1、第1章 生物化學(xué)基礎(chǔ)1、一句話問題1. 生命形式雖然千差萬別，在就化學(xué)本質(zhì)而言，他們具有一致性。2. 生命體區(qū)別于非生命體的四個(gè)基本特征。3. 有機(jī)體遵行熱力學(xué)第一定律，通過增大環(huán)境的無序而使得自身有序化。4. 生命體的信息流基本類同。5. 根據(jù)SSU RNA序列細(xì)胞分為三類，細(xì)菌、古細(xì)菌和真核細(xì)胞。古細(xì)菌與真核細(xì)胞更接近。6. 線粒體和葉綠體是通過內(nèi)共生進(jìn)入真核細(xì)胞。線粒體來源于紫細(xì)菌，葉綠體來源于藍(lán)細(xì)菌。7. 細(xì)胞與細(xì)胞器-超分子復(fù)合體- 大分子 k2，結(jié)果KmKs，Km可看作是復(fù)合物ES的解離常數(shù)。因此1/Km近似地表示酶對(duì)底物親和力的大小，1/ Km值越大，表明酶對(duì)底物的親和力強(qiáng)，因?yàn)?/p>

2、1/ Km越大，Km越小，達(dá)到最大反應(yīng)速度一半所需要的底物濃度也就愈小。反之，1/ Km值越小，表明酶對(duì)底物的親和力弱。（4）Km是代謝物對(duì)多種代謝途徑選擇取向的決定因素之一。在生物體內(nèi)，一個(gè)代謝物如果可以進(jìn)入不同的代謝途徑，哪一個(gè)代謝途徑反應(yīng)的第一個(gè)酶Km最小，那么該代謝物就優(yōu)先進(jìn)入那一個(gè)途徑。（5）對(duì)于Vmax= k2ES又可以表達(dá)為Vmax= kcatEt。kcat代表單位時(shí)間內(nèi)每個(gè)酶分子將底物分子轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物的最大值，kcat稱為轉(zhuǎn)換數(shù)。對(duì)于大多數(shù)酶而言，轉(zhuǎn)換數(shù)在每秒1104范圍內(nèi)。如果一個(gè)酶有兩個(gè)競爭性底物，kcat / Km比值可衡量酶對(duì)底物的專一性。比值越大，專一性越強(qiáng)。（6）在已

3、知Km值的情況下，應(yīng)用米氏方程即可計(jì)算任意底物濃度時(shí)的反應(yīng)速度，或任何反應(yīng)速度下的底物濃度。當(dāng) V=1/2 VMAX Km=S Km單位為濃度單位。 米氏常數(shù)是酶的特征物理常數(shù)。一個(gè)酶在一定條件下，對(duì)某一底物的Km為一定值，故通過測(cè)定Km的數(shù)值，可鑒別酶。 如果一個(gè)酶可催化幾個(gè)底物，對(duì)每個(gè)底物用一個(gè)Km。 Km越小，酶對(duì)底物的親和力越大，反之已然。Km可表征酶對(duì)底物的親和力。米氏常數(shù)的求法：最常用的是LineweaverBurk的作圖法（雙倒數(shù)作圖法） 第8章 酶的活性調(diào)節(jié) 名詞、符號(hào)、結(jié)構(gòu)酶原激活：有些酶在其生物合成后即可自發(fā)地折疊成一定的構(gòu)象，表現(xiàn)出全部活性，如溶菌酶；而有些酶在生物體內(nèi)先

4、合成出來的是其無活性前體稱為酶原（enzymogen），這些酶原必需在一定的條件下（某種酶或酸），被打斷一個(gè)或幾個(gè)特定的肽鍵，從而使構(gòu)象發(fā)生一定的變化后才表現(xiàn)出活性，這一過程稱為酶原激活共價(jià)修飾：修飾酶即共價(jià)調(diào)節(jié)酶(covalent regulatory enzyme)，它可在其他酶的作用下，將其結(jié)構(gòu)進(jìn)行共價(jià)修飾，使該酶活性發(fā)生改變別構(gòu)酶：變構(gòu)酶也稱別構(gòu)酶，是一類重要的調(diào)節(jié)酶。由于其本身結(jié)構(gòu)及性質(zhì)上的特點(diǎn)，能夠調(diào)節(jié)酶促反應(yīng)速度變構(gòu)部位：有些酶除了活性中心外，還有一個(gè)或幾個(gè)部位，當(dāng)特異性分子非共價(jià)地結(jié)合到這些部位時(shí)，可改變酶的構(gòu)象 正協(xié)調(diào)：正協(xié)同效應(yīng)(positive cooperative e

5、ffect) ：可增加反應(yīng)速度的作用。具有這種效應(yīng)的物質(zhì)為正調(diào)節(jié)物（變構(gòu)激活劑）。多為別構(gòu)酶的底物副協(xié)同：負(fù)協(xié)同效應(yīng)(negative cooperative effect) ：降低反應(yīng)速度。具有這種效應(yīng)的物質(zhì)為負(fù)調(diào)節(jié)物（變構(gòu)抑制劑）。常為代謝反應(yīng)序列的終產(chǎn)物同促效應(yīng)( homotropic)：底物分子本身對(duì)別構(gòu)酶的調(diào)節(jié)作用異促效應(yīng)(heterotropic)：非底物分子的調(diào)節(jié)無對(duì)別構(gòu)酶的調(diào)節(jié)作用。它是發(fā)生在不同種類的配體的結(jié)合部位間的協(xié)同作用。可在底物、激活物、抑制劑與別構(gòu)酶的結(jié)合時(shí)發(fā)，調(diào)節(jié)物是非底物分子異促效應(yīng)別構(gòu)酶的動(dòng)力學(xué)曲線,隨著正調(diào)節(jié)劑的增加,K0.5減小。隨著別構(gòu)抑制劑濃度的增加，

6、K0.5增大。Vmax不變。齊變模型：主張別構(gòu)酶的所有亞基或全部呈緊密的、不利于結(jié)合底物的“T”狀態(tài)；或者全部是松散的、有利于結(jié)合底物的“R”狀態(tài)。這兩種狀態(tài)間的轉(zhuǎn)變對(duì)于每個(gè)亞基都是同時(shí)的、齊步發(fā)生的。與序變模型相對(duì)立。 相同配體與寡聚蛋白協(xié)同結(jié)合的一種模式，序變模型：主張酶分子中的亞基結(jié)合小分子物質(zhì)(底物或調(diào)節(jié)物)后，亞基構(gòu)象逐個(gè)地依次變化，當(dāng)?shù)孜锘蛘{(diào)節(jié)物濃度上升，升到可以與其中的一個(gè)亞基牢固地結(jié)合時(shí)，這時(shí)剩下的亞基就會(huì)按次序迅速地改變構(gòu)象，形成一個(gè)有活性的四聚體，并給出S形動(dòng)力學(xué)曲線。此模型既可解釋正調(diào)節(jié)分子的作用，也可解釋負(fù)調(diào)節(jié)分子的作用。 相同配體與寡聚蛋白協(xié)同結(jié)合的另一種模式簡答 列

7、舉酶活性調(diào)節(jié)的方式？答：溫度、PH、別構(gòu)調(diào)節(jié)、酶原激活、可逆共價(jià)修飾 別構(gòu)調(diào)控：酶分子的非催化部位與某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合后發(fā)生構(gòu)想的改變，進(jìn)而改變酶活性狀態(tài)的調(diào)節(jié)方式。酶原激活：將生物體中無活性的蛋白質(zhì)（前體/酶原）通過專一性的蛋白水解作用來活化酶和蛋白質(zhì)的過程稱為酶原激活。可逆的共價(jià)修飾：共價(jià)調(diào)節(jié)酶通過其他沒對(duì)其多肽鏈上某些基團(tuán)進(jìn)行可逆的共價(jià)修飾與非活性的互變狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)酶活性。 胰凝乳蛋白酶如何激活，如何實(shí)現(xiàn)催化？ 答：胰凝乳蛋白酶通過裂解芳香氨基送如像Phe和Tyr羰基側(cè)鏈?zhǔn)姑讣せ?。胰凝乳蛋白酶中形成催化三?lián)體來實(shí)現(xiàn)催化。 如何研究酶的活性中心，哪些氨基酸殘基組成活性中心？答：1

8、.化學(xué)修飾 非特異性修飾 特異性共價(jià)修飾 親和標(biāo)記2.動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定3.X射線晶體結(jié)構(gòu)衍射4.定點(diǎn)誘變組成活性中心的氨基酸殘基： 什么是別構(gòu)酶，催化有何特征。答：變構(gòu)酶也稱別構(gòu)酶，是一類重要的調(diào)節(jié)酶。由于其本身結(jié)構(gòu)及性質(zhì)上的特點(diǎn)，能夠調(diào)節(jié)酶促反應(yīng)速度。變構(gòu)酶主要有以下幾方面特點(diǎn)：已知的變構(gòu)酶都是寡聚酶，即含有兩個(gè)或兩個(gè)以上亞基。在酶分子上除了有和底物結(jié)合的活性部位外，還有和調(diào)節(jié)物(或效應(yīng)物)結(jié)合的調(diào)節(jié)部位(變構(gòu)部位)。這兩種部位同處在不同亞基或在同一亞基的不同部位上。具有變構(gòu)效應(yīng)。當(dāng)?shù)孜锘蛐?yīng)物和酶分子上的相應(yīng)部位結(jié)合后，會(huì)引起酶分子構(gòu)象改變從而影響酶的催化活性，這種效應(yīng)叫做變構(gòu)效應(yīng)。凡是使酶

9、活性增強(qiáng)的效應(yīng)物稱為變構(gòu)激活劑。反之，稱為變構(gòu)抑制劑，前者常常是變構(gòu)酶的底物，后者常是代謝反應(yīng)序列的終產(chǎn)物. 變構(gòu)酶的反應(yīng)初速度對(duì)底物濃度作圖不遵循米氏方程，而呈S形曲線，變構(gòu)酶常是系列反應(yīng)酶系統(tǒng)的第一個(gè)酶，或處于代謝途徑分支上的酶。變構(gòu)酶一般分子量較大，結(jié)構(gòu)更復(fù)雜，往往表現(xiàn)出一些與一般酶不同的性質(zhì)。脫敏。 蛋白酶根據(jù)活性中心和催化機(jī)制分為哪幾類？那種酶的活性中心需要金屬離子。答：1.溶菌酶2.核糖核酸酶A3.絲氨酸蛋白酶3.天冬氨酸蛋白酶5.羧肽酶A (酶活性中心需要金屬離子)第9章 輔酶與維生素名詞、符號(hào)、結(jié)構(gòu)TPP ：焦磷酸硫胺素NADPH：是一種輔酶，叫 還原型輔酶 ，學(xué)名 煙酰胺腺嘌

10、呤二核苷酸磷酸 FMN ：黃素單核苷酸FAD ：黃素腺嘌呤二核苷酸CoA ：輔酶AVc ;維生素C又叫抗壞血酸，是一種水溶性維生素。FH4 :四氫葉酸簡答 水溶性維生素和脂溶性維生素包括哪些，它們衍生的輔酶是什么，具有什么功能？水溶性 維生素B1(硫胺素) TPP -酮酸氧化脫羧維生素B2(核黃素 ) FMN、FAD 氫載體維生素PP 尼克酸（酰胺） NAD+、NADP+ 氫載體泛酸（遍多酸） CoASH 酰基載體維生素B6 吡哆醇（醛、酸） 磷酸吡哆醇（醛） 轉(zhuǎn)氨、脫羧、消旋葉酸 FH4(THFA) 一碳基團(tuán)載體生物素 羧化輔酶維生素C（抗壞血酸） 氧化還原作用硫辛酸 ?；d體、氫載體維生素

11、B12（氰鈷氨素） 變位酶輔酶、一碳基團(tuán)載體脂溶性 Vitamin A 視黃醇 ，包括A1和A2，前者主要存在于哺乳動(dòng)物和海水魚肝臟內(nèi)，后者存在于淡水魚肝臟內(nèi)，A1活性較A2為大一倍。功能：維持上皮細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)和功能；組成視色素；促進(jìn)粘多糖合成及骨的形成和生長等。Vit A缺乏的癥狀包括，皮膚和各器官表皮角質(zhì)化（蟾皮?。⒀劢悄ず徒Y(jié)膜表皮細(xì)胞退變（干眼癥，角膜軟化癥）、夜盲癥。 Vitamin D 屬于類甾醇衍生物，具環(huán)戊烷多氫菲結(jié)構(gòu)，包括D2和D3兩種，D2又稱麥角鈣化（甾）醇（ergocalciferol, calciferol），D3又稱膽鈣化（甾）醇（cholecalciferol）。

12、紫外線照射可使它們變?yōu)橄鄳?yīng)的活化形式。主要作用：調(diào)節(jié)鈣和磷的吸收及代謝，并促進(jìn)成骨作用，具抗佝僂病和抗軟骨病的作用。 Vitamin E Vit E均為苯駢二氫吡喃的衍生物被用于保護(hù)脂肪和Vit A不被氧化；保護(hù)生物膜，增加細(xì)胞對(duì)廢氣的抵抗力，使細(xì)胞免受損傷和癌變；對(duì)生育功能重要，臨床用于防治流產(chǎn)及早產(chǎn) Vitamin K 天然Vit K有K1和K2兩種，都是2-甲基-1，4萘醌的衍生物作用：與凝血作用有關(guān)，具抗出血不凝作用，主要功能是加速血液凝固、促進(jìn)肝臟合成凝血酶原所必需的因子、參與體內(nèi)氧化-還原反應(yīng)（是呼吸鏈的一部分，參與電子傳遞和氧化磷酸化） 哪些輔酶為氫的傳遞體？答：FMN FAD

13、NAD+ NADP+ 硫辛酸第10章 核酸性質(zhì)及結(jié)構(gòu)1、 名詞、符合、結(jié)構(gòu)mRNA：信使RNA，5端有一帽子結(jié)構(gòu)，3末端有一段長約200個(gè)腺苷酸的polyA尾巴。 cDNA：為具有與某RNA鏈呈互補(bǔ)的堿基序列的單鏈DNA或此DNA鏈與具有與之互補(bǔ)的堿基序列的DNA鏈所形成的DNA雙鏈。超螺旋 ：DNA三級(jí)結(jié)構(gòu)的一種形式，如果DNA分子的兩端是固定的，因?yàn)镈NA分子額外多轉(zhuǎn)幾圈使雙螺旋中存在的張力不能釋放掉，DNA分子本身就會(huì)發(fā)生扭曲用以抵消張力。這種扭曲稱為超螺旋。CDS ：是編碼一段蛋白產(chǎn)物的序列。2、 簡答1、核酸包括哪些種類，功能有何不同。答：根據(jù)所含戊糖的不同，分為含核糖的核糖核酸（R

14、NA）和含脫氧核糖的稱脫氧核糖核酸（DNA）。RNA根據(jù)分子結(jié)構(gòu)和功能的不同分為mRNA、tRNA、rRNA三類。DNA是主要的遺傳物質(zhì)，是染色體的主要成分。貯存決定物種的所有蛋白質(zhì)和RNA結(jié)構(gòu)的全部遺傳信息；RNA參與蛋白質(zhì)的生物合成。rRNA是核糖體的組成成分，mRNA主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá)，是遺傳信息傳遞過程中的橋梁。tRNA的功能是攜帶符合要求的氨基酸，2、堿基和戊糖之間是如何連接的？核苷酸和核苷酸之間如何連接的。答：嘧啶堿的第1位氮原子或嘌呤堿的第9位氮原子與戊糖的第1位碳原子通過糖苷鍵連接。兩個(gè)核苷酸以前一個(gè)核苷酸的3羥基和下一個(gè)核苷酸的5磷酸形成3,5磷酸二酯鍵連

15、接3、DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的基本特征是是什么？除B-DNA外還有哪些形式。維持DNA雙螺旋的作用力有哪些。答：兩條鏈反向平行，圍繞著中心軸盤繞成螺旋狀結(jié)構(gòu)，堿基處于螺旋內(nèi)側(cè)，而磷酸和戊糖位于外側(cè)，堿基平面與螺旋軸垂直。兩條鏈接堿基之間的氫鍵和堿基堆積力牢固地連為一體。堿基按配對(duì)規(guī)律配對(duì)。3、 DNA是遺傳物質(zhì)是如何被證明的。 答：O。Avery等人從有莢膜、菌落光滑lll型肺炎球菌的細(xì)胞中提取出純化的DNA加到無莢膜、菌落粗糙的ll型細(xì)菌培養(yǎng)物中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DNA能使一部分llR型細(xì)胞獲得合成莢膜多糖的能力。而后來的用35S和32P標(biāo)記的噬菌體T2感染大腸桿菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有32p標(biāo)記的DNA進(jìn)入大腸

16、桿菌細(xì)胞內(nèi)。而35S標(biāo)記的蛋白質(zhì)仍留在細(xì)胞外。DNA是遺傳物質(zhì)逐步被證明并被接受。第11章 核酸性質(zhì)及研究方法名詞、符合、結(jié)構(gòu)DNase：脫氧核糖核酸酶，是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內(nèi)切酶。RNase：核糖核酸酶，RNA水解酶，RNase H是一種核糖核酸內(nèi)切酶，能分解RNA/DNA雜交體系中的RNA鏈。RNase A 對(duì)RNA有水解作用，但對(duì)DNA則不起作用。 限制修飾系統(tǒng)：在細(xì)胞中，限制酶可降解外源侵入的DNA，但不降解經(jīng)修飾酶甲基化保護(hù)的自身DNA,此為限制修飾系統(tǒng)。主要由限制內(nèi)切酶和甲基化酶組成的二元系統(tǒng)。 Tm：DNA的熱變性過程中光

17、吸收達(dá)到最大吸收一半時(shí)的溫度稱為DNA的解鏈溫度( melting temperature，簡寫Tm)或熔點(diǎn)Southern-blot： Southern blot印跡法利用已知的DNA探針檢測(cè)靶標(biāo)DNA的存在及大小位置，Southern印跡法就是將電泳凝膠上的DNA片段轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上后，再進(jìn)行雜交。Northern-blot 利用DNA或RNA探針將RNA變性后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上再進(jìn)行雜交。檢測(cè)靶RNA的存在。 EB：溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，用于觀察瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。 PCR：聚合酶鏈反應(yīng)體外擴(kuò)增DNA技術(shù)， ddGTP：雙脫氧腺嘌呤核苷

18、三磷酸。簡答題 影響Tm的因素有哪些？答：DNA的均一性、G-C之含量、介質(zhì)中的離子濃度。 影響質(zhì)粒電泳行為的因素有哪些。答：DNA分子的大小、膠濃度、電壓、電極緩沖液、溫度、堿基組成、溴化乙錠。 DNA雙脫氧測(cè)序的原理雙脫氧測(cè)序原理，末端終止法答：聚合酶用模板作指導(dǎo)，不斷地將dNTP加到引物的3-OH末端，使引物延伸，合成出新的互補(bǔ)DNA鏈。如果加入一種特殊核苷酸，雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP），因它在脫氧核糖的3位置缺少一個(gè)羥基，故不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵。經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離制得的放射性自顯影區(qū)帶圖譜將為新合成的不同長度的DNA鏈中C的分布提供準(zhǔn)確信息，從而將全部C的位

19、置確定下來。類似的方法，在ddATP、ddGTP和ddTTP存在的條件下，可同時(shí)制得分別以ddA、ddG和ddT殘基為3端結(jié)尾的三組長短不一的片段。將制得的四組混合物平行地點(diǎn)加在變性聚丙烯酰胺凝膠電泳板上進(jìn)行電泳，每組制品中的各個(gè)組分將按其鏈長的不同得到分離，制得相應(yīng)的放射性自顯影圖譜。從所得圖譜即可直接讀得DNA的堿基序列. 分子雜交技術(shù)的原理及應(yīng)用。答：應(yīng)用核酸分子的變性和復(fù)性的性質(zhì)，使兩條來源不同的具有一定同源性（即具有堿基互補(bǔ)關(guān)系）的單鏈DNA分子或單鏈DNA分子與RNA分子經(jīng)退火形成雙鏈DNA分子或DNA-RNA異質(zhì)雙鏈分子(heteroduplex)的過程。三大分子雜交技術(shù)Southern blottingNorthern blottingWestern blotting- Western Blotting利用抗原抗體之間互補(bǔ)性結(jié)合的原理，利用酶連或其它方式標(biāo)記的抗體檢測(cè)靶抗原的存在及存在部位。Southern blotting 和Northern blotting利用同源單鏈核酸分子可依據(jù)堿基配對(duì)原則形成異質(zhì)雙鏈的原理，通過放射性或非放射性方法標(biāo)記一段單鏈核酸序列獲得探針，檢測(cè)與探針同源的核酸分子的研究方法。 DNA復(fù)雜度與復(fù)性速度之間的關(guān)系。答：DNA的片段越大，復(fù)性速度越小，具有的重復(fù)序列越多福星速