨記錄下來。Bardenheuer等的改進等的改進(1983)2021/7/924其它改進其它改進 將微型壓力傳感器經(jīng)肺靜脈、左心房和二尖瓣放入左心室腔直接記錄和測定左心室內(nèi)壓力變化，如左心室收縮壓（LVSP）

11、、左心室舒張末期壓（LVEDP）和左心室壓力變化速率（LV dP/dP）等； 利用放入肺動脈內(nèi)的導(dǎo)管連接到PMH 73酸堿血氣檢測儀上的電極測定冠狀靜脈的Po2,并可結(jié)合灌流液的Po2和冠狀動脈流量計算心肌耗氧量； 經(jīng)過兩根固定在心臟表面的電極可記錄心外膜心電圖；心臟內(nèi)埋藏電極記錄希氏束電圖等。2021/7/925離體工作心臟離體工作心臟Isolated working heart preparation2021/7/9262021/7/927冠狀動脈結(jié)扎與心肌缺血再灌冠狀動脈結(jié)扎與心肌缺血再灌Scholz 等(1992,1993)在進行心肌缺血再灌實驗時，用65 mmHg恒定壓力灌注離體工作

12、心臟20 min (缺血前期)后，夾閉左冠狀動脈近端15 min，造成急性心肌缺血 (缺血期)，再重新開放血管夾再灌注并監(jiān)測30 min (再灌注期)。再灌注期發(fā)生室顫。2021/7/928取冠狀動脈流出液檢測乳酸、乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)。實驗完成后，可測量心肌組織中的糖原、乳酸、ATP和磷酸肌酐。 在缺血前或再灌注前5 min通過灌注液給予藥物觀察其對肌缺血再灌損傷的影響。在間接體內(nèi)試驗中，在準(zhǔn)備處死大鼠制備離體心臟前1 h經(jīng)口服給予實驗藥物觀察其對肌缺血再灌損傷的影響。2021/7/929大鼠心肌缺血再灌損傷（大鼠心肌缺血再灌損傷（ECG顯示室顫）顯示室顫）缺血前缺血前(對照對照) 缺血期缺血期再灌期（室顫）再灌期（室顫）2021/7/930參考文獻參考文獻Langendorff O. Pflugers Arch Ges Physiol 1895; 61:291332Bardeoheuer H，Schrader J. Relationship between myocardial oxygen consumptjon，coronary flow，and adenosine release in an improved isolated working heart preparation of gui