1、RNA的提?。═RIzol法）TRIzol試劑適用于從細(xì)胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氧酸肌/酚法、酚/SDS法、鹽酸服法、硫氧酸肌法等相比，最大特點(diǎn)就是可同時(shí)分離一個(gè)樣品的RNA/DNA/蛋日質(zhì)。TRIzol使樣品勻漿化，細(xì)胞裂解，溶解細(xì)胞內(nèi)含物，同時(shí)因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液分為水相和有機(jī)相，RNA在水相中。取出水相用異丙醴沉淀可回收RNA，用乙醴沉淀中間層可回收DNA,用異丙醴沉淀有機(jī)相可回收蛋日質(zhì)。TRIzol試齊I可用于小量樣品（50-100mg組織）也適用于大量樣品（A1g組織）?？赏瑫r(shí)處理大量不同

2、樣品，整個(gè)提取過程在一個(gè)小時(shí)內(nèi)即可完成。分離的總RNA無蛋日質(zhì)和DNA污染，可用于NorthernBlot,dotblot,ployA篩選，體外翻譯，RNase保護(hù)分析和分子克隆。在用于RT-PCR時(shí)如果兩條引物存在于一個(gè)單一外顯子內(nèi)，建議用無RNase的DNaseI處理RNA樣品，避免出現(xiàn)假陽性。共純化的DNA可用作標(biāo)準(zhǔn)，比較不同樣品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。蛋日質(zhì)可用于WesternBlotting。規(guī)格：100mL黃色透明液體，儲(chǔ)存條件：2-8C避光保存12個(gè)月，注意：請(qǐng)勿直接接觸皮膚或吞咽，以免灼傷。如接觸皮膚應(yīng)立即用洗滌劑和大量水沖洗，乙醇會(huì)加重灼傷程度。1、預(yù)防RNase

3、污染注意事項(xiàng)（1）經(jīng)常更換新手套，皮膚上常帶有的細(xì)菌、霉菌可能成為RNase的來源。（2）使用滅過菌的RNA專用塑料制品避免交叉污染。（3）RNA在TRIzol試劑中不會(huì)被RNase污染，但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150C烘烤4小時(shí)，塑料制品可在0.5MNaOH中浸泡10min,然后用水徹底清洗，高溫滅菌。即可去除RNase。（4）配置溶液應(yīng)使用無RNase的水（將水加入處理過不含RNase的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.01%v/v，放置過夜，高壓滅菌。注意DEPC有致癌之嫌，需小心操作。）試劑準(zhǔn)備：氯仿、異丙醴、75%乙醴、無RNase的水

4、或0.5%SDS（溶液均需用DEPC處理過的水配制2、注意事項(xiàng)從少量樣品（1-10mg組織）中提取RNA時(shí)可加入少許糖原以促進(jìn)RNA沉淀。例如加800mLTRIzol勻漿樣品，沉淀RNA前加5-10gRNase-free糖原。糖原會(huì)與RNA一同沉淀出來，糖原濃度不高于4mg/mL是不影響第一鏈的合成，也不影響PCR反應(yīng)。3、常見問題分析 得率低樣品裂解或勻漿處理不徹底；RNA沉淀未完全溶解。 A260/A280<1.65檢測(cè)吸光度時(shí)，RNA樣品沒有溶于水，而溶于了TE中。低離子濃度和低PH值條件下A280值偏高；樣品勻漿時(shí)加的試劑量太少；勻漿樣品時(shí)未在室溫放置5min;吸取水相時(shí)混入了有機(jī)相；RNA沉淀未完全溶解。 RNA降解組織取出后沒有馬上處理或冷凍；待提取RNA的樣品沒有保存于-60至-70C,而保存在了-5至-20C;溶液或離心管未經(jīng)RNase去除處理。 DNA污染樣品勻漿時(shí)加的試劑量太少；樣品中含有有機(jī)溶劑(如乙醴、DMS。等),強(qiáng)緩沖液或堿性溶液。蛋日聚糖和多糖污染沉淀RNA(加100%異丙醴)的過程中作以下改進(jìn)可去除這些污染，即每使用1mLTRIzol在水相中加0.25mL異丙醴和0.25mL高鹽酸溶液(0.8M檸檬酸和1.2MNaCl)混合