1、臨床檢驗基礎(chǔ)血液一般檢驗臨床檢驗基礎(chǔ)血液一般檢驗主講人：宮愛華（大連醫(yī)科大學(xué)附屬二主講人：宮愛華（大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院檢驗科）院檢驗科）聯(lián)系電話：聯(lián)系電話一章第一章 血液標(biāo)本采集血液標(biāo)本采集和血涂片制備和血涂片制備重點：血重點：血標(biāo)本標(biāo)本采集方法和血涂片制備技術(shù)采集方法和血涂片制備技術(shù)難點：各種抗凝劑的優(yōu)缺點和使用選擇難點：各種抗凝劑的優(yōu)缺點和使用選擇 第一節(jié)第一節(jié) 血液標(biāo)本采集和抗凝劑選擇血液標(biāo)本采集和抗凝劑選擇血標(biāo)本：血標(biāo)本：全血：血細(xì)胞全血：血細(xì)胞+ +血漿血漿; ;臨床血液學(xué)檢查，血細(xì)胞計數(shù)、分類和形態(tài)臨床血液學(xué)檢查，血細(xì)胞計數(shù)、分類和形態(tài) 學(xué)檢查學(xué)檢查血漿：

2、全血除去血細(xì)胞；血漿病理性和生理性化學(xué)成分的測定，血漿：全血除去血細(xì)胞；血漿病理性和生理性化學(xué)成分的測定，內(nèi)分泌激素、凝血因子（鈣除外）、血栓和止血檢查內(nèi)分泌激素、凝血因子（鈣除外）、血栓和止血檢查血清：離體后血液自然凝固后析出的液體成分（除纖維蛋白原等血清：離體后血液自然凝固后析出的液體成分（除纖維蛋白原等凝血因子）；臨床化學(xué)和臨床免疫學(xué)檢查凝血因子）；臨床化學(xué)和臨床免疫學(xué)檢查 一、采血方法一、采血方法 靜脈采血法靜脈采血法部位：主要是肘靜脈。還可以在：手背、內(nèi)踝、股靜脈，幼兒部位：主要是肘靜脈。還可以在：手背、內(nèi)踝、股靜脈，幼兒可采用頸外靜脈采血可采用頸外靜脈采血采血器材：一次性注射器采血

3、器材：一次性注射器采血步驟和注意事項：止血帶壓迫時間不能過長；注射器和容采血步驟和注意事項：止血帶壓迫時間不能過長；注射器和容器必須干燥器必須干燥采血步驟采血步驟 選擇適宜靜脈，在臂選擇適宜靜脈，在臂扎上壓脈帶，于穿刺處皮扎上壓脈帶，于穿刺處皮膚做環(huán)形消毒膚做環(huán)形消毒 讓病人握拳，使靜脈讓病人握拳，使靜脈顯露。左手拇指固定穿刺顯露。左手拇指固定穿刺部位下端，右手持注射器，部位下端，右手持注射器，使針筒刻度向上，先以約使針筒刻度向上，先以約3030o o角度沿靜脈正面進(jìn)針，角度沿靜脈正面進(jìn)針，穿過皮膚刺人靜脈腔。穿過皮膚刺人靜脈腔。 見回血后見回血后，右手固定右手固定注射器，用左手緩緩抽出注射器

4、，用左手緩緩抽出注射器針?biāo)?，至所需血量注射器針?biāo)?，至所需血量后，解除壓脈帶，放松拳后，解除壓脈帶，放松拳頭，以消毒棉簽壓住穿刺頭，以消毒棉簽壓住穿刺孔，拔出針頭孔，拔出針頭 部位：中指或無名指尖內(nèi)側(cè)、耳垂；半歲以下拇指或足部位：中指或無名指尖內(nèi)側(cè)、耳垂；半歲以下拇指或足部，特殊人員視情況而定部，特殊人員視情況而定所用器材：采血針、吸管所用器材：采血針、吸管采血步驟及注意事項：避免交叉應(yīng)嚴(yán)格實行一人一針制；采血步驟及注意事項：避免交叉應(yīng)嚴(yán)格實行一人一針制；穿刺的深度的適當(dāng)，切忌用力擠壓，以免混入組織穿刺的深度的適當(dāng)，切忌用力擠壓，以免混入組織液，影響檢驗結(jié)果。液，影響檢驗結(jié)果。 皮膚采血法（毛細(xì)

5、血管采血法）皮膚采血法（毛細(xì)血管采血法）部位：部位：主要是肘靜脈。主要是肘靜脈。采血器材：采血器材：真空采血裝置，頭套式、頭皮靜脈式兩種真空采血裝置，頭套式、頭皮靜脈式兩種真空采血法（負(fù)壓采血法）真空采血法（負(fù)壓采血法）采血步驟及注意事項：采血步驟及注意事項：利用真空貯血管中的利用真空貯血管中的負(fù)壓原理，自動定量的將血液引入貯血管內(nèi)；瓶負(fù)壓原理，自動定量的將血液引入貯血管內(nèi)；瓶塞穿刺針外具有止血護套，使用時請勿將其取下；塞穿刺針外具有止血護套，使用時請勿將其取下；采集血樣后，針對有輸液要求的病患者，醫(yī)務(wù)人采集血樣后，針對有輸液要求的病患者，醫(yī)務(wù)人員可將軟座與輸液器相接進(jìn)行輸液，減少病人的員可將

6、軟座與輸液器相接進(jìn)行輸液，減少病人的靜脈穿刺次數(shù)；一次性使用，用后銷毀。靜脈穿刺次數(shù)；一次性使用，用后銷毀。 既有利于標(biāo)本的收集運送和保存，又便于防止血液既有利于標(biāo)本的收集運送和保存，又便于防止血液交叉感染，已開始在國內(nèi)推廣使用。交叉感染，已開始在國內(nèi)推廣使用。方法學(xué)評價方法學(xué)評價 靜脈采血靜脈采血 皮膚采血皮膚采血 真空采血真空采血缺點缺點 不同抗凝劑的使用，不同抗凝劑的使用， 限制了重復(fù)實驗；限制了重復(fù)實驗； 價格高價格高 改變血液性質(zhì)，影改變血液性質(zhì)，影 易于溶血、凝血易于溶血、凝血 響有形成分的形態(tài)響有形成分的形態(tài); ; 和可混入組織液和可混入組織液 環(huán)境污染環(huán)境污染優(yōu)點優(yōu)點 標(biāo)本代表

7、性大，無標(biāo)本代表性大，無 價廉、快速、操作價廉、快速、操作 減少減少溶血，操溶血，操 組織液影響，適于組織液影響，適于 簡便，標(biāo)本可直接簡便，標(biāo)本可直接 作規(guī)范，防止作規(guī)范，防止 臨床研究，可重復(fù)臨床研究，可重復(fù) 測定測定 交叉感染，保交叉感染，保 實驗和追加其他實實驗和追加其他實 護護環(huán)境環(huán)境 驗驗 質(zhì)量控制質(zhì)量控制n患者：患者：活動情況、精神狀態(tài)、藥物、年齡、性別標(biāo)本采集活動情況、精神狀態(tài)、藥物、年齡、性別標(biāo)本采集等等n采血：采血：操作規(guī)范操作規(guī)范n溶血：溶血：采集、轉(zhuǎn)移、保管、分離采集、轉(zhuǎn)移、保管、分離n血標(biāo)本處理：血標(biāo)本處理：立即送檢立即送檢n實驗結(jié)果分析：實驗結(jié)果分析：藥物、飲食的影

8、響；密切結(jié)合臨床藥物、飲食的影響；密切結(jié)合臨床 二、抗凝劑選擇二、抗凝劑選擇n抗凝：抗凝：用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固因子的活性，以阻止血液凝固 n抗凝劑：抗凝劑：能夠阻止血液凝固的物質(zhì)，稱抗凝劑能夠阻止血液凝固的物質(zhì)，稱抗凝劑 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTAEDTA）鹽）鹽抗凝原理：抗凝原理：螯合鈣離子螯合鈣離子使用方法：使用方法：15g/L15g/L濃度濃度EDTA EDTA 和血液和血液 1 1：1010適用范圍：適用范圍：對血細(xì)胞形態(tài)、血小板計數(shù)影響??；影響血小對血細(xì)胞形態(tài)、血小板計數(shù)影響??；影響血

9、小 板聚集和白細(xì)胞吞噬功能；不適合做凝血象檢驗及血小板功板聚集和白細(xì)胞吞噬功能；不適合做凝血象檢驗及血小板功能試驗?zāi)茉囼?草酸鹽草酸鹽 （sodium oxalatesodium oxalate） n草酸鈉草酸鈉 、草酸鉀、草酸銨、草酸鉀、草酸銨n原理：原理：草酸鹽可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從而阻止草酸鹽可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從而阻止血液凝固血液凝固n使用方法：使用方法：草酸鈉草酸鈉0.1mol/L 0.1mol/L 和血液和血液1 1：9 9n適用范圍適用范圍： 凝血象檢查凝血象檢查 肝素（肝素（heparinheparin） 原理：原理：低濃度時抑制因子低濃度時抑制因子aa、和

10、和PFPF3 3之間的作用，加強抗凝之間的作用，加強抗凝血酶血酶（AT-AT-）滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成, ,還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子的作用；高濃度時的作用；高濃度時阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應(yīng)阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應(yīng)適用方法：適用方法： 1g/L1g/L濃度的肝素鈉與血液濃度的肝素鈉與血液 1 1：1010優(yōu)點：優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫抗凝能力強、不影響血細(xì)胞體積、不易溶血、能耐高溫適用范圍：適用范圍：紅細(xì)胞檢驗（紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定、紅細(xì)紅細(xì)胞檢驗（紅細(xì)胞計數(shù)、血紅

11、蛋白測定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析胞比積）和多種生化分析 枸櫞酸鹽（枸櫞酸三鈉）枸櫞酸鹽（枸櫞酸三鈉）原理：原理：螯合鈣離子螯合鈣離子使用方法：使用方法：配成配成109 mmol109 mmol/L/L的濃度和血液的濃度和血液1 1：9 9 106 mmol 106 mmol/L/L的濃度和血液的濃度和血液1 1：4 4適用范圍：適用范圍：止血學(xué)檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。┲寡獙W(xué)檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。?物理方法抗凝物理方法抗凝脫纖維蛋白：脫纖維蛋白：將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動，將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而防止血成凝塊。適纖維蛋白纏繞凝固

12、于玻璃球，從而防止血成凝塊。適用于免疫學(xué)檢驗和紅斑性狼瘡細(xì)胞檢查。用于免疫學(xué)檢驗和紅斑性狼瘡細(xì)胞檢查。 血液的貯存血液的貯存 1. 1. 血液標(biāo)本檢驗前的預(yù)處理血液標(biāo)本檢驗前的預(yù)處理 n分離血清或血漿分離血清或血漿 n預(yù)溫血漿或血清預(yù)溫血漿或血清 n分離細(xì)胞分離細(xì)胞 n冷藏保存冷藏保存: :血漿在血漿在44保存保存24h24h后，某些凝血因子活性減少后，某些凝血因子活性減少95%95%。供血細(xì)胞分析儀使用的供血細(xì)胞分析儀使用的EDTA-kEDTA-k2 2抗凝全血應(yīng)保存于室溫，但不宜抗凝全血應(yīng)保存于室溫，但不宜超過超過8h8h，如果在，如果在44保存可使血小板計數(shù)結(jié)果減低。保存可使血小板計數(shù)結(jié)

13、果減低。 n冷凍保存冷凍保存: :要長時間保存血液中有活性的成分如凝血因子、酶要長時間保存血液中有活性的成分如凝血因子、酶類等，可采取分離血清或血漿后快速深低溫冷凍的方式，冷凍類等，可采取分離血清或血漿后快速深低溫冷凍的方式，冷凍的標(biāo)本一般應(yīng)避免反復(fù)凍融。的標(biāo)本一般應(yīng)避免反復(fù)凍融。 n根據(jù)檢驗項目要求有些血液標(biāo)本要求避光、隔絕空氣根據(jù)檢驗項目要求有些血液標(biāo)本要求避光、隔絕空氣等等 2. 2. 血液標(biāo)本的保存血液標(biāo)本的保存3. 3. 血液標(biāo)本檢驗后的處理血液標(biāo)本檢驗后的處理 血源性污染是醫(yī)源性污染的主要來源之一，檢驗后血源性污染是醫(yī)源性污染的主要來源之一，檢驗后的血液標(biāo)本處理不當(dāng)，其危害極大。對

14、于檢驗完畢的的血液標(biāo)本處理不當(dāng)，其危害極大。對于檢驗完畢的血液標(biāo)本首先要進(jìn)行高壓滅菌，然后再進(jìn)行無害化處血液標(biāo)本首先要進(jìn)行高壓滅菌，然后再進(jìn)行無害化處理。帶有血液的檢驗器材要用消毒液浸泡。采血用的理。帶有血液的檢驗器材要用消毒液浸泡。采血用的注射器要進(jìn)行毀形、消毒并進(jìn)行無害化處理。注射器要進(jìn)行毀形、消毒并進(jìn)行無害化處理。第二節(jié)第二節(jié) 血液涂片制備和細(xì)胞染色血液涂片制備和細(xì)胞染色 血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，特別是對于各種血液法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，特別是對于各種血液病的診斷具有重要的價值，近年來血細(xì)胞分析儀病的診斷具有

15、重要的價值，近年來血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用，血涂片的觀察也可作為判斷儀器結(jié)的廣泛應(yīng)用，血涂片的觀察也可作為判斷儀器結(jié)果的簡易方法。果的簡易方法。 血涂片的用途：血涂片的用途：血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗、網(wǎng)織紅、異常血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗、網(wǎng)織紅、異常 寄生蟲檢驗寄生蟲檢驗。 一、血液涂片制備一、血液涂片制備將推玻片向?qū)⑼撇Ｆ? 1的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻片的方向稍抽回，當(dāng)血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向的寬度后，以一定均勻的速度向2 2的方向滑動。的方向滑動。圖圖1-3 1-3 血涂片制備示意圖（上：側(cè)面觀，下：正面觀）血涂片制備示意圖（上：側(cè)面觀，下：正面觀） 血涂片質(zhì)量評價血涂片質(zhì)量評價均勻

16、、厚薄、頭體尾、邊緣、兩側(cè)均勻、厚薄、頭體尾、邊緣、兩側(cè)注意：血滴大，速度快、角度大注意：血滴大，速度快、角度大-血膜厚血膜厚一張良好血涂片的標(biāo)準(zhǔn)是：厚薄適宜、頭體尾分一張良好血涂片的標(biāo)準(zhǔn)是：厚薄適宜、頭體尾分明、細(xì)胞分布均勻、邊緣整齊、兩側(cè)及兩頭留明、細(xì)胞分布均勻、邊緣整齊、兩側(cè)及兩頭留有空隙。有空隙。 二、血液二、血液細(xì)胞染色細(xì)胞染色 染料：生物學(xué)染色劑，將生物組織細(xì)胞和病原染料：生物學(xué)染色劑，將生物組織細(xì)胞和病原體染色，在顯微鏡下觀察結(jié)構(gòu)。體染色，在顯微鏡下觀察結(jié)構(gòu)。 發(fā)色基團和助色基團使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏發(fā)色基團和助色基團使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染組織親合。色和被染組織親合。堿性染料

17、：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核 的染料。如亞甲藍(lán)、天青。的染料。如亞甲藍(lán)、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒 烷烷- -氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合 細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、 嗜酸性顆粒成分等。嗜酸性顆粒成分等。復(fù)合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料復(fù)合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料 細(xì)胞染色原理：細(xì)胞染色原理： 一般以它們的物理現(xiàn)象和一般以它們的物理現(xiàn)象和/ /或化學(xué)現(xiàn)象為依據(jù)或化學(xué)現(xiàn)

18、象為依據(jù)物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：化學(xué)作用：a. a. 染料的化學(xué)成分：助色基團的存在，堿性染料在溶染料的化學(xué)成分：助色基團的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸媒中為陽離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。b. b. 蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同 數(shù)量的氨基（數(shù)量的氨基（-NH-NH2 2）和羧基（）和羧基（

19、-COOH-COOH），同時還有其），同時還有其 它活性基團。在游離狀態(tài)時，它活性基團。在游離狀態(tài)時， -NH-NH2 2獲得一個獲得一個H H+ +變成變成 帶正電的帶正電的-NH-NH3 3+ +，而，而-COOH-COOH失去一個失去一個H H+ +變成帶負(fù)電的變成帶負(fù)電的- -COOCOO- -。分別與不同染料結(jié)合。分別與不同染料結(jié)合。 c. c. 周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pHpHpIpI（ pIpI 為等電為等電 點），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，點），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之， pHpHpIpI，則結(jié)合堿性染料，則結(jié)合堿性染料。 細(xì)胞染色法

20、的類型細(xì)胞染色法的類型 普通染色法：普通染色法： 經(jīng)物理和經(jīng)物理和/ /或化學(xué)作用的吸附、結(jié)合或化學(xué)作用的吸附、結(jié)合 熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡熒光染色法：熒光染料，熒光顯微鏡 細(xì)胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍(lán)等細(xì)胞活體染色法：活體染料如燦爛甲酚藍(lán)等 細(xì)胞化學(xué)染色法：用化學(xué)反應(yīng)顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分細(xì)胞化學(xué)染色法：用化學(xué)反應(yīng)顯示細(xì)胞內(nèi)某種成分 細(xì)胞免疫化學(xué)染色法（應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記細(xì)胞免疫化學(xué)染色法（應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)）技術(shù)） 瑞氏染色法瑞氏染色法 瑞氏染料瑞氏染料 由酸性染料伊紅（由酸性染料伊紅（eosin,Eeosin,E- -）和堿性染料亞甲藍(lán)）和堿性染料亞甲藍(lán)

21、(methylene(methylene blue,M blue,M+ +) )組成有復(fù)合染料。亞甲藍(lán)為四甲組成有復(fù)合染料。亞甲藍(lán)為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，即氯化美藍(lán)。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次即氯化美藍(lán)。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料。市售美藍(lán)中部分已被氧化為天青。伊紅通常為級染料。市售美藍(lán)中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。將伊紅和美藍(lán)溶解在甲醇中，即瑞氏染料。鈉鹽。將伊紅和美藍(lán)溶解在甲醇中，即瑞氏染料。 染色原理染色原理 細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親細(xì)胞的染色既有物理的吸

22、附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染色后，在同一親和力也不一樣。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色，稱為粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為稱為嗜堿性物質(zhì)嗜堿性物質(zhì)

23、；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)中性物質(zhì)。 M M+ +CL + NaCL + Na+ +E ME + NaCLE ME + NaCL 美藍(lán)美藍(lán) 伊紅伊紅 伊紅化美藍(lán)（瑞氏染料）伊紅化美藍(lán)（瑞氏染料） 圖圖1-4 1-4 瑞氏染色原理示意圖瑞氏染色原理示意圖 PHPH對細(xì)胞染色有影響對細(xì)胞染色有影響 細(xì)胞各種成分均為蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電細(xì)胞各種成分均為蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PHPH而定，在偏酸性環(huán)境中正電而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅

24、；在偏堿性環(huán)境中荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅；在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。因此負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對氫離子濃度細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用玻片必須清潔，無酸堿污染。配制瑞十分敏感，染色用玻片必須清潔，無酸堿污染。配制瑞氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。以致識別困難，甚至造成錯誤。 試劑試劑 WrightWright染液：瑞氏染粉染液：瑞氏染粉0

25、.1g, 0.1g, 甲醇甲醇60.0ml60.0ml甲醇：有強大的脫水力，可將細(xì)胞固定為一定形態(tài)，甲醇：有強大的脫水力，可將細(xì)胞固定為一定形態(tài)， 并使蛋白質(zhì)沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀等結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞并使蛋白質(zhì)沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀等結(jié)構(gòu)，增加細(xì)胞與染料接觸表面積，提高對染料的吸附作用，增強與染料接觸表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。染色效果。磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（PBSPBS，pH 6.4-6.8pH 6.4-6.8）：磷酸二氫鉀（無）：磷酸二氫鉀（無水）水）0.3g0.3g，磷酸氫二鈉（無水），磷酸氫二鈉（無水）0.2g, 0.2g, 蒸餾水加到蒸餾水加到1000ml1000ml。配好

26、后用磷酸鹽溶液校正配好后用磷酸鹽溶液校正pHpH，塞緊瓶口備用。，塞緊瓶口備用。 染色方法染色方法1. 1. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。2. 2. 加瑞氏染液覆蓋血膜，固定加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min1min。3. 3. 滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-105-10分鐘。分鐘。4. 4. 用清水沖洗，待干后鏡檢。用清水沖洗，待干后鏡檢。 【質(zhì)量控制【質(zhì)量控制】血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落. .染色時間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時間與

27、染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時間長些效果好。染色時間長些效果好。染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀。沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防止染料沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防止染料沉著。沖洗時間也不能長。沉著。沖洗時間也不能長。染色過淡，可復(fù)染。染色過淡，可復(fù)染。染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色. .【染色結(jié)果評價【染色結(jié)果評價】 n 正常情況：血膜外觀呈淡琥珀色。在顯微鏡下紅細(xì)胞染成粉正常情況：血膜外觀呈淡琥珀色。在顯微鏡下紅細(xì)胞染成粉紅色，在厚薄均勻處略有碟狀感。白細(xì)胞胞質(zhì)中的顆粒能顯示紅色，在厚薄均

28、勻處略有碟狀感。白細(xì)胞胞質(zhì)中的顆粒能顯示出各種細(xì)胞的特有色彩，細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。出各種細(xì)胞的特有色彩，細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。n 染色環(huán)境偏酸：則紅細(xì)胞和嗜酸性顆粒偏紅，白細(xì)胞核呈淺染色環(huán)境偏酸：則紅細(xì)胞和嗜酸性顆粒偏紅，白細(xì)胞核呈淺藍(lán)色或不著色，染色過酸藍(lán)色或不著色，染色過酸pH3.5pH3.5時，則呈現(xiàn)一片紅色，白細(xì)胞時，則呈現(xiàn)一片紅色，白細(xì)胞中除嗜酸性顆粒外均不著色。中除嗜酸性顆粒外均不著色。n 染色環(huán)境偏堿：則所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色，微偏堿者紅細(xì)胞暗紅、染色環(huán)境偏堿：則所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色，微偏堿者紅細(xì)胞暗紅、白細(xì)胞顆粒深暗。嗜酸性顆?？扇境砂岛稚踔梁谧仙蛩{(lán)色。白細(xì)

29、胞顆粒深暗。嗜酸性顆?？扇境砂岛稚踔梁谧仙蛩{(lán)色。中性顆粒也偏粗染成紫黑色，血膜過厚的地方呈綠色。中性顆粒也偏粗染成紫黑色，血膜過厚的地方呈綠色。姬姆薩染色法姬姆薩染色法 原理原理 吉姆薩染液由吉姆薩染液由天青，伊紅天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)組成。染色原理和結(jié) 果與瑞特染色法基本相同。但本法對細(xì)胞核和寄生蟲果與瑞特染色法基本相同。但本法對細(xì)胞核和寄生蟲著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更不清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更不清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長，可用復(fù)合染色法。即以著色較差。為兼顧二者之長，可用復(fù)合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min10min?；蛳扔萌鹛厝旧ㄈ旧?，再用稀釋吉姆薩復(fù)染?；蛳扔萌鹛厝旧ㄈ旧?，再用稀釋吉姆薩復(fù)染。吉姆薩染料吉姆薩染料 1.0g 1.0g 甘油甘油 66.0ml66.0ml甲醇（甲醇（ARAR） 66.0ml66.0ml 染色方法染色方法 1.