1、腫瘤微轉(zhuǎn)移的機(jī)制與檢測關(guān)鍵詞 腫瘤；微轉(zhuǎn)移；機(jī)制；檢測The Mechanismsand Detection of Tumour MicrometastasisKeywords:Tumor;Micrometastasis;Mechanisms;Detection轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的生物學(xué)特性之一，也是阻礙腫瘤患者預(yù)后 的重要因素。近幾年，腫瘤轉(zhuǎn)移的研究已進(jìn)展到細(xì)胞及分子水平，腫 瘤微轉(zhuǎn)移的概念也已慢慢成立。準(zhǔn)確判定有無腫瘤轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移的范圍， 可大大提高腫瘤醫(yī)治的有效率，改善患者的預(yù)后。但是，臨床及常規(guī) 病理檢查很難發(fā)覺微轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞，只有通過免疫組化或PCR?特殊檢查才能確信。本文就腫瘤微轉(zhuǎn)移的

2、機(jī)制及檢測途徑作一簡要綜述。1微轉(zhuǎn)移的概念自1869年第一次報導(dǎo)并證明外周血中發(fā)覺瘤細(xì)胞以來， 微轉(zhuǎn) 移的研究慢慢成為腫瘤研究的一個熱點(diǎn)。微轉(zhuǎn)移(micrometastases)是指在各類機(jī)體組織、體液及細(xì)胞移植物中檢測到的鏡下及亞顯微水 平的腫瘤殘留，是用常規(guī)臨床病理學(xué)方式不能檢出的、隱匿在原發(fā)灶 之外組織的、非血液系統(tǒng)惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移1。1993年國際抗癌聯(lián)盟 (UICC)出版的腫瘤TNM期補(bǔ)充材料中指出，當(dāng)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶生長 至直徑1 mm- 2 mm時，稱作微轉(zhuǎn)移。2腫瘤微轉(zhuǎn)移的機(jī)制關(guān)于腫瘤轉(zhuǎn)移存在兩種學(xué)說，一是“種子與土壤假說”：以為 是不是形成腫瘤轉(zhuǎn)移要看被轉(zhuǎn)移部位組織的環(huán)境是不是適宜原

3、發(fā)瘤細(xì) 胞的停留和生長。這種學(xué)說以為，人體大部份轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞由于受到免 疫機(jī)制的殺傷或轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞局部環(huán)境不適宜而不能存活；只有少數(shù)細(xì) 胞具有活力，在轉(zhuǎn)移部位組織生長繁衍，形成轉(zhuǎn)移瘤2。二是腫瘤 異質(zhì)性理論：該理論以為由于瘤細(xì)胞遺傳性狀的不穩(wěn)固，由單克隆起 源的瘤細(xì)胞在不斷增殖的進(jìn)程中會發(fā)生異質(zhì)性，致使瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛 能有高低之分3。惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的進(jìn)程，其轉(zhuǎn) 移要緊有3種途徑：經(jīng)血道轉(zhuǎn)移、經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移、直接侵及周圍組織 器官和播散至體腔。腫瘤淋巴管、細(xì)胞因子的作用和微環(huán)境的阻礙對 原發(fā)瘤播散至遠(yuǎn)處組織器官起了專門大的作用。腫瘤淋巴管生成 由于毛細(xì)淋巴管無完整的基底膜，管壁薄，內(nèi)皮

4、細(xì)胞間有短暫裂隙，通透性高，有利于瘤細(xì)胞的進(jìn)入，故在初期腫瘤轉(zhuǎn)移以淋巴道為主。淋巴管不僅參與腫瘤錨定生長所必需的基質(zhì)成份的形成，而且當(dāng)腫瘤實(shí)體長到1 mm- 2 mm時，腫瘤血管生成的進(jìn)程也需要淋巴管參與。腫瘤缺氧壞死也與缺乏完善的淋巴管系統(tǒng)有緊密關(guān)系，前哨淋巴結(jié)的活檢已被應(yīng)用于一些惡性腫瘤（如乳腺癌和黑色素瘤）的診斷和分期。近期有學(xué)者以為，腫瘤新生淋巴管是淋巴道轉(zhuǎn)移的要緊緣故，且在淋巴管生成中淋巴管生成因子VEGF C和VEGFD起著關(guān)鍵作用。在人的某些自發(fā)性癌轉(zhuǎn)移模型和一些動物實(shí)驗(yàn)中證明VEGF C和VEGF D有增進(jìn)腫瘤新生淋巴管形成的能力4。隨著對VEGF C和VEGF D研究的慢慢深

5、切，有學(xué)者5以為VEGFD的表達(dá)在某些腫瘤中與新生淋巴管的形成成負(fù)相關(guān)。目前，在實(shí) 體瘤中淋巴管的存在與腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的關(guān)系上仍然存在較大不合， Leu等6以為腫瘤中缺乏功能性淋巴管，而McCarter等7那么 以為，淋巴管的生成是一個成功的腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉屑~。細(xì)胞因子的作用 惡性細(xì)胞間的彼此粘著力較正常細(xì)胞間 低，腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位脫落，侵入細(xì)胞外基質(zhì)與基底膜中大分子蛋 白粘附，啟動細(xì)胞合成并分泌各類降解酶類，降解基底膜(BM)及細(xì)胞外 基質(zhì)(ECM),穿過脈管壁進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，在循環(huán)中逃幸免疫系統(tǒng)解決，最 后穿過脈管，外滲達(dá)繼發(fā)部位形成克隆，增殖形成轉(zhuǎn)移灶。癌細(xì)胞在轉(zhuǎn) 移進(jìn)程中，需

6、2次侵襲周圍組織,2次穿越血管和淋巴管基底膜。在此 進(jìn)程中有多種因子參與：運(yùn)動因子如割裂素能刺激細(xì)胞的遷移、 趨化、 吞噬等；細(xì)胞粘附因子(Cell Adhesion Molecules,CAMS)如整合蛋白、 鈣粘蛋白、免疫球蛋白超家族及選擇素是介導(dǎo)細(xì)胞和細(xì)胞，細(xì)胞和細(xì) 胞外基質(zhì)粘附和彼此作用的轉(zhuǎn)膜糖蛋白，參與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移；腫 瘤細(xì)胞產(chǎn)生的胞外基質(zhì)降解酶如組織蛋白酶、金屬蛋白酶等可降解基 質(zhì)使腫瘤細(xì)胞易于遷移；歸巢因子中的尋址素和歸巢受體是一組能幫 忙腫瘤細(xì)胞找尋轉(zhuǎn)移靶器官的因子，位于癌細(xì)胞的歸巢受體與位于內(nèi)皮細(xì)胞的尋址素一起作用，使癌細(xì)胞離開血循環(huán)抵達(dá)特定的器官；新近 又發(fā)覺一類誘導(dǎo)細(xì)

7、胞移動的趨化因子(Chemokines),可直接調(diào)控腫瘤 細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和生長，調(diào)劑腫瘤血管生成，增進(jìn)腫瘤細(xì)胞定向移動，致 使腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。微環(huán)境的阻礙 微環(huán)境因素和腫瘤和宿主細(xì)胞間生物鏈對決 定微轉(zhuǎn)移灶的生存和生長可能具有關(guān)鍵的作用。必然的微環(huán)境關(guān)于一 些腫瘤的繁衍可能是有利的，但關(guān)于其他腫瘤那么是不利的，具有明顯 的器官偏向性。同時有動物實(shí)驗(yàn)證明，將不同的瘤細(xì)胞經(jīng)靜脈接種于 大鼠體內(nèi)，具轉(zhuǎn)移灶的發(fā)生部位不同，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說明不同的瘤細(xì)胞 在不同臟器內(nèi)轉(zhuǎn)移的散布上有明顯的不同 ，關(guān)于每一種腫瘤都是高度 特異的8。瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的器官特異性是由于轉(zhuǎn)移的瘤細(xì)胞高表達(dá)靶 器官內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的粘附分子的配

8、體，腫瘤細(xì)胞與靶器官內(nèi)皮細(xì)胞特 異性粘附和靶器官內(nèi)生長因子對腫瘤細(xì)胞生長的阻礙，是組成器官特異性轉(zhuǎn)移的要緊機(jī)制9。各類腫瘤和宿主微環(huán)境之間關(guān)系可不能完 全一樣，因此在器官特異性轉(zhuǎn)移進(jìn)程中，在不同器官中起要緊作用的瘤 細(xì)胞或宿主靶器官作用的特殊性也有所不同。3腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測目前，在臨床上，許多惡性腫瘤的原發(fā)瘤和轉(zhuǎn)移灶盡管經(jīng)手 術(shù)根治切除，乃至常規(guī)病理學(xué)檢查為轉(zhuǎn)移陰性的患者，部份仍死于腫 瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。這可能與已存在的血循環(huán)、骨髓、淋巴道和不同組 織器官的腫瘤微轉(zhuǎn)移有關(guān)，因此，腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測具有重要意義。 選擇適合的方式及腫瘤標(biāo)志物，可明顯提高微轉(zhuǎn)移的檢出率。常規(guī)持續(xù)切片HE染色法 持續(xù)切片

9、法一樣用于淋巴結(jié)的微 轉(zhuǎn)移檢測，其檢出率與切片間距有專門大關(guān)系，持續(xù)切片的細(xì)致分析， 可從常規(guī)單張切片檢查陰性的淋巴結(jié)中檢出 10溢右的微轉(zhuǎn)移10, 而持續(xù)切片法一個標(biāo)本需切幾十至幾百張切片，工作量大，臨床難以 推行，且對未形成轉(zhuǎn)移灶的少量癌細(xì)胞難以檢出，故最近幾年來已很 少利用。免疫組化法 腫瘤細(xì)胞均具有各自特異的細(xì)胞標(biāo)志物，免疫 組化法確實(shí)是選用針對腫瘤細(xì)胞特異標(biāo)志物的抗體，用顯色劑標(biāo)記，在 組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反映和組織化學(xué)的成色反映 ，對組織切片、 細(xì)胞涂片進(jìn)行染色，以尋覓組織、血液、淋巴結(jié)、骨髓中的腫瘤細(xì)胞， 以達(dá)到微轉(zhuǎn)移檢測的目的，而且可直接觀看微轉(zhuǎn)移細(xì)胞的形態(tài)。由于 操作較簡

10、便，本錢相對較低，靈敏性和特異性較高，該技術(shù)較早應(yīng)用 于臨床。該方式的不足的地方在于費(fèi)時，費(fèi)用較昂貴，且因單抗之間 存在交叉反映，腫瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)散布的不均質(zhì)性、存在實(shí)際陽 性染色結(jié)果判定操作的標(biāo)準(zhǔn)化問題，易顯現(xiàn)假陽性、假陰性結(jié)果。特 異性抗體也可用熒光標(biāo)記，采納附運(yùn)算機(jī)裝置的熒光顯微鏡對免疫熒 光標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行掃描，可排除內(nèi)源性堿性磷酸酶的阻礙，確信腫瘤細(xì) 胞的絕對數(shù)量，微轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞具有特異性免疫熒光可存盤，進(jìn)一步 作形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)和分子和細(xì)胞遺傳學(xué)分析。流式細(xì)胞術(shù) 流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry , FCM)的大體原理是用熒光標(biāo)記的單抗與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后，通過流式細(xì)胞儀即可檢測

11、 到腫瘤細(xì)胞，其最大優(yōu)勢是能夠?qū)撬铇悠分械哪[瘤細(xì)胞進(jìn)行直接計 數(shù)，而且能夠?qū)⑦@些細(xì)胞分離進(jìn)行進(jìn)一步研究11。這一進(jìn)程是完全自動化的，排除主觀因素的干擾。孫玲等12禾1J用FCM僉測96例 非小細(xì)胞肺癌患者骨髓微轉(zhuǎn)移，而且以非癌患者和正常人為對照，以實(shí)驗(yàn)組樣品細(xì)胞FI值大于對照組細(xì)胞表達(dá)熒光強(qiáng)度的上限值(2S) 判為陽性，結(jié)果經(jīng)手術(shù)醫(yī)治的非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)前骨髓微轉(zhuǎn)移檢出 率為26%該方式盡管能進(jìn)行細(xì)胞定量計數(shù)，但不能提供細(xì)胞形態(tài)學(xué) 依據(jù)，同時由于儀器昂貴，非一般實(shí)驗(yàn)室所能經(jīng)受，限制了該技術(shù)的 推行。聚合酶鏈反映和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反映(PCRffi RT PCR)該 技術(shù)的原理是通過在患者的血液

12、、淋巴結(jié)、骨髓中擴(kuò)增出腫瘤細(xì)胞標(biāo) 志性基因或靶RN麻證明腫瘤細(xì)胞的存在。應(yīng)用 PC敬術(shù)可擴(kuò)增存在 于腫瘤細(xì)胞內(nèi)的異樣 DNA第一要明確原發(fā)灶內(nèi)有無腫瘤細(xì)胞基因突 變和突變類型，假設(shè)未測得突變那么不能應(yīng)用PCRK術(shù)對待測轉(zhuǎn)移位點(diǎn)進(jìn)行微轉(zhuǎn)移檢測。RT PCRK術(shù)是通過擴(kuò)增腫瘤細(xì)胞特異的或組織 特異的標(biāo)志物基因信使 RN麻檢測腫瘤細(xì)胞的存在的。RT PCR檢測 腫瘤基因標(biāo)志物是目前以為最適于發(fā)覺腫瘤初期轉(zhuǎn)移的方式，其靈敏 度可達(dá)10-710-8 ,尤其適用于微量樣本中目的基因的獲取或微量 腫瘤細(xì)胞的檢測。用免疫組化等方式檢測結(jié)果為陰性時，仍可用組織 特異性標(biāo)志物信使RNA僉測來講明腫瘤細(xì)胞的存在。P

13、CR技術(shù)用于檢 測基因的表達(dá)，所需樣品少、省時、經(jīng)濟(jì)，但也有其不足，如不能確信是 不是存在活的腫瘤細(xì)胞，外源基因污染、假基因干擾、RNA的非法轉(zhuǎn)錄可致假陽性，而基因表達(dá)產(chǎn)物變異、取材的局限等可致假陰性。同 時，RT PCR的靈敏度極大程度上取決于所擴(kuò)增的對象(即靶RNA)的 特異性，但目前絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞缺乏其特異性信使RNA實(shí)驗(yàn)操作上也有待于進(jìn)一步標(biāo)化。隨著新的腫瘤特異性標(biāo)志物的發(fā)覺，PCR反映條件的優(yōu)化，RT PCFW可能成為檢測腫瘤微轉(zhuǎn)移的常規(guī)方式免疫磁分離新近成立的用于改良循環(huán)單個瘤細(xì)胞檢測的方式，采納FITC 結(jié)合抗 全細(xì)胞角蛋白 單克隆抗體陽性細(xì)胞，與超 順磁抗 FITC微珠耦聯(lián)，

14、然后進(jìn)入高梯度磁場與免疫磁性活化細(xì)胞挑 選機(jī)。富集的樣本預(yù)備作FCM免疫熒光術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)或RT PCR 檢測13, 14。Park等15, 16應(yīng)用磁珠包被的抗CEA單抗分離 腫瘤患者外周血中瘤細(xì)胞，然后進(jìn)行RT PCR并以常規(guī)RT PCR作 對照，結(jié)果免疫磁珠RT PCR和常規(guī)RT PCR在1 ml外周血中檢 出癌細(xì)胞的數(shù)量別離為101和102，因此以為免疫磁珠RT PCR診 斷微轉(zhuǎn)移的靈敏性和特異性優(yōu)于常規(guī) RT PCR免疫磁分離可提高微 轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞檢測的靈敏性，從而減少假陽性和假陰性。腫瘤轉(zhuǎn)移是一 個多因素、多時期、多步驟的復(fù)雜進(jìn)程。因此對腫瘤微轉(zhuǎn)移的研究也 是一項(xiàng)復(fù)雜的工程。通過對

15、腫瘤微轉(zhuǎn)移機(jī)制的深切研究，能夠?qū)ひ捀?科學(xué)、有效的腫瘤醫(yī)治方案，以提高臨床治愈率，而微轉(zhuǎn)移的檢測無 疑對成立個體化的醫(yī)治方案具有重要作用。若是咱們能在微轉(zhuǎn)移時取 得明確診斷并給以針對性醫(yī)治，可望將具有微轉(zhuǎn)移的瘤細(xì)胞抹殺在轉(zhuǎn) 移形成的初期，讓醫(yī)治發(fā)揮最大的功效，這對減少術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的形 成，爭取良好的預(yù)后有重要作用。在對腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測中，針對不同 類型的腫瘤、不同的標(biāo)本，選取不同的檢測方式，同時對現(xiàn)有的檢測方式進(jìn)行不斷改良與革新，并進(jìn)一步研究新的檢測技術(shù)，咱們相信， 隨著對腫瘤微轉(zhuǎn)移機(jī)制和檢測方式的深切研究，在不久的以后，將會 給腫瘤的診斷、醫(yī)治帶來全然性的轉(zhuǎn)變。參考文獻(xiàn):1孫寧，尤云峰,惡

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