1、不同細(xì)胞基質(zhì)培養(yǎng)狂犬病疫苗優(yōu)缺點(diǎn)探討中國(guó)藥品生物制品檢定所董關(guān)木內(nèi)容 一、狂犬病疫苗的歷史和細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的推進(jìn)二、目前三種類型的細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 1、二倍體細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 2、原代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 3、傳代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗三、疫苗中不同成分和添加劑應(yīng)關(guān)注的問題 1、人白蛋白 2、抗生素 3、明膠 4、牛血清 5、防腐劑四、暴露后處理的失敗案例內(nèi)容 一、狂犬病疫苗的歷史和細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的推進(jìn)二、目前三種類型的細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 1、原代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 2、二倍體細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 3、傳代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗三、疫苗中不同成分和添加劑應(yīng)關(guān)注的問題 1、人白蛋白 2、抗生素 3、明膠 4、牛血清 5、防腐劑四、暴露后處理的失敗案例Ra

2、bies vaccines HistoryFenje et al原代地鼠腎細(xì)胞疫苗Wiktor et al人二倍體細(xì)胞培養(yǎng)疫苗Kondo et al雞胚細(xì)胞培養(yǎng)疫苗Montagnon et alVero傳代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗David Semple成年羊腦組織疫苗Fuenzalida et al乳鼠腦組織疫苗Powel et al鴨胚疫苗1885191119551960196419651985我國(guó)目前人用狂犬病疫苗 一、我國(guó)生產(chǎn)的狂犬病疫苗 1、地鼠腎原代細(xì)胞純化疫苗aG株 2、Vero細(xì)胞純化疫苗aG株 3、Vero細(xì)胞純化疫苗CTN株 4、Vero細(xì)胞純化疫苗PM株 二、進(jìn)口疫苗 1、法國(guó)Ver

3、o細(xì)胞純化疫苗PM株 2、德國(guó)雞胚細(xì)胞純化疫苗Flury-LEP 中國(guó)藥品生物制品檢定所細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的推進(jìn)80年代由于細(xì)胞培養(yǎng)疫苗價(jià)格昂貴，僅在美國(guó)、歐洲和加拿大使用，各種疫苗的比率細(xì)胞培養(yǎng)疫苗7羊腦疫苗占64乳鼠腦疫苗占292004年WHO強(qiáng)烈推薦，停止使用腦組織疫苗，至今非洲、南美使用腦組織疫苗。中國(guó)1980年代已實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞培養(yǎng)疫苗內(nèi)容 一、狂犬病疫苗的歷史和細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的推進(jìn)二、目前三種類型的細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 1、原代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 2、二倍體細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 3、傳代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗三、疫苗中不同成分和添加劑應(yīng)關(guān)注的問題 1、人白蛋白 2、抗生素 3、明膠 4、牛血清 5、防腐劑四、暴露后處理的失敗

4、案例原代細(xì)胞 原代細(xì)胞最初來(lái)源于供體的正常組織細(xì)胞后在體外的首次培養(yǎng)的細(xì)胞，在適宜的培養(yǎng)條件下細(xì)胞可以基本不改變性狀而獲得可以連續(xù)傳代的特性，但不能無(wú)限期分裂繁殖，為有限生命，沒有腫瘤原性。原代細(xì)胞的種類和生產(chǎn)的疫苗 雞胚細(xì)胞 地鼠腎細(xì)胞原代狗腎細(xì)胞原代猴腎細(xì)胞原代兔腎細(xì)胞原代牛腎細(xì)胞狂犬病疫苗 麻疹疫苗 狂犬病疫苗、 乙型腦炎、森林腦炎、腎綜合征出血熱狂犬病疫苗 小兒麻痹疫苗風(fēng)疹疫苗輪狀病毒疫苗地鼠腎原代細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)狂犬病疫苗病毒株：aG株，須使用豚鼠腦毒種腎臟粉碎濃縮純化制備成疫苗1、病毒株中國(guó)自行建立，是國(guó)際上最早的細(xì)胞疫苗之一。2、經(jīng)歷了淡苗、濃縮苗和目前的純化疫苗三個(gè)階段。3、病毒株

5、傳代過度，免疫原性少差，濃縮倍數(shù)高，4、生產(chǎn)用毒種為豚鼠腦，有潛在的腦組織引起的過敏反應(yīng),5、滅活劑為甲醛，疫苗中的殘留可能引起注射部位疼痛。病毒滅活無(wú)菌取腎收獲病毒純化雞胚細(xì)胞疫苗（PCEC）病毒株：Flury-Lep胚胎粉碎接種方案:每次1 ml5次注射 原代雞胚細(xì)胞培養(yǎng)，無(wú)致腫瘤潛在風(fēng)險(xiǎn)； 使用SPF雞胚，無(wú)特定病原體，細(xì)胞安全性好； SPF雞蛋成本高，疫苗價(jià)格高； 疫苗純化降低了宿主細(xì)胞蛋白，但雞蛋過敏者仍須慎重使用； 病毒株在雞胚細(xì)胞中產(chǎn)量較低，生產(chǎn)成本較高。 劑量大，每劑量1ml。病毒濃縮純化SPF雞胚病毒收獲病毒滅活原代細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)： 細(xì)胞的生物學(xué)形狀基本與母體一致，染色體核型和 基

6、因基本沒有改變，沒有致腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)缺點(diǎn)： 由多種類型的細(xì)胞組成，細(xì)胞種類比較復(fù)雜，細(xì)胞間特性存在差異； 動(dòng)物的個(gè)體間存在差異，難以保證細(xì)胞質(zhì)量的一致性； 需要建立符合要求的動(dòng)物繁殖設(shè)施，污染環(huán)境有悖3R原則 原代細(xì)胞培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件要求較高 不能進(jìn)行生物反應(yīng)器現(xiàn)代化大規(guī)模培養(yǎng) 外源致病微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)較大二倍體細(xì)胞疫苗二倍體細(xì)胞具有正常二倍體（2n）染色體的數(shù)目，核型正常；在培養(yǎng)條件下，不能無(wú)限期的分裂繁殖； 無(wú)腫瘤原性，保留原體內(nèi)細(xì)胞特性。 常見的二倍體細(xì)胞： WI-38 IMR-90 MRC-5 2BS KMB-17 二倍體細(xì)胞代次的計(jì)算： 以細(xì)胞群體倍增為計(jì)算單位，當(dāng)一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿達(dá)到一定數(shù)量

7、時(shí)， 進(jìn)行細(xì)胞傳代使一瓶分種為二瓶，到該二瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿分別達(dá)到 原來(lái)的細(xì)胞數(shù)量時(shí)為一代，如1：4傳代即為二代。二倍體細(xì)胞疫苗 缺點(diǎn)： 不能無(wú)限繁殖， 培養(yǎng)條件要求高， 疫苗生產(chǎn)時(shí)病毒產(chǎn)量較低，生產(chǎn)成本較高。 目前不能大規(guī)模生物反應(yīng)器培養(yǎng) 優(yōu)點(diǎn)： 為正常二倍體細(xì)胞，無(wú)腫瘤原性， 可建立細(xì)胞庫(kù) 無(wú)外源因子污染，質(zhì)量可高度控制， 生產(chǎn)純化時(shí)無(wú)須考慮細(xì)胞 DNA 不用大量動(dòng)物 與人抗原性一致，過敏反應(yīng)小，安全可靠。 人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗 (HDCV)過濾超率滅活純化穩(wěn)定 凍干細(xì)胞種子批MRC 5 第16 代病毒株P(guān)M 1503 - 3 M終產(chǎn)品 1 ml/劑優(yōu)點(diǎn) WHO 推薦的狂犬病疫苗 金標(biāo)準(zhǔn) 免疫

8、原性高 PET體現(xiàn)的效價(jià)高 安全性高缺點(diǎn) 不可能大規(guī)模生產(chǎn) 病毒產(chǎn)量低 生產(chǎn)時(shí)間長(zhǎng) 需要病毒抗原高度濃縮 復(fù)雜的時(shí)間控制使生產(chǎn)難度加大 價(jià)格昂貴傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞稱細(xì)胞系（XXXcell line)，最初來(lái)源與正常組織或腫瘤組織，在原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的基礎(chǔ)上進(jìn)行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)條件合適時(shí)可以連續(xù)傳代，在某一傳代過程中改變了原來(lái)的形態(tài)和性狀，可以無(wú)限期傳代，傳代細(xì)胞系往往具有致腫瘤性用于疫苗生產(chǎn)和研發(fā)的傳代細(xì)胞 Vero BHK CHO等對(duì)傳代細(xì)胞的關(guān)注 年代 管理機(jī)構(gòu) 細(xì)胞 1954 AF流行病學(xué)委員會(huì) 猴腎細(xì)胞 1967 NIH 考慮使用人二倍體細(xì)胞 1978 NIH 考慮腫瘤細(xì)胞（如Namalw

9、a 細(xì)胞產(chǎn)干擾素） 1984 NIH/FDA DNA、病毒、轉(zhuǎn)化蛋白等DNA10pg/劑 1986 WHO專門研究小組 DNA、病毒、轉(zhuǎn)化蛋白等DNA100pg/劑 1996 WHO ECBS DNA 10ng/劑 1999 FDA NIH WHO IABS DNA風(fēng)險(xiǎn)未能明確 2004 FDA NIH WHO IABS 表述統(tǒng)一一致 2006 WHO 開始修訂WHO細(xì)胞基質(zhì)的規(guī)程 優(yōu)點(diǎn)： 傳代細(xì)胞系，幾乎可以取之不竭已經(jīng)全面檢定，其特性符合人用疫苗的生產(chǎn)，細(xì)胞庫(kù)一經(jīng) 建立，細(xì)胞質(zhì)量可高度控制，該細(xì)胞生長(zhǎng)條件要求不高，容易培養(yǎng)繁殖；可用生物反應(yīng)器大規(guī)模生產(chǎn)大多數(shù)病毒能在該細(xì)胞系中復(fù)制繁殖疫苗生

10、產(chǎn)是不要?jiǎng)游?缺點(diǎn)： 由于是傳代細(xì)胞系，有一定的致腫瘤性；疫苗必須純化，且細(xì)胞DNA含量須達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)（10ng/劑）目前不適合活疫苗的生產(chǎn) 傳代細(xì)胞用于疫苗生產(chǎn)的優(yōu)缺點(diǎn) 生物反應(yīng)器大規(guī)模細(xì)胞懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)疫苗細(xì)胞庫(kù)中取種子細(xì)胞復(fù)蘇從方瓶中擴(kuò)增至轉(zhuǎn)瓶擴(kuò)增到微載體大罐接種病毒種子 aG株（中國(guó)）CTN株（中國(guó)）PV株（巴斯德）PM株（巴斯德）多次收獲病毒液濃縮，滅活純化成品疫苗 DNA 病毒性滅活疫苗 關(guān)鍵點(diǎn)3-1 生產(chǎn)工序和/或步驟細(xì) 胞毒 種處理動(dòng)物，選取所用組織清洗組織，剪碎，用自然沉降法清洗加胰酶消化組織培養(yǎng)液分散成細(xì)胞培養(yǎng)液，牛血清，抗生素，調(diào)節(jié)pH分裝轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)預(yù)留5或至少500ml作對(duì)照觀

11、察14天或至病毒液收獲結(jié)束毒種檢定無(wú)菌試驗(yàn) 浸 泡洗 換清除牛血清抗菌素培 養(yǎng)收獲病毒液 可多次病毒滴定無(wú)菌試驗(yàn)支原體不同滅活劑、滅活方法、程序濃 縮滅 活膜過濾，截留量大小、倍數(shù)滅活驗(yàn)證試驗(yàn)最敏感方法立即取樣合 并傳代細(xì)胞擴(kuò)增 接種無(wú)牛血清培養(yǎng)液傳代細(xì)胞工作庫(kù)細(xì)胞復(fù)蘇轉(zhuǎn)下頁(yè) 病毒性滅活疫苗 關(guān)鍵點(diǎn)3-2 生產(chǎn)工序和/或步驟柱層析 單柱、多柱 區(qū)帶離心其它方法純 化無(wú)菌試驗(yàn)抗原含量測(cè)定蛋白量測(cè)定牛清蛋白DNA配 制人白蛋白防腐劑佐劑半成品 成 品抗生素 NO凍 干液 體鑒別試驗(yàn)外觀化學(xué) pH 防腐劑 水份 佐劑效力試驗(yàn)熱穩(wěn)定試驗(yàn)無(wú)菌試驗(yàn)細(xì)菌內(nèi)毒素或熱源異常毒性等無(wú)菌試 驗(yàn)分 裝當(dāng)日分裝完畢大罐

12、可二天Vero細(xì)胞疫苗質(zhì) 量 標(biāo) 準(zhǔn)： 80年代 美國(guó) FDA 10pg /劑 歐盟、WHO 100pg /劑 我國(guó)衛(wèi)生部 100pg /劑 90年代后期 WHO 推薦為 10ng/劑 2000年版中國(guó)生物制品規(guī)程10 ng /劑 2005年版中國(guó)生物制品規(guī)程100 pg /劑 檢測(cè)靈敏度： 1-10pg/ml 2004年IABS大會(huì)的觀點(diǎn)： 腫瘤細(xì)胞的DNA可以在動(dòng)物模型或人類引起腫瘤的發(fā)生，經(jīng)多個(gè)研究小組的定量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)并基于各種不同的設(shè)定為依據(jù)，得出的結(jié)論為： 即使生物制品中存在細(xì)胞基質(zhì)DNA 的腫瘤風(fēng)險(xiǎn)是非常低的。Vero 細(xì)胞殘余DNA的致瘤性中國(guó)藥品生物制品檢定所美國(guó)FDA對(duì)Vero細(xì)

13、胞用于疫苗研制的建議2002年5月20日發(fā)表對(duì)以Vero細(xì)胞為基質(zhì)的病毒性疫苗研制者的信。CBER的意見認(rèn)為Vero細(xì)胞作為病毒性疫苗的培養(yǎng)用細(xì)胞基質(zhì)是可以行的 /cber/ltr/vero031301.htm. Letter to Sponsors Using Vero Cells as a Cell Substrate for Investigational Vaccines FDA美國(guó)FDA的CBER對(duì)Vero用于疫苗研制的建議Vero細(xì)胞生產(chǎn)的產(chǎn)品須無(wú)完整的Vero細(xì)胞雖然WHO目前已接受注射用傳代細(xì)胞產(chǎn)品DNA殘余量不超過 10ng/劑。 CBER建議須繼續(xù)關(guān)注產(chǎn)品中Vero細(xì)胞殘余

14、DNA的量。 殘余Vero細(xì)胞DNA的風(fēng)險(xiǎn)水平應(yīng)按不同情況不同處理，要考慮疫苗的給藥方法，如注射、粘膜或其他途徑。 因此CBER建議： 要確定終產(chǎn)品中殘余細(xì)胞DNA的量和DNA的大小，應(yīng)該在疫苗終產(chǎn)品中描述每人用劑量中含殘余DNA的量。由于使用了各種不同的處理方法（如DNA酶處理）細(xì)胞殘余DNA的量和大小可進(jìn)一步下降，要評(píng)價(jià)已加入的生產(chǎn)工藝或考慮要加入的生產(chǎn)工藝以其減少DNA，應(yīng)注意由于改變工藝而引起潛在的產(chǎn)品質(zhì)量的影響（如免疫原性） 為何對(duì)DNA表示擔(dān)憂 原因 1、細(xì)胞可能含有 1) 致腫瘤基因 2) 整合在細(xì)胞基因中的病毒基因 2、生產(chǎn)疫苗用的細(xì)胞基因會(huì)帶入疫苗終產(chǎn)品中 3、產(chǎn)品中的DNA

15、通過注射進(jìn)入使用者體內(nèi)導(dǎo)致的腫瘤病原體感染 結(jié)果 1、感染 2、誘發(fā)腫瘤 1）腫瘤基因的表達(dá) 2）原癌基因的激活 3）腫瘤抑制基因的關(guān)閉（失去功能） 3、突變基因的插入 激活、抑制功能喪失、正負(fù)調(diào)節(jié)功能的破壞 關(guān)于原癌基因任何哺乳動(dòng)物均存在原癌基因，尤其是染色體變異的細(xì)胞致癌的風(fēng)險(xiǎn)更大，也是目前關(guān)注Vero細(xì)胞安全性的焦點(diǎn)。將完整的原癌基因切割，可能使其喪失致癌性。 P53基因是位于17p13.1上，P53的突變與許多癌癥相關(guān) 它由393個(gè)氨基酸組成，核苷酸大于1200bp。 乳腺癌基因(Breast Cancer Gene, BACA)目前至少發(fā)現(xiàn)2個(gè) 位于17q21， BACA1，基因長(zhǎng)度

16、大于100kb 位于13q12.3， BACA2，基因長(zhǎng)度大于70kb 白血病人9號(hào)染色體上的8.5kb的mRNA是突變基因。 子宮頸癌病因95由人乳頭瘤病毒所致，已知E7基因是重 要原因，E7基因由300多個(gè)核苷酸組成。細(xì)胞培養(yǎng)狂犬病疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 檢定項(xiàng)目 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 半成 品配 制前 原液殘余牛血清蛋白含量 (ng / 劑) 50抗原含量 (血凝, ELISA) Vero細(xì)胞DNA殘留100 Pg / 劑地鼠腎雞胚細(xì)胞疫苗不作該項(xiàng)滅活試驗(yàn)?zāi)X內(nèi)注射小鼠20只，觀察14天，應(yīng)全部健存蛋白含量測(cè)定 120ug / 劑 成品 檢定鑒別試驗(yàn)同效力試驗(yàn)，效力試驗(yàn)不合格時(shí)，鑒別試驗(yàn)不成立外觀因?yàn)榘咨杷审w

17、，復(fù)溶后應(yīng)為澄明液體，無(wú)異物化學(xué)檢定 PH值7.2 8.0水份（w/w ） 3.0%液體疫苗不作該項(xiàng)硫柳汞含量 (mg/ml) 0.10無(wú)菌試驗(yàn)應(yīng)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)細(xì)菌內(nèi)毒素 100 EU異常毒性試驗(yàn) 小鼠法小鼠應(yīng)鍵在, 體重增加 豚鼠法豚鼠應(yīng)鍵在, 體重增加效力實(shí)驗(yàn)應(yīng)2.5IU / 劑熱穩(wěn)定試驗(yàn)37 14天后，效力試驗(yàn)應(yīng)2.5IU / 劑內(nèi)容 一、狂犬病疫苗的歷史和細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的推進(jìn)二、目前三種類型的細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 1、原代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 2、二倍體細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 3、傳代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗三、疫苗中不同成分和添加劑應(yīng)關(guān)注的問題 1、人白蛋白 2、抗生素 3、明膠 4、牛血清 5、防腐劑四、暴露后處理的失敗案例

18、疫苗的添加劑 人白蛋白是大多數(shù)疫苗中添加的保護(hù)劑，使疫苗的效力穩(wěn)定，尤其是液體疫苗。 目前人白蛋白的生產(chǎn)工藝為“低溫乙醇法”經(jīng)不同濃度的乙醇反復(fù)沉淀所得，最終產(chǎn)品還須經(jīng)60 10小時(shí)的專項(xiàng)病毒滅活。 經(jīng)驗(yàn)證該產(chǎn)品有可靠的安全性，國(guó)內(nèi)外至今尚無(wú)使用該產(chǎn)品而感染HIV、HBV、HCV等報(bào)道。人白蛋白:疫苗的添加劑 是細(xì)胞培養(yǎng)疫苗在細(xì)胞培養(yǎng)過程中必須的添加劑，純化過程中已基本去除，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)50 n g/劑 最擔(dān)心瘋牛?。▊魅拘院＞d狀腦病、T S E） WHO ：人及動(dòng)物傳染性海綿狀腦病相關(guān)的醫(yī)用或 其他制品的研討會(huì)報(bào)告（1997. 3） Report of a WHO Consultation on

19、 Medicinal and Other Products in Relation to Human and Animal Transmissible Spongiform Encephalitis 牛血清：瘋牛病無(wú)血清培養(yǎng)基生產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)疫苗正在研發(fā)中疫苗的添加劑 WHO：牛組織及體液的傳染性分類 I 類 高度感染 腦脊髓（ 眼） II類 中度感染 脾臟、扁逃體、淋巴結(jié)、回腸、近端大 腸、腦脊液、腦垂體、腎上腺、（硬腦 膜、松果體、胎盤） III類 低感染性 周圍神經(jīng)、鼻黏膜、胸腺、骨髓、肝、 肺、胰腺 IV類 無(wú)感染性 骨骼肌、心臟、乳腺、牛奶、血清、糞 便、腎臟、甲狀腺、唾液腺、唾液、卵

20、 巢、子宮、睪丸、附睪、胎兒組織、初 乳、膽汁、骨骼、軟骨組織、結(jié)締組、 毛發(fā)、皮膚、尿液。疫苗的添加劑 1、1980年-1996年在英國(guó)居住滿3個(gè)月者 2、1980年-1990年在北歐的軍事基地居住滿 3個(gè)月或在南歐滿6個(gè)月以上。 3、1980年-目前在法國(guó)居住滿5年以上 4、自1980年以來(lái)接受過輸血的人員。 5、自1980年-目前在歐洲居住滿5年以上者。 以上人員不能獻(xiàn)全血，但可以獻(xiàn)血漿，因?yàn)?白蛋白的制備過程能去掉海綿狀腦病的致病 因子；而英國(guó)、法國(guó)人兩者均不能。 Revised preventive measures to reduce the possible risk of tr

21、ansmission of Creutzfeldt-Jakob(CJD) Disease and Variant Creutzfeldt-Jakob Disease by blood and blood product,Final FDA guidance document, WWW./cber/gdlns/cjdvcjdq&a.htm 人白蛋白 瘋牛病 疫苗的添加劑 明膠：國(guó)際上趨勢(shì)：疫苗中盡可能不用明膠凍干疫苗中凍干保護(hù)劑使用明膠：動(dòng)物源性明膠豬源性明膠牛源性明膠 牛皮源性明膠 牛骨源性明膠 絕不能使用頭骨和脊髓骨 產(chǎn)生抗明膠IgE抗體，出現(xiàn)較重且多的過敏反應(yīng)疫苗的添加劑 抗菌素： 在疫苗

22、的生產(chǎn)階段，有些抗菌素可使用 如卡那酶素、新霉素等，在純化過程中應(yīng)盡可能去除。 但不能加青酶素和-內(nèi)酰胺類。 國(guó)外疫苗生產(chǎn)常用新霉素，而中國(guó)均使用卡那霉素、 慶大霉素。臨床上新霉素常用于外用，而卡那霉素、 慶大霉素常用于肌肉和靜脈注射。 疫苗中使用新霉素引起過敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)要小于卡那、 慶大霉素 防腐劑 硫柳汞(無(wú)機(jī)汞）： 常用濃度0.01% ， 易溶于水。 作用： 對(duì)革蘭氏陽(yáng)性、陰性的球菌、桿菌的抑菌能力均很強(qiáng)。 原理： 重金屬離子與菌體中酶蛋白的巰基（-SH）結(jié)合使酶失去活性，硫 柳汞對(duì)菌體、病毒和血清蛋白的損害很弱。 使用范圍： 目前我國(guó)的液體疫苗均添加硫柳汞作為防腐劑。 其他防腐劑： 氯

23、仿、硝酸汞苯、石炭酸等但疫苗一般不使用。 趨勢(shì)： 不使用防腐劑，在完全達(dá)到GMP要求的100級(jí)條件下生產(chǎn)不應(yīng)有細(xì) 菌生長(zhǎng)，只有多人份分裝時(shí)不能一次用畢的疫苗才加防腐劑。 擔(dān)憂： 可能引起注射局部紅腫等不良反應(yīng) 可能對(duì)6個(gè)月內(nèi)嬰兒產(chǎn)生體內(nèi)蓄積（腦中） WHO意見：含硫柳汞疫苗的危險(xiǎn)并未得到證實(shí)，沒有任何理由需要擔(dān)憂含硫 柳汞疫苗的安全性，因此也不必改變現(xiàn)有的免疫接種活動(dòng)。 /vaccine_safety/topics/thiomersal/questions/en/index.html 病毒性滅活疫苗 內(nèi)容 一、狂犬病疫苗的歷史和細(xì)胞培養(yǎng)疫苗的推進(jìn)二、目前三種類型的細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 1、二倍體細(xì)胞培

24、養(yǎng)疫苗 2、原代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗 3、傳代細(xì)胞培養(yǎng)疫苗三、疫苗中不同成分和添加劑應(yīng)關(guān)注的問題 1、人白蛋白 2、抗生素 3、明膠 4、牛血清 5、防腐劑四、暴露后處理的失敗案例 Henry Wilde， Failures of post-exposure rabies Prophylaxis , Vaccine, 2007(25): 7605-760972歲泰國(guó)老嫗,頸部被犬咬傷,傷口處理及時(shí)正確,并注射了法國(guó)產(chǎn)馬抗血清,剩余部分注射三角肌,PVRV 0、3、7、14注射，14天時(shí)增加PCEC疫苗 第20天發(fā)病死亡。泰國(guó)9歲男孩被犬咬傷鼻子和頸部，傷口處理及時(shí)正確并浸潤(rùn)注射法國(guó)ERIG，剩余部分注射大腿肌肉；0、3、7、14天三角肌注射印度產(chǎn)PCEC疫苗，30天時(shí)發(fā)病死亡；泰國(guó)7歲男孩，被犬咬傷手臂、腿、軀干和背部，傷口處理及時(shí)，將法國(guó)產(chǎn)ERIG 按40IU/kg以1：1稀釋后全部傷口注射，同時(shí)肌肉注射Verorab，三天后按皮內(nèi)法注射疫苗，第20天發(fā)病死亡；南非57歲男性，被貓鼬咬傷手指和手腕，傷口及時(shí)正確處理，包括次氯酸消毒，HIRG傷口注射，剩余部分三角肌注射，HDCV疫苗免疫，但14天發(fā)病出現(xiàn)癥狀，30天死于狂犬病；菲律賓4歲女孩，被犬咬裂肩部和背部，傷口處理正確及時(shí)，法國(guó)ERIG 1：2稀釋注射全部傷口后等待數(shù)小時(shí)