1、06年微生物復試試題一, 名詞解釋(每題3分,共30分)1,芽孢 某些細菌，特別是G+桿菌，生長到一定階段，在細胞內形成一個圓形或橢圓形的、折光性強的特殊結構稱為芽孢。2,外毒素,內毒素,類毒素 外毒素細菌細胞在生長繁殖過程中分泌到胞外培養(yǎng)液中的毒性蛋白，主要由G+細菌產生。內毒素 是G-細菌細胞壁成分中的脂多糖，細菌自溶或裂解后，脂多糖釋放出來。類毒素 一些經變性或經化學修飾而失去原有毒性而仍保留其抗原性的毒素。3,廣譜抗生素抗菌范圍廣泛的抗生素，不僅能強力抑制大部分革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌，而且能抑制立克次體、螺旋體和某些原蟲 4,TD-Ag 胸腺依賴性抗原在刺激 B 細胞產生抗體時需要

2、 T 細胞的輔助，所以稱為 TD-Ag 。（分子量大，表面多重抗原決定簇、可誘生多類Ig、可誘發(fā)體液和細胞免疫、課引起記憶反應。）5,腫瘤特異性抗原 癌細胞形成與正常細胞不同的特有物質時,則該物質稱為腫瘤特異性抗原(TSA)。是指一種腫瘤細胞特有的，不存在于正常組織細胞上的抗原。 6 ,膜攻擊復合體 7 ,T輔助細胞 8 、菌落 細胞受固體培養(yǎng)基表面或深層的限制，故不能像在液體培養(yǎng)基中那樣自由擴散，因此繁殖的菌體常聚集在一起，形成了肉眼可見的細胞集落。9、轉化（transformation）是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表型發(fā)生相應變化的現(xiàn)象。1

3、0 ,二,簡答題(每題8分,共40分)1,簡述并圖示霉菌的生活史孢子開始，經過發(fā)芽、生長成為菌絲體，再由菌絲體經過無性和有性繁殖最終又產生孢子。2,配制培養(yǎng)基時應注意哪些基本原則?1、選擇適宜的營養(yǎng)物質以滿足微生物的營養(yǎng)需要2、控制營養(yǎng)物質的濃度并注意各營養(yǎng)物的比例3、調節(jié)微生物生長所需的適宜PH4、滅菌處理并維持無菌狀態(tài)。3,質粒有哪些基本特性?質粒 通常指細菌細胞內染色體外，能自主復制的遺傳物質，共價、閉合、環(huán)狀、雙鏈的DNA分子，有超螺旋和開環(huán)式。質粒的基本特征：能自主復制不相容性所攜帶基因不是細胞生長所必需的能以宿主細胞自發(fā)消除可以從一個細菌轉到另一個細菌。4,機體的抗病毒免疫有哪些方

4、面?抗病毒免疫 病毒突破人體第一道防線后，干擾素和自然殺傷細胞（NK細胞）在第二道防線中占重要地位。 病毒進入機體后，能刺激人體的巨噬細胞、淋巴細胞以及體細胞產生干擾素。干擾素具有廣譜抗病毒作用，它能誘生抗病毒白蛋白來阻斷新病毒的產生，故有阻止病毒增殖和擴散作用。NK細胞是淋巴細胞中除T細胞、B細胞外的另一類細胞，它們占淋巴細胞總數(shù)的5-10%，一刻不停地在血循環(huán)中承擔著“巡邏”任務。一旦發(fā)現(xiàn)有不正常的細胞，立即能釋放穿孔素等將它們殺死。被病毒感染的宿主細胞屬不正常細胞，因此亦在NK細胞攻擊范圍之內。 病毒逃脫了第二道防線抵御后，就面臨第三道防線。這就是特異性體液免疫和細胞免疫。它們在對抗病毒

5、感染中各有特定作用。特異性抗體可以中和存在于宿主細胞外的病毒?？贵w與病毒結合后，病毒就不能與易感染細胞表面的相應受體結合而進入細胞，并且隨后這些抗體和病毒的結合物就被吞噬細胞吞噬降解。對已進入易感染細胞的細胞內病毒，像胞內菌一樣，抗體進不去，需要細胞免疫中的CD8 CTL細胞完成清除任務。CTL細胞破壞“藏”有病毒的感染細胞的過程是，首先CTL細胞與病毒感染細胞靠近并相互接觸，然后CTL細胞放出穿孔素、粒酶等生物活性物質，再后CTL細胞離開，最后病毒感染細胞破裂死亡，釋出的病毒則可被特異性抗體中和消滅。攻擊被病靖腥鞠赴腃TL細胞離開后，還能以同樣方式多次攻擊其他感染細胞5,簡述Ames實驗的基

6、本原理及方法.鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）的組氨酸營養(yǎng)缺陷型（his）菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復突變的細胞外，一般只能分裂幾次，形成在顯微鏡下才能見到的微菌落。受誘變劑作用后，大量細胞發(fā)生回復突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見的菌落。某些化學物質需經代謝活化才有致變作用，在測試系統(tǒng)中加入哺乳動物微粒體酶，可彌補體外試驗缺乏代謝活化系統(tǒng)之不足。鑒于化學物質的致突變作用與致癌作用之間密切相關，故此法現(xiàn)廣泛應用于致癌物的篩選。 斑點試驗 吸取測試菌增菌培養(yǎng)后的菌液0.1ml，注入融化并保溫45左右的上層軟瓊脂中，需S9活化的再加0.3ml0.

7、4mlS9mix，立即混勻，傾于底平板上，鋪平冷凝。用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣，紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態(tài)受試物，貼放于上層培養(yǎng)基的表面。同時做溶劑對照和陽性對照，分別貼放于平板上相應位置。平皿倒置于37溫箱培養(yǎng)48h。在紙片外圍長出密集菌落圈，為陽性；菌落散布，密度與自發(fā)回變相似，為陰性。 平板摻入試驗 將一定量樣液和0.1ml測試菌液均加入上層軟瓊脂中，需代謝活化的再加0.3ml0.4ml S9mix，混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝。同時做陰性和陽性對照，每種處理做3個平行。試樣通常設4個5個劑量。選擇劑量范圍開始應大些，有陽性或可疑陽性結果時，再在較窄的劑量范圍內確定劑量反應關

8、系。培養(yǎng)同上。同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比，為致變比（MR）。MR值2，且有劑量-反應關系，背景正常，則判為致突變陽性。 三, 問答題(共80分)1、實驗證明細菌對青霉素的耐藥性，如何證明耐藥性是由質粒介導的？,(10分) 利用溶菌酶和表面活性劑作用,破壞細胞壁中的糖肽層,同時使細胞膜崩解,此時細菌的染色體可以形成卷曲狀折疊結構,附著在細胞膜碎片上,隨后經過沸水浴快速作用,是蛋白迅速凝固將染色體包裹,離心除去,質粒DNA存在于上清中,加入無水乙醇,在-20放置30min,析出.瓊脂糖凝膠電泳,確定質粒DNA.取一斜面菌,培養(yǎng)過夜,取0.5ml到新鮮M9培養(yǎng)基,培養(yǎng)

9、2h,離心,冷的滅菌生理鹽水洗滌,沉淀加GaCl2制得感受態(tài)菌液,取0.1ml加入0.1ml已稀釋的DNA,冰浴30min.隨即放入42水4min,冰浴1h,加入2VM9培養(yǎng)液,37表達2h,適當稀釋,取0.1ml涂布于含氨芐青霉素和四環(huán)素的完全固體培養(yǎng)基上.同時取不加DNA的菌液及DNA,在相應的平板上對照,37培養(yǎng)。感受態(tài)菌如果生長良好，表示質粒DNA上有耐藥性基因。2、何為MHC的多態(tài)性? 試簡述MHC多態(tài)性與抗原提呈的關系.(10分)3、試比較枯草芽孢桿菌與釀酒酵母的區(qū)別,并從形態(tài)學角度加以描述(注: 試卷中兩個菌的名稱用的時拉丁文)(15分)4、如何進行滅菌抗生素中的微生物檢查?(1

10、5分) 無菌檢查法 是檢查檢查藥品與輔料是否無菌的一種方法。各種注射劑，輸液，手術眼科制劑都必須保證無菌。包括直接接種法和膜過濾法。 取該品種正文最大規(guī)格量的供試品不少于2瓶。原料藥按制劑規(guī)格項下，取最大規(guī)格量2份，分別加入足夠使抗生素滅活的無菌的酶溶液，如青霉素可用青霉素酶處理，搖勻，分別等量接種于每管裝有量40ml的需氣菌、厭氣菌，真菌培養(yǎng)基中，再做好陽性對照。培養(yǎng)。觀察是否有菌生長。 取該品種正文最大規(guī)格量的供試品不少于2瓶，原料藥按制劑規(guī)格項下，取最大規(guī)格量2份，分別按藥品項下規(guī)定的方法處理后，加入0.9%滅菌NaCl溶液至少100ml或其他適宜溶劑中，搖勻，以無菌操作裝入裝有直徑約5

11、0mm，孔徑不大于0.45+0.02m微孔濾膜的薄膜過濾器內,減壓抽干后,用0.9%滅菌NaCl溶液至少100ml或其他適宜溶劑沖洗濾膜3次,取出濾膜,分成4片,分別放在需氣菌、厭氣菌，真菌培養(yǎng)基中,還有陽性和陰性對照.5、Influential virus 的形態(tài)學特征如何? 試簡述其復制過程.; H5N1型病毒的致病性與免疫性如何?并說明如何制備其滅活疫苗?(30分) 流行性感冒病毒呈球形或絲狀，球形顆粒直徑約80-120nm，絲狀長短不一。單鏈RNA病毒。核心：-DNA和蛋白質組成的核糖核酸，分8個片斷；包膜：具脂質雙層的包膜，上有血凝素（hemagglutinin，HA）和神經氨酸酶（

12、neuraminidase，NA）等包膜子粒；負鏈H5N12007年復試 微生物學與生物技術12道名解 （60） 和  6道大題 （90）  共150分名解：（記一個算一個）1.五個拉丁文寫菌名 （釀酒酵母 枯草 肺炎鏈球 金黃色葡萄球  還一個不會）2.外毒素 內毒素 類毒素 （兩年都考了）外毒素細菌細胞在生長繁殖過程中分泌到胞外培養(yǎng)液中的毒性蛋白，主要由G+細菌產生。內毒素 是G-細菌細胞壁成分中的脂多糖，細菌自溶或裂解后，脂多糖釋放出來。類毒素 一些經變性或經化學修飾而失去原有毒性而仍保留其抗原性的毒素。3.CPE（細胞病變效應

13、） 表位4.ATCC 美國標準菌種收藏所  CFU colony formine unit ,菌落形成單位，將稀釋后的一定量的菌液通過澆注或涂布的方法，讓其內的微生物單細胞一一分散在瓊脂平板上，待培養(yǎng)后，每一活細胞就形成一個菌落。5.TSA腫瘤特異性抗原 腫瘤細胞特有的或只存在于某種腫瘤細胞不表達的新抗原。TD-Ag 胸腺依賴性抗原在刺激 B 細胞產生抗體時需要 T 細胞的輔助，所以稱為 TD-Ag 。（分子量大，表面多重抗原決定簇、可誘生多類Ig、可誘發(fā)體液和細胞免疫、課引起記憶反應。）NA 神經氨酸酶 位于病毒體包膜上的糖蛋白，以疏水末端插入脂質雙層，抗原性不穩(wěn)定，易發(fā)

14、生變異，與HA一起時甲型流感v分亞型的依據(jù)。主要功能：1.參與病毒釋放。2.促進病毒擴散（破壞細胞膜上的受體）。3.NA的相應抗體不能中和v的感染，但能抑制酶的水解。HA 血凝素 呈柱狀，能與人、鳥、豬豚鼠等動物紅細胞表面的受體相結合引起凝血，故而被稱作血凝素。6.考斯克隆7.限制酶 許多細菌用切割外來DNA的方法進行自我保護，如切割感染性噬菌體的DNA。這些細菌產生一種能切割DNA的核酸內切酶，一旦發(fā)現(xiàn)外來DNA便將其切割，因此它們有效地限制了噬菌體對細菌的感染，故這種核酸內切酶被稱為限制酶。（凡能識別并切割雙螺旋DNA分子內特定核苷酸順序的酶統(tǒng)稱為限制酶。）8.微載體培養(yǎng) 微載體以細小的顆

15、粒作為細胞載體，通過攪拌懸浮在培養(yǎng)液內，使細胞在載體表面繁殖成單層的一種細胞培養(yǎng)技術。9.固定化生長態(tài)細胞 所謂固定化細胞技術，就是將具有一定生理功能的生物細胞，例如微生物細胞、植物細胞或動物細胞等，用一定的方法將其固定，作為固體生物催化劑而加以利用的一門技術。固定化細胞與固定化酶技術一起組成了現(xiàn)代的固定化生物催化劑技術。10，11.12感受態(tài)細胞; competent cell）：理化方法誘導細胞，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)。同步生長一步生長、 二次生長 大腸桿菌在含乳糖和葡萄糖的培養(yǎng)基中，優(yōu)先利用葡萄糖，并只有當葡萄糖耗盡后才開始利用乳糖，這就形成了在兩個對數(shù)生長期中間的第

16、二個延遲期，即出現(xiàn)了“二次生長”現(xiàn)象。轉基因動物 一種生物（通常是老鼠），將外來基因轉入其體內成為其基因組的一部分。引入的基因先被分離出來并設計使其攜帶適當片段。然后將這段基因注入受精卵，對一只雌老鼠注射激素使其產生大量卵；讓一只雄老鼠與其交配使部分卵受精；將這些卵收集起來，在其卵裂前注入外來基因物質。這些卵被移植入另一個雌性體內，在那里它們發(fā)育成型。在某些卵里基因物質在隨意位點與染色體整合而成為老鼠細胞的遺傳物質。由這種卵發(fā)育成的動物將攜帶該基因從而成為轉基因動物。（將體外構建的DNA分子通過顯微注射、病毒載體轉移、或轉胚胎干細胞等方法注入動物細胞的受精卵或著床前的胚胎細胞，然后將此受精卵或

17、胚胎再植入受體動物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶外源基因的轉基因 動物。）大題：1.酵母的細胞水平分類 菌落特征 生活史（圖示） 細胞結構 作為工程菌如何培養(yǎng)菌落表面濕潤、光滑，一般較粘稠，易被挑起。一般為圓形，呈乳白色或乳黃色。細胞結構：細胞壁，細胞膜，線粒體，內質網，液泡，細胞核2.HBV（圖示病毒結構并說明）的形態(tài) 生物學特征 基因工程方法制造HBV疫苗 和 其致敏機理電鏡下呈3種顆粒，球狀，直徑約42nm，是完整的HBV顆粒；小球形顆粒，直徑約22nm，僅由HBsAg組成，不含DNA，無感染性；管形顆粒，聚合的小球形顆粒。（2）核心：dsDNA，3200bp，一長一短，長為+DNA，

18、短為-DNA；，雙層衣殼。核酸基因為雙股未閉合的環(huán)狀DNA，3.誘導酶產生的機制 誘導物作用機制 （圖示）  （估計用基因調控回答吧）4.生物技術藥物的種類 定義 。  目前我國批準上市的此類藥物 舉例說明現(xiàn)代生物學發(fā)展及其與相關學科交差融和的產物，其核心是以DNA重組技術為中心的基因工程，還包括微生物工程、生化工程、細胞工程及生物制品等領域。生物技術藥物主要是用現(xiàn)代生物技術制成的用于預防、診斷、治療的藥品。主要是重組蛋白質藥物（有IFN-，白介素2，EPO，人胰島素，生長激素）、人血液代用品、治療性抗體藥物（抗EGFR人源化單抗），重組可溶性受體和黏附

19、分子藥物（Anti-CD3 鼠源單抗）、反義寡核苷酸藥物、疫苗（乙肝疫苗，霍亂疫苗）5.分子篩  親和  離子交換 三種層析方法定義 比較  具體蛋白質樣品如何選擇此類方法分子篩將樣品混合物通過一定孔徑的凝膠固定相，由于各組分經體積的差異，使不同分子量的組分得以分離的層析方法。根據(jù)生物分子的大小來實現(xiàn)蛋白分離純化。用于脫鹽、分級分離及分子量的測定。（分離蛋白質的分子量范圍廣，不與溶質發(fā)生作用，凝膠可以反復使用）親和層析是利用生物體中大多數(shù)大分子物質具有與某些相應的分子專一性可逆結合的特性而建立的分離純化技術。適用于成分復雜且雜質含量遠

20、大于目標物的混合物中提取目標物，還可以根據(jù)其生物功能將有活性與無活性的目標物分開。(大多使用于酶與激活劑、抑制劑、底物之間的契合，抗原和抗體之間的特異性結合，激素和激素受體之間的相互作用。)離子交換法是利用溶液中各種帶電粒子與離子交換劑之間結合力的差異進行物質分離的操作方法。要進行吸附必須使目的物粒子具有較強的結合力，而其他粒子沒有結合力或者結合力弱。分辨率高、容量大、操作容易。6.基因的獲得方法，其特點比較（從目的基因獲取方面回答 如PCR 化學合成 兩種文庫 AA序列反推 DNAshuffing 等）化學合成法 PCR法 根據(jù)生物體內DNA復制原理在DNA聚合酶催化和dNTP參與下，引物依

21、賴DNA模板特異性的擴增DNA。 可以在體外特異性的擴增目的基因片段，并可以在設計引物時引入合適的酶切位點和標簽結構?；蛭膸旆?基因文庫指某一特定生物體全部基因組的克隆集合，包括所有外顯子和內含子序列。具體鳥槍法，將生物體全部基因組通過酶切分成不同的DNA片段，與載體連接構建重組子，轉化宿主細胞，從而形成生物體的全部基因組DNA片段克隆。cDNA法 提取生物體總mRNA，并以mRNA作為模板，反轉錄酶催化合成cDNA，將全部cDNA都克隆至宿主細胞而構建cDNA文庫。08年試題：具體參見帖子：按照以往學長的傳統(tǒng)將微生物與生化藥學的試題復述出來以供下一屆參考   一

22、0; 名詞解釋（14*7=98分）   1  T4噬菌體的結構填空：共五個，書上有的頭部，尾領，尾鞘，尾髓，尾絲，尾板，尾刺    寫出釀酒酵母和金葡菌（拉丁文）的屬名和中文名  2  芽孢的定義和芽孢抗性的原因含水量低，蛋白質受熱不易變性芽孢殼致密且厚，通透性低合成一些耐熱的酶類含有DPA鹽，增加耐熱性。  3  G+菌和G-菌的細胞壁結構  4 啤酒酵母的培養(yǎng)方法  5 基因文庫 基因文庫指某一特定生物

23、體全部基因組的克隆集合，包括所有外顯子和內含子序列。  6抗體庫技術   7MHC多態(tài)性的定義及其和抗原呈提的關系多態(tài)性是指在隨機婚配的群體中，染色體同一基因座上有兩種以上基因型，課編碼兩種以上的基因產物。  8 多克隆位點 質粒載體中由多個限制性內切酶識別序列排列形成的序列稱之為多克隆位點。  10 固定化細胞11、微囊化包埋法12、抗體庫技術        13、生物藥物         &#

24、160;     生物技術藥物14、插入失活效應二、二  簡答題（13*4=52）   1  末端代謝產物阻遏的分子機制和其應用  由于某種代謝途徑末端產物的過量積累而引起酶合成的阻遏稱為末端代謝產物阻遏。通常發(fā)生在合成代謝中，特別是在氨基酸、核苷酸和維生素的合成途徑中十分常見。在直線式的代謝途徑中，末端產物引起代謝途徑中的酶合成終止；分支代謝途徑中，代謝途徑分支點錢的公共酶收到所有分支途徑末端產物的共同阻遏。在大腸桿菌培養(yǎng)基中加入精氨酸，將阻遏精氨酸合成酶系。末端代謝產物阻遏在微生物

25、代謝調節(jié)中有著重要的作用，它保證了細胞內各種物質維持適當?shù)臐舛?。當微生物以合成了足量的產物，或外界加入該物質后，就停止有關酶的合成，而缺乏該物質時，又開始合成有關酶。   2  質粒的定義和Ecoli（amp+)中質粒的不穩(wěn)定的控制   3  固定化細胞和固定化酶相比的 優(yōu)點和缺點   4  按照形狀和大小進行分離的方法有那些并簡述其原理08微生物與生化藥學復試題一、名詞解釋（7*14=98）1、寫名稱P117圖535      

26、60;     看圖填空                           拉丁文屬 中文名釀（?。┚平湍窼accharomyces cerevisiaeSaccharomyces黃色葡萄球菌Staphylococcus aureusStaphylococcus金黃色葡萄球菌                    2、芽