1、第一節(jié)第一節(jié) 發(fā)酵過程的代謝變化發(fā)酵過程的代謝變化第二節(jié)第二節(jié) 發(fā)酵過程調(diào)節(jié)控制發(fā)酵過程調(diào)節(jié)控制一次成功的發(fā)酵同時受到兩方面因素的制約，一是消費菌種的遺傳特性，二是發(fā)酵條件，因此，必須理解有關(guān)環(huán)境條件對消費菌種的影響，因地制宜地適應(yīng)菌種的特性，測定發(fā)酵過程中各種參數(shù)的變化規(guī)律，才能有效地實現(xiàn)發(fā)酵工藝的優(yōu)化和控制。由于發(fā)酵過程的復(fù)雜性，使得發(fā)酵工業(yè)消費過程的由于發(fā)酵過程的復(fù)雜性，使得發(fā)酵工業(yè)消費過程的在線監(jiān)控比其他行業(yè)落后，在線監(jiān)控比其他行業(yè)落后，其重要原因是有效檢測其重要原因是有效檢測過程狀態(tài)變量的傳感器質(zhì)量不過關(guān)，以致很難實如過程狀態(tài)變量的傳感器質(zhì)量不過關(guān)，以致很難實如今線分析和控制。今線分

2、析和控制。變化過程中的參數(shù)可分為變化過程中的參數(shù)可分為物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)、生物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)、生物學(xué)參數(shù)物學(xué)參數(shù)等，但目前較多的測定參數(shù)僅包括溫度、等，但目前較多的測定參數(shù)僅包括溫度、罐壓、空氣流量、攪拌轉(zhuǎn)速、罐壓、空氣流量、攪拌轉(zhuǎn)速、pH值、溶氧、糖含量、值、溶氧、糖含量、菌體濃度、基質(zhì)濃度等，且其中大多數(shù)為非在線測菌體濃度、基質(zhì)濃度等，且其中大多數(shù)為非在線測定。定。1、溫度：、溫度： 影響微生物的生長代謝、系統(tǒng)中酶的反響速率、溶影響微生物的生長代謝、系統(tǒng)中酶的反響速率、溶氧量、菌體的濃度變化、產(chǎn)物合成等等。氧量、菌體的濃度變化、產(chǎn)物合成等等。 注意：注意：微生物生長和產(chǎn)物合成的溫度要求不

3、同；微生物生長和產(chǎn)物合成的溫度要求不同；發(fā)酵過程中的發(fā)酵熱，包括生物熱、攪拌熱、蒸發(fā)熱、發(fā)酵過程中的發(fā)酵熱，包括生物熱、攪拌熱、蒸發(fā)熱、輻射熱等等影響發(fā)酵過程的溫度變化。輻射熱等等影響發(fā)酵過程的溫度變化。2、罐壓：、罐壓： 作用：作用：形成正壓，防止污染形成正壓，防止污染增加溶氧，但二氧化碳的溶解量也上升，增加溶氧，但二氧化碳的溶解量也上升，因此罐壓不宜太高；因此罐壓不宜太高；減少泡沫減少泡沫3、攪拌參數(shù)：、攪拌參數(shù)：轉(zhuǎn)速、功率 作用：作用：增加溶氧，但也與泡沫形成等有關(guān)；增加溶氧，但也與泡沫形成等有關(guān)；攪拌功率：攪拌功率：影響傳氧效率；影響傳氧效率；菌體損傷尤其是絲狀真菌菌體損傷尤其是絲狀真

4、菌4、空氣流量、空氣流量流量越大，泡沫越多，發(fā)酵液總體積上升，裝料系數(shù)流量越大，泡沫越多，發(fā)酵液總體積上升，裝料系數(shù)下降；下降；流量越大，空氣在罐內(nèi)停留時間短，氧的有效利用率流量越大，空氣在罐內(nèi)停留時間短，氧的有效利用率下降，耗電量上升；下降，耗電量上升；罐外相對濕度一般為罐外相對濕度一般為60%，出罐時，出罐時100%，帶走水分，帶走水分，蒸發(fā)量大。蒸發(fā)量大。5、空氣濕度、空氣濕度尤其對固態(tài)發(fā)酵重要濕度低，不易染菌，但太低，發(fā)酵液揮發(fā)速濕度低，不易染菌，但太低，發(fā)酵液揮發(fā)速度上升，液體體積下降，不利于發(fā)酵。度上升，液體體積下降，不利于發(fā)酵。以空氣濕度以空氣濕度60%利于發(fā)酵。利于發(fā)酵。6、溶

5、解氧濃度、溶解氧濃度與氧的傳遞才能關(guān)： 攪拌速率；攪拌速率；發(fā)酵罐內(nèi)的構(gòu)造擋板等；發(fā)酵罐內(nèi)的構(gòu)造擋板等；料液黏度；料液黏度；發(fā)酵液本身攝氧率發(fā)酵液本身攝氧率7、發(fā)酵液的表觀黏度：、發(fā)酵液的表觀黏度： 表觀黏度越大，溶氧才能越弱與發(fā)酵液成分有關(guān)；與液化糖化程度有關(guān)；與菌體濃度，菌種種類如有無莢膜、菌種代謝特性有關(guān)；與噬菌體污染有關(guān)。8、排氣中的氧含量和二氧化碳含量、排氣中的氧含量和二氧化碳含量 觀測微生物利用氧的情況，絕大多數(shù)微生物對氧的利用率為20%左右9、發(fā)酵液的、發(fā)酵液的OD值值 表示菌體的含量例：微生物生長曲線測定對清夜發(fā)酵而言。1、基質(zhì)濃度：、基質(zhì)濃度： 糖濃度：復(fù)原糖微生物直接利用的

6、糖。 氮濃度：氨基氮 磷：無機磷轉(zhuǎn)化有機磷 一般，碳、氮、磷等與反響中微生物生長、代謝物產(chǎn)量親密相關(guān)。殘?zhí)峭ǔ？煞从炒x物的濃度。一般而言，糖消耗率越大越好，但對于風(fēng)味要求高的發(fā)酵食品，殘?zhí)抢诟纳聘泄倨焚|(zhì)。2、pH值：值： 關(guān)系到酶活和菌體生長。3、DNA的含量：的含量： 是細(xì)胞生長的真實參數(shù)，直到菌體自溶時才改變。當(dāng)噬菌體侵染時也發(fā)生變化。4、代謝產(chǎn)物的濃度：、代謝產(chǎn)物的濃度： 調(diào)節(jié)發(fā)酵條件，中止發(fā)酵與否通常由此參數(shù)檢測來定。1、菌體形態(tài)：、菌體形態(tài)：能準(zhǔn)確反響菌體生長情況及代謝產(chǎn)物形成情況。高活力的菌體形態(tài)均一，染色時著色較均勻。不同階段菌體形態(tài)有差異2、菌體干重濕重、生物量、菌體干重濕

7、重、生物量當(dāng)培養(yǎng)基不含有不溶性物質(zhì)時，可直接用離心別離，得當(dāng)培養(yǎng)基不含有不溶性物質(zhì)時，可直接用離心別離，得到菌體干重到菌體干重當(dāng)培養(yǎng)基含有不溶性物質(zhì)時，可用密度梯度離心法當(dāng)培養(yǎng)基含有不溶性物質(zhì)時，可用密度梯度離心法對于清型發(fā)酵液，可用光密度反映菌體濃度，但不適于對于清型發(fā)酵液，可用光密度反映菌體濃度，但不適于濃料，與基質(zhì)本身的光密度有關(guān)濃料，與基質(zhì)本身的光密度有關(guān)3、菌體的比生長速率：、菌體的比生長速率：即單位時間內(nèi)單位菌體的增量。例如：t0=0時，x0=1g; t=5hr x=3g那么比生長率=3-1/5-0=0.4克/克菌.小時4、氧的比消耗速率：、氧的比消耗速率： 糖的比消耗速率： 氮的

8、比消耗速率：5、代謝產(chǎn)物的比增長速率、代謝產(chǎn)物的比增長速率 單位時間內(nèi)單位菌體所產(chǎn)生的產(chǎn)物量。 代謝曲線可以準(zhǔn)確反映發(fā)酵過程各階段的代謝變化代謝曲線可以準(zhǔn)確反映發(fā)酵過程各階段的代謝變化定義：代謝曲線是指以時間為橫坐標(biāo)，以發(fā)酵過程中各定義：代謝曲線是指以時間為橫坐標(biāo)，以發(fā)酵過程中各參數(shù)為縱坐標(biāo)用以反響發(fā)酵過程中各參數(shù)的變化情況。參數(shù)為縱坐標(biāo)用以反響發(fā)酵過程中各參數(shù)的變化情況。通過與典型代謝曲線的比較。通?？梢耘袛喟l(fā)酵進展是通過與典型代謝曲線的比較。通?？梢耘袛喟l(fā)酵進展是否正常。否正常。氧的臨界濃度：指不影響微生物呼吸強度的最低溶氧濃氧的臨界濃度：指不影響微生物呼吸強度的最低溶氧濃度。度?？偺窍陆?/p>

9、，復(fù)原糖先升后降說明酶解速度大于微生物利用葡萄糖的速度溶氧濃度下降到臨界濃度，氮下降，菌體濃度上升至最高點產(chǎn)物尚未累積 特征：菌體濃度根本恒定或略有增加；氧的比消耗速率較為恒定；可通過控制氮、磷、pH、溫度來抑制菌體生長，促進產(chǎn)物合成。產(chǎn)物合成速度持續(xù)上升，濃度達(dá)最大 特征：特征：產(chǎn)物合成速度下降；產(chǎn)物合成速度下降；由于菌體自溶釋放一些菌體物質(zhì)，使由于菌體自溶釋放一些菌體物質(zhì)，使pH上升，氨基上升，氨基氮上升氮上升。綜合以上特征，應(yīng)在前期給與豐富的營養(yǎng)，中后期適當(dāng)補料，為合成代謝產(chǎn)物提供營養(yǎng)，保證產(chǎn)物合成所需的酶量進步，當(dāng)氨基氮上升時，不再補糖或少補糖。至菌體自溶解段必須完畢發(fā)酵，否那么可能發(fā)

10、消費物降解如抗生素等，還會給發(fā)酵液后處理帶來困難。 第二節(jié)第二節(jié) 發(fā)酵過程控制發(fā)酵過程控制主要控制的是碳、氮、水、pH、磷等一碳源濃度的變化及控制一碳源濃度的變化及控制前期碳過高，浸透壓過大，不利生長；后期碳過高，會繼續(xù)生長，不利合成代謝產(chǎn)物；速效碳，利于菌體生長但過高易產(chǎn)生反響抑制；緩效碳，利于次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生，但一次投入太多，易使菌體老化。補碳常稱：“中間補糖，可有效帶來發(fā)酵單位的上升。1、補糖時間：、補糖時間：過早，刺激生長，次生代謝產(chǎn)物量下降過遲，整個系統(tǒng)能量跟不上，回復(fù)難，干擾代謝。 所以，時間宜選擇 復(fù)原糖從最頂峰開場下降時補糖補量不要超過原有最高量2、補糖數(shù)量：、補糖數(shù)量：以菌

11、體濃度不增加或略增加為原那么，當(dāng)發(fā)酵已獲得菌體為目的時，可多加，但太多容易引起菌體自溶。3、補糖方式、補糖方式連續(xù)滴加流加法，少量屢次間歇流加大量分次補糖無論何種方式，要防止不增加產(chǎn)物的現(xiàn)象出現(xiàn)。1、氮的作用、氮的作用：形成菌體蛋白、核酸、菌體代謝產(chǎn)物形成菌體蛋白、核酸、菌體代謝產(chǎn)物消長規(guī)律與糖根本相似；消長規(guī)律與糖根本相似；菌體自溶時，氮含量上升菌體自溶時，氮含量上升菌體營養(yǎng)所需的碳氮比菌體營養(yǎng)所需的碳氮比一般發(fā)酵用的工業(yè)培養(yǎng)基，碳氮比為一般發(fā)酵用的工業(yè)培養(yǎng)基，碳氮比為100：0.2-2Glu發(fā)酵：發(fā)酵：C：N=100：0.5-2時，僅菌體生長，幾乎無時，僅菌體生長，幾乎無Glu合成合成C：

12、N達(dá)達(dá)100：11時，時，Glu開場合成開場合成C：N達(dá)達(dá)100：15-21時，適于時，適于Glu合成合成極少情況下阻遏代謝產(chǎn)物的合成極少情況下阻遏代謝產(chǎn)物的合成 2、氮源種類、氮源種類速效氮：緩效氮：3、控制：、控制：在根底培養(yǎng)基中控制碳氮比用于不含氮的代謝產(chǎn)物發(fā)酵過程中補氮源一般原那么：代謝產(chǎn)物含氮時，才需要補氮1、作用：、作用：是DNA、RNA、ATP的原料促進細(xì)胞的分裂、生長2、慎用、慎用往往容易抑制次生代謝物，特別是抗生素；會改變代謝途徑；抑制抗生素前體合成；抑制磷酸酯酶的活性及作用。補無菌水因為菌體濃度上升，會造成缺氧，水用于進步溶氧。一般，接種后宜適當(dāng)進步培養(yǎng)溫度，利于孢子一般，

13、接種后宜適當(dāng)進步培養(yǎng)溫度，利于孢子萌發(fā)或微生物生長繁殖。萌發(fā)或微生物生長繁殖。菌體大量增殖，溫度開場上升。菌體大量增殖，溫度開場上升。主發(fā)酵期，溫度適當(dāng)控制低些比最適生長溫主發(fā)酵期，溫度適當(dāng)控制低些比最適生長溫度度方式：方式：夾套冷卻升濕、保溫夾套冷卻升濕、保溫10T罐以下，罐以下， 小型罐小型罐盤管式冷卻升溫盤管式冷卻升溫10T以上，大型罐以上，大型罐通常，通常，1atm，25，空氣中氧在發(fā)酵液內(nèi)，空氣中氧在發(fā)酵液內(nèi)的濃度為的濃度為0.2mMol/L,攝氧量為攝氧量為10-50mMol/L.hr。無菌空氣的獲得：發(fā)酵設(shè)備的空氣系統(tǒng)無菌空氣的獲得：發(fā)酵設(shè)備的空氣系統(tǒng)發(fā)酵過程中溶解氧的變化發(fā)酵過

14、程中溶解氧的變化初期：耗氧量大，氧濃度下降，菌體攝氧量初期：耗氧量大，氧濃度下降，菌體攝氧量達(dá)頂峰；達(dá)頂峰；中后期，耗氧量較恒定，氧濃度變化較??；中后期，耗氧量較恒定，氧濃度變化較?。缓笃?，呼吸強度下降，氧濃度上升。后期，呼吸強度下降，氧濃度上升。最適最適pHpH：細(xì)菌細(xì)菌6.5-7.56.5-7.5霉菌霉菌4.0-5.8 4.0-5.8 酵母酵母3.8-6.03.8-6.0pHpH影響發(fā)酵過程的機制影響發(fā)酵過程的機制影響酶的活性影響酶的活性影響微生物細(xì)胞膜所帶電荷影響微生物細(xì)胞膜所帶電荷影響培養(yǎng)基中某些營養(yǎng)物質(zhì)和中間代謝產(chǎn)物的離解，影響培養(yǎng)基中某些營養(yǎng)物質(zhì)和中間代謝產(chǎn)物的離解，從而影響微生物

15、對其利用。從而影響微生物對其利用。發(fā)酵過程發(fā)酵過程pHpH變化：變化：菌體生長期，菌體生長期，pHpH變化較大，因為微生物利用變化較大，因為微生物利用營養(yǎng)物質(zhì)產(chǎn)生酸或堿，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)產(chǎn)生酸或堿，使pHpH下降或上升；下降或上升；產(chǎn)物合成期，產(chǎn)物合成期，pHpH相對穩(wěn)定；相對穩(wěn)定；菌體自溶期，基質(zhì)耗盡，蛋白酶活潑，氨基菌體自溶期，基質(zhì)耗盡，蛋白酶活潑，氨基氮上升，氮上升，pHpH上升上升控制控制pHpH的方法的方法: :在根底培養(yǎng)基內(nèi)參加生理酸性或生理堿性物質(zhì)在根底培養(yǎng)基內(nèi)參加生理酸性或生理堿性物質(zhì)添加氮源物質(zhì)，如尿素，氨水等；添加氮源物質(zhì)，如尿素，氨水等；增加溶氧，進步攪拌速度中間產(chǎn)物被氧化，增

16、加溶氧，進步攪拌速度中間產(chǎn)物被氧化，pHpH上升：上升：利用緩沖溶液配制緩沖才能強、利用緩沖溶液配制緩沖才能強、pHpH變化不大變化不大的根底培養(yǎng)基。的根底培養(yǎng)基。1 1、泡沫帶來的危害、泡沫帶來的危害影響裝液量影響裝液量導(dǎo)致逃液，假設(shè)密封較好，泡沫從排氣管排出，致染導(dǎo)致逃液，假設(shè)密封較好，泡沫從排氣管排出，致染菌；假設(shè)密封不好，沿軸上升，致污染；菌；假設(shè)密封不好，沿軸上升，致污染；影響通氣攪拌的正常進展，從而阻礙菌的呼吸，造成影響通氣攪拌的正常進展，從而阻礙菌的呼吸，造成代謝異常，導(dǎo)致產(chǎn)物減少和菌體過早自溶；代謝異常，導(dǎo)致產(chǎn)物減少和菌體過早自溶；影響后提取。影響后提取。2 2、泡沫的產(chǎn)生、泡

17、沫的產(chǎn)生培養(yǎng)基成分：培養(yǎng)基成分：產(chǎn)生泡沫物質(zhì)產(chǎn)生泡沫物質(zhì)蛋白胨、玉米漿、豆餅粉、酵母膏、發(fā)酵用蛋白胨、玉米漿、豆餅粉、酵母膏、發(fā)酵用水不清潔水不清潔持泡物質(zhì)持泡物質(zhì)糖、淀粉糊精、菌體本身糖、淀粉糊精、菌體本身菌體本身有產(chǎn)生泡沫的作用，感染噬菌體或雜菌污染菌體本身有產(chǎn)生泡沫的作用，感染噬菌體或雜菌污染時泡沫更多時泡沫更多機械攪拌機械攪拌3 3、消泡、消泡物理法：改變溫度法物理法：改變溫度法改變泡沫、黏度或彈性改變泡沫、黏度或彈性泡泡沫破裂，工業(yè)上少用沫破裂，工業(yè)上少用機械法：機械法：罐內(nèi)消泡法罐內(nèi)消泡法利用消泡漿碟片式、耙式利用消泡漿碟片式、耙式罐外消泡法罐外消泡法利用旋風(fēng)別離器別離氣體、液體、

18、無氣體入缸利用旋風(fēng)別離器別離氣體、液體、無氣體入缸化學(xué)消泡法：消泡劑化學(xué)消泡法：消泡劑A.A.消泡劑特點及要求：消泡劑特點及要求：外表活性劑：泡沫本身外表張力比較低，泡沫外表張外表活性劑：泡沫本身外表張力比較低，泡沫外表張力平衡被打破力平衡被打破 在氣液界面上具有足夠大的鋪展性能和一定的親水性；在氣液界面上具有足夠大的鋪展性能和一定的親水性；在水中的溶解度極小，以便長久消泡功能；在水中的溶解度極小，以便長久消泡功能；無菌、平安，對菌體代謝沒有影響，不影響提?。粺o菌、平安，對菌體代謝沒有影響，不影響提??；來源方便，價格廉價。來源方便，價格廉價。B.B.常用消泡劑常用消泡劑天然油脂：天然油脂：豆油

19、、菜油、花生油，主要用精煉油。豆油、菜油、花生油，主要用精煉油。缺點：不含親水基團，不易鋪展缺點：不含親水基團，不易鋪展用量：用量：1-21-2聚醚類：聚醚類：優(yōu)點優(yōu)點: :不易揮發(fā)，穩(wěn)定性高；不易揮發(fā)，穩(wěn)定性高；用量：萬分之一至萬分之三用量：萬分之一至萬分之三GP:GP:用于稀發(fā)酵液用于稀發(fā)酵液GPE:GPE:消泡才能強，但作用時間短，用于稠液消泡才能強，但作用時間短，用于稠液一般將一般將GPEGPE與植物油混用與植物油混用醇類：正十一醇、聚二醇霉菌發(fā)酵用醇類：正十一醇、聚二醇霉菌發(fā)酵用硅酮類：硅酮類：須與分散劑微晶二氧化硅一起使用才行須與分散劑微晶二氧化硅一起使用才行聚二甲基硅氧烷及其衍生

20、物聚二甲基硅氧烷及其衍生物增效措施：增效措施：a.a.將泡敵與豆油將泡敵與豆油1 1：1.51.5混合使用，效果較好混合使用，效果較好b.b.將泡敵、玉米油和水比例將泡敵、玉米油和水比例1:1.5:91:1.5:9 合理判斷對進步發(fā)酵單位時間內(nèi)產(chǎn)量合理判斷對進步發(fā)酵單位時間內(nèi)產(chǎn)量和質(zhì)量有很大影響，不同類型發(fā)酵到達(dá)終和質(zhì)量有很大影響，不同類型發(fā)酵到達(dá)終點目的不同，因此對發(fā)酵終點判斷也不同點目的不同，因此對發(fā)酵終點判斷也不同放罐前的補料：放罐前的補料： 根據(jù)糖的消耗速率，計算到放罐時允許根據(jù)糖的消耗速率，計算到放罐時允許殘留量。殘留量。 一般：一般： 4050噸罐，放罐前噸罐，放罐前10小時不能補

21、料；小時不能補料； 大于大于90噸罐，放罐前噸罐，放罐前16小時不能補料小時不能補料1 1、確定放罐時間。、確定放罐時間。放罐過早：放罐過早：原料利用率不高，浪費原料利用率不高，浪費影響終產(chǎn)物提取因為有許多糖、脂肪、蛋白影響終產(chǎn)物提取因為有許多糖、脂肪、蛋白質(zhì)、微生物殘留質(zhì)、微生物殘留縮短了產(chǎn)物合成期，總產(chǎn)量下降縮短了產(chǎn)物合成期，總產(chǎn)量下降 放罐過遲：放罐過遲：增加單位產(chǎn)品的原料的能耗增加單位產(chǎn)品的原料的能耗由于菌體自溶影響過濾及產(chǎn)品提取由于菌體自溶影響過濾及產(chǎn)品提取代謝產(chǎn)物分解代謝產(chǎn)物分解2 2、判斷放罐指標(biāo)、判斷放罐指標(biāo): :產(chǎn)物的產(chǎn)量增加率開場下降產(chǎn)物量產(chǎn)物的產(chǎn)量增加率開場下降產(chǎn)物量/

22、/體積體積. .小時小時 稱增稱增長率長率菌體形態(tài)出現(xiàn)衰老胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒，部分菌體出現(xiàn)自菌體形態(tài)出現(xiàn)衰老胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒，部分菌體出現(xiàn)自溶；溶；過濾速度明顯下降用移液管汲取發(fā)酵液看其流出時間過濾速度明顯下降用移液管汲取發(fā)酵液看其流出時間殘?zhí)堑?，?fù)原糖殘?zhí)堑停瑥?fù)原糖0.5%0.5%；氨基氮上升，氨基氮上升，pHpH上升上升培養(yǎng)液的外觀和黏度等：菌絲碎片增加，黏度增加培養(yǎng)液的外觀和黏度等：菌絲碎片增加，黏度增加 3 3、放罐標(biāo)準(zhǔn)、放罐標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)物的產(chǎn)量產(chǎn)物的產(chǎn)量后提取的收率后提取的收率設(shè)備的利用率設(shè)備的利用率能源的消耗率能源的消耗率資金的周轉(zhuǎn)率資金的周轉(zhuǎn)率 定義：發(fā)酵過程中，消費菌以外的其他定義：發(fā)酵過程中

23、，消費菌以外的其他微生物侵入了發(fā)酵培養(yǎng)液均稱為雜菌污染，微生物侵入了發(fā)酵培養(yǎng)液均稱為雜菌污染，無菌檢查那么是用顯微鏡檢查，微生物培無菌檢查那么是用顯微鏡檢查，微生物培養(yǎng)檢查等發(fā)現(xiàn)分析是否染菌及染菌的根本養(yǎng)檢查等發(fā)現(xiàn)分析是否染菌及染菌的根本原因。原因。1 1、無菌檢查的方法：、無菌檢查的方法：顯微鏡檢查法：顯微鏡檢查法：革蘭氏染色，顯微鏡觀察，據(jù)形態(tài)特征區(qū)分是否有革蘭氏染色，顯微鏡觀察，據(jù)形態(tài)特征區(qū)分是否有染菌存在染菌存在平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基平板3737，24hr24hr無菌無菌劃線劃線3737，2727各培養(yǎng)各培養(yǎng)8hr8hr后觀察有無雜菌。

24、后觀察有無雜菌。肉湯培養(yǎng)檢查法肉湯培養(yǎng)檢查法酚紅肉湯培養(yǎng)基，每隔酚紅肉湯培養(yǎng)基，每隔2-32-3小時，抽樣，小時，抽樣，3737，6 6小時看培養(yǎng)基變黃或混濁小時看培養(yǎng)基變黃或混濁染菌染菌常用于檢查培養(yǎng)基和無菌空氣是否帶菌或是否被噬常用于檢查培養(yǎng)基和無菌空氣是否帶菌或是否被噬菌體污染菌體污染還可以發(fā)酵過程的異常現(xiàn)象來判斷是否染菌，如溶還可以發(fā)酵過程的異常現(xiàn)象來判斷是否染菌，如溶解氧，解氧，pHpH值、排氣中二氧化碳含量和菌體酶活的變值、排氣中二氧化碳含量和菌體酶活的變化來判斷?；瘉砼袛唷? 2、發(fā)酵染菌率的計算：、發(fā)酵染菌率的計算：是指一年內(nèi)發(fā)酵染菌的批數(shù)與總投料發(fā)酵是指一年內(nèi)發(fā)酵染菌的批數(shù)與

25、總投料發(fā)酵批數(shù)之比批數(shù)之比總?cè)揪士側(cè)揪? =發(fā)酵染菌批數(shù)發(fā)酵染菌批數(shù)/ /總投料批數(shù)總投料批數(shù)* *100% 100% 降至降至2%2%之下之下1 1、種子帶菌引起污染、種子帶菌引起污染 9.64%9.64%2 2、培養(yǎng)基未滅好引起、培養(yǎng)基未滅好引起 0.79%0.79%3 3、總過濾器失效、總過濾器失效 19.96%19.96%4 4、泡沫沖入軸封內(nèi)、泡沫沖入軸封內(nèi) 0.48%0.48%5 5、夾套和盤管穿孔、夾套和盤管穿孔 12.36%12.36%6 6、接種管、接種管 0.39%0.39%7 7、閥門滲漏、閥門滲漏 0.45%0.45%8 8、軸封密封不好、軸封密封不好 2.09%2.09%9 9、罐滅滲漏、罐滅滲漏 1.54%1.54%1010、其他設(shè)備、其他設(shè)備 10.13%10.13%1111、操作不當(dāng)、操作不當(dāng) 10.15%10.15% 其余為原因不明污染其余為原因不明污染芽孢桿菌污染：芽孢桿菌污染：培養(yǎng)基團塊，發(fā)酵罐內(nèi)存在培養(yǎng)基團塊，發(fā)酵罐內(nèi)存在死角死角非芽孢菌污染非芽孢菌污染：空氣過濾系統(tǒng)失效，設(shè)備滲空氣過濾系統(tǒng)失效，設(shè)備滲漏漏霉菌污染：霉菌污染：環(huán)境和無菌室引起環(huán)境和無菌室引起假如各罐染同一菌種，