1、槐米中蘆丁的提取分離和檢識及槲皮素的制備楊翊涵（2013級中藥學(xué)一班）【摘要】本文整理總結(jié)了兩次實驗的操作過程與實驗結(jié)果。包括 從槐米中提取蘆丁、蘆丁的分離和檢識，以及槲皮素的制備和檢識。 通過堿溶酸沉的方法提取蘆丁，再利用稀酸水解生成槲皮素。通過蘆 丁的制備，掌握黃酮類化合物的提取分離的原理和操作。熟悉紫外光 譜在黃酮結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用。通過蘆丁的結(jié)構(gòu)檢識，了解苷類結(jié)構(gòu)研 究的一般程序和方法熟悉重結(jié)晶技巧。了解和掌握黃酮類化合物的一 些主要性質(zhì)和鑒定方法?！娟P(guān)鍵詞】蘆丁、槲皮素、提取分離、檢識鑒定、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)。1. 1蘆丁的提取原理利用蘆丁結(jié)構(gòu)中含有多個酚羥基，呈酚酸性，能在堿水中溶解的蘆?。?/p>

2、hnin）法）。也可利用蘆丁在冷水中溶解度小，在熱水中溶解度大的性質(zhì)進性質(zhì)，可用堿性溶劑進行提取，提 取液加酸后可沉淀析出（堿溶酸沉行提取。蘆丁的分離原理利用蘆丁結(jié)構(gòu)在冷乙醇中溶解度小，在熱乙醇中溶解度大，以及 在熱水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性質(zhì)分離。蘆丁用溶劑加熱 溶解后，趁熱抽濾，濾液放冷后能析出而達到分離的目的（如不純可 再重復(fù)操作進行分離）。也可采用醇溶水沉法進行精制。蘆丁的鑒定原理（1）利用吸附薄層色譜的分離原理，蘆丁與蘆丁對照品在同一條 件下進行展開，顯色，以達到鑒定蘆丁的目的。（2）通過專屬的化學(xué)顯色反應(yīng)（如三氯化鋁顯色反應(yīng)），確定蘆丁 的成分類型（黃酮類）。1.4實驗原理

3、蘆丁淺黃色針狀結(jié)晶，難溶于冷水，可溶于熱水（1： 180200 ）, 熱甲醇（1： 10）,冷甲醇（1： 100）,熱乙醇（1： 60）,冷乙醇（1： 650 ）;難溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于 堿液。槲皮素黃色結(jié)晶，能溶于冷乙醇 0H（1： 290 ）,易溶于沸乙醇（1： 23）, 可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡I啶、丙酮等；難溶于水、苯、石油醚OH O棚宣挨:%等溶劑。H0蘆丁為黃酮苷，分子中具有酚羥基，顯酸性，可溶于稀堿液中， 在酸液中沉淀析出，可利用此性質(zhì)進行提取分離。利用蘆丁易溶熱水、 熱乙醇，較難溶于冷水、冷乙醇的性質(zhì)選擇重結(jié)晶方法進行精制。蘆 丁可被稀酸

4、水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此進行制備槲皮素。 通過紙色譜及紫外光譜進行黃酮及糖的鑒定。2.1粗蘆丁的制備槐米粗粉50g，加水800ml加熱，加氫氧化鈉調(diào)PH8-9,攪拌加 熱,95C保溫50min,趁熱過濾，濾渣再如上提取一次。合并濾液。向 濾液加入10%HCL調(diào)PH4-5,抽濾，至于80C干燥得蘆丁粗品。所得粗 品一半留備后用，另一半加熱溶解，放置過夜。2.2槲皮素的制備將放置過夜的蘆丁粗品濾液再次抽濾，濾渣干燥后取1g置于500 ml圓底燒瓶中，加入2%硫酸2.2ml和197.8ml蒸餾水，微沸回流至燒 瓶內(nèi)出現(xiàn)絮狀結(jié)晶，靜置再次抽濾得槲皮素精品。濾液用碳酸鋇中和 至中性，過濾，蒸

5、發(fā)濃縮至干。3.1槲皮素的定性實驗鋯-枸試驗：取樣品液適量，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液， 注意觀察顏色變化，再加入2%枸椽酸的甲醇溶液，記錄顏色變化。a-萘酚-濃硫酸反應(yīng)：取樣品液適量，加等體積的l0%a-萘 酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁緩加濃硫酸，注意觀察兩液界面的顏色。 3.2蘆丁及槲皮素的色譜支持劑：聚酰胺層析板(5 x 10cm)。展開劑：甲醇-丙酮-甲苯-乙酸（8： 2： 2： 1）。樣品：自制槲皮素的乙醇溶液，自制蘆丁的乙醇溶液。對照品：槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液。顯色劑：三氯化鋁乙醇溶液噴霧，紫外光燈365nm下檢識熒光。3.3糖的紙色譜檢識支持劑：中速層析濾

6、紙（5 x20cm）樣品：取水解后的濾液20ml,水浴加熱，且在攪拌下加適量碳酸 鋇細(xì)粉至PH中性，過濾，取濾液并濃縮至2mI左右，放冷后，供紙色 譜點樣用。對照品：1 %葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品醇溶液及1 %鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品醇溶液。展開劑：正丁醇-醋酸-水（4： 1： 5）。顯色劑：噴以鄰苯二甲酸苯胺溶液，105C烘烤5分鐘至斑點顯色 清晰。4.1注意事項（1）用石灰水調(diào)節(jié)蘆丁提取溶液的PH,既可以達到堿提取蘆丁的 目的，還可以除去槐米中含有的大量粘液質(zhì)。但鈣離子濃度及pH值均 不宜過高，否則多余的鈣能與蘆丁形成螯合物沉淀，同時黃酮母核在 強堿性條件下易被破壞。（2）用HCl調(diào)PH時，應(yīng)注意PH不要過低，因

7、為PH過低會使蘆丁 形成*羊鹽而使已形成的沉淀重新溶解，同時黃酮母核也會在強堿性 條件下被破壞，導(dǎo)致收率下降。（3）注意觀察槲皮素制備過程中的實驗現(xiàn)象。4.2小結(jié)與討論本實驗主要是利用蕓香苷中含有較多的酚羥基，可溶于堿中，加 酸酸化后又可析出蕓香苷結(jié)晶的性質(zhì)，采用堿溶酸沉法提取，并用蕓 香苷對冷、熱水的溶解度相差懸殊的特性進行精制。蘆丁可被稀酸水 解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通過紙層析鑒定。蘆丁及槲 皮素還可通過化學(xué)反應(yīng)及紫外光譜鑒定。通過種種方法達到實驗?zāi)康?。根?jù)本次試驗汲取經(jīng)驗教訓(xùn)，以后實驗一定要認(rèn)真預(yù)習(xí)，不是浮 于表面，要真正學(xué)透、學(xué)懂，不能照本宣科，要有主觀能動性，只有 自己理解的、想通的才能真正記住，成為自己的東西。我們要改變學(xué) 習(xí)方法，多多發(fā)揮主動性，并將這種學(xué)習(xí)方法運用到以后的其他科目 中，才會事半功倍。【參考文獻】馮啟蒙，徐聰.槐米中提蘆丁純化工藝研究價值工程，2012； 307-308.童靖，郭曉蓉，房文亮，夏云.槐米中蘆丁提取工藝研究.中外 醫(yī)學(xué)（臨床醫(yī)學(xué)），2011，（26）； 41-41.趙宇新.槐米中主要成分變化規(guī)律與受熱溫度的相關(guān)性中國實驗 方劑學(xué)雜志，2011，17（19）； 108-110.楊娜，朱開梅，顧生玖.從槐米中提取槲皮素方法的研究進展.時 珍國醫(yī)國藥，2010，21（12）； 3