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文檔簡介
1、實驗六 胰蛋白酶活力的測定(先打開水浴鍋,溫度設置成40攝氏度)一、實驗目的二、實驗原理 三、實驗用品四、實驗步驟五、實驗內(nèi)容六、實驗報告1一、實驗目的掌握蛋白酶活力測定的原理與基本方法。了解紫外分光光度計的原理和使用方法,學習繪制標準曲線的方法2二、實驗原理1蛋白酶是一種水解酶,它將酪蛋白水解成酪氨酸等物質(zhì)。2用紫外分光光度計可以定量的比較顏色的深淺,從而推導出酪氨酸的量,根據(jù)生成物的含量可以計算蛋白酶的活力。3.蛋白酶活力單位定義:在40C,pH11的條件下,每ml水解液分解產(chǎn)生的酪氨酸的量。3三、器材儀器和主要試劑 紫外分光光度計 0.5% 酪蛋白 100 g/mL Tyr 溶液 4四、
2、實驗操作1、酪氨酸標準曲線的制作以酪氨酸濃度g/ml數(shù)為橫坐標, A275nm為縱坐標,作出標準曲線。 52、蛋白酶活力的測定管號酶液(ml)酪蛋白(ml)三氯醋酸(ml)40水浴準確保溫10分鐘三氯醋酸(ml)酪蛋白(ml)40水浴保溫10分鐘,過濾得濾液 1號(樣品)12-3-2號(對照)1-3-26酶活力單位定義:規(guī)定在 40 , pH11 的條件下,水解酪蛋白每分鐘1 ml水解液產(chǎn)生酪氨酸的量: K ( A 樣 A 對 ) N /(t V)1. K :標準曲線上光吸收為 1 時的酪氨酸微克數(shù); A 樣 :樣品液光吸收值; 2. A 對 :對照液光吸收值; 3. N :本次實驗酶液的稀釋倍數(shù),54. t :酶促反應的時間(分),本實驗 t =10 ; 5. V :酶促反應管的總體積(毫升數(shù)),本實驗 V =5 ; 7五、思考題酶的試驗為何設對照又要設空白
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