1、實驗室自建分子診斷項目基本要求專家共識實驗室自建方法(，是指由實驗室內(nèi)部研發(fā)、確認(rèn)和使用、以診斷為目的的體外診斷方法。僅限于本實驗室內(nèi)使用，不得在市場銷售，也不得轉(zhuǎn)移到其他實驗室使用。做好實驗室自建分子檢測項目(-Ts使其既能滿足臨床日益增長的分子診斷需求，又符合我國行政管理規(guī)范的要求。的監(jiān)管要求實驗室資質(zhì)以及環(huán)境要求實驗室資質(zhì)：分子診斷實驗室應(yīng)通過衛(wèi)生計生行政部門認(rèn)可的臨床基因擴(kuò)增實驗室審核驗收，并在有效期內(nèi)。實驗室環(huán)境要求：要求達(dá)到國家相關(guān)臨床基因擴(kuò)增實驗室要求。人員要求()開展，實驗室應(yīng)該有相應(yīng)團(tuán)隊(應(yīng)至少包括具有檢驗等相關(guān)專業(yè)的博士學(xué)位并具有相關(guān)研究經(jīng)驗和工作基礎(chǔ)的研究人員1名，臨床相

2、關(guān)專業(yè)中級以上醫(yī)師1名，檢驗相關(guān)專業(yè)中級以上檢驗技師1名)。自建分子診斷項目負(fù)責(zé)人應(yīng)至少具有副高級以上專業(yè)技術(shù)職稱、博士學(xué)位、并從事分子診斷工作至少3年。分子診斷實驗室操作人員應(yīng)經(jīng)過有資質(zhì)的培訓(xùn)機(jī)構(gòu)培訓(xùn)合格取得上崗證。簽發(fā)分子病理報告的醫(yī)師應(yīng)至少具有中級病理學(xué)專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格，并有從事分子病理工作的經(jīng)歷。管理要求()開展項目之前，應(yīng)有相關(guān)臨床科室的申請、醫(yī)務(wù)機(jī)構(gòu)的審批以及醫(yī)院倫理委員會的同意。應(yīng)通過相關(guān)行政管理機(jī)構(gòu)組織的同行專家委員會的評議，或經(jīng)所在地省、自治區(qū)、直轄市人民政府相關(guān)行政部門審核同意。通過初次評議的項目在試運(yùn)行一年后，宜申請相關(guān)行政管理機(jī)構(gòu)組織的同行專家委員會的再評議，通過再

3、次評議的項目，正式運(yùn)行。（4）通過再次評議的項目，宜接受每3年一次的復(fù)評審，用以監(jiān)督該項目的運(yùn)行情況。（5）停用項目的標(biāo)準(zhǔn)和措施：一旦造成醫(yī)療糾紛或進(jìn)入司法程序，相關(guān)單位的項目應(yīng)立即停止使用，并進(jìn)入緊急審核程序，通過相關(guān)行政管理機(jī)構(gòu)組織的同行專家委員會的評議后，項目方可恢復(fù)檢驗。（6）實驗室須建立相應(yīng)的程序和管理制度。質(zhì)量控制的基本要求（一）應(yīng)不低于國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方法規(guī)要求，如醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實驗室管理方法、一醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說明等。（二）開展項目臨床應(yīng)用檢測之前，應(yīng)進(jìn)行性能確認(rèn)。（三）實驗室自建分子診斷項目中，涉及的市售試劑耗材的質(zhì)量保證，應(yīng)不低于國家標(biāo)準(zhǔn)

4、、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方法規(guī)要求。（四）定性檢測項目，每次實驗應(yīng)設(shè)置陰性、弱陽性和/或陽性質(zhì)控物。如為基因突變、基因多態(tài)性或基因型檢測，則應(yīng)包括最能反映檢測情況的突變或基因型樣品，每批檢測的質(zhì)控至少應(yīng)有一種基因突變或基因型，并建議在一定周期內(nèi)涵蓋所有的基因型。（五）定量檢測項目，每次實驗應(yīng)設(shè)置高值、中值和低值質(zhì)控物。（六）應(yīng)參加通過認(rèn)可的能力驗證計劃提供者提供的能力驗證計劃。（七）在沒有能力驗證提供的情況下，通過與其他實驗室（如已獲認(rèn)可的實驗室、使用相同檢測方法的實驗室、使用配套系統(tǒng)的實驗室）比對的方式確定檢驗結(jié)果的可接受性時，應(yīng)滿足如下要求：規(guī)定比對實驗室的選擇原則。樣品數(shù)量：至少5份，包括正常和異

5、常水平或不同常見基因突變或基因型；頻率：至少每年2次。判定標(biāo)準(zhǔn)：至少應(yīng)有的結(jié)果符合要求。實驗室使用兩套及以上檢測系統(tǒng)檢測同一項目時，應(yīng)有比對數(shù)據(jù)表明其檢測結(jié)果的一致性，比對頻次每年至少1次，樣品數(shù)量不少于20份，濃度水平應(yīng)覆蓋測量區(qū)間，計算回歸方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)7.。5應(yīng)定期（至少每年1次，每分析靈敏度（）i：次至少5份臨床樣品）進(jìn)行檢驗人員的結(jié)果比對、考核并記錄。使用不同生物參考區(qū)間的檢測系統(tǒng)間不宜進(jìn)行比對。的方法學(xué)確認(rèn)的技術(shù)指標(biāo)準(zhǔn)確性（）：準(zhǔn)確性的評估可以使用參考物質(zhì)進(jìn)行評定，或者與另一種臨床上有連續(xù)性并被普遍接受的方法（所謂金標(biāo)準(zhǔn)）進(jìn)行比對。在缺乏金標(biāo)準(zhǔn)的情況下，可以引用參考文獻(xiàn)作為指導(dǎo)。

6、用于確認(rèn)的標(biāo)本通常選用與臨床檢測同類的標(biāo)本。樣品數(shù)2濃度應(yīng)覆蓋測量區(qū)間。定性結(jié)果一致性宜大于，定量結(jié)果一般可接受為不能超過對照方法平均含量的3個標(biāo)準(zhǔn)差或者15變%異度。精確性（）：因需考慮安排不同的操作者、不同批號的試劑以及不同型號的儀器來進(jìn)行多次的重復(fù)操作，一般建議確認(rèn)一項分子檢驗方法的精密度大致需要20個工作日。在選擇待測標(biāo)本用于確認(rèn)實驗時，一般用高和低2個不同含量標(biāo)本來進(jìn)行，并接近檢測限。標(biāo)本類型、取樣與儲存條件應(yīng)盡量符合待測的臨床標(biāo)本。目前尚缺乏統(tǒng)一的國際參考標(biāo)準(zhǔn)來確定臨床診斷實驗室可普遍接受的精密度范圍。對于定性試驗，判斷結(jié)果的一致性，一般符合率應(yīng)該大于90。%對于定量試驗，一般確認(rèn)

7、實驗可接受的精密度為不能超過已知靶分子平均含量的3個標(biāo)準(zhǔn)差或者15變異度。建議變異度不能超過。的要求則以能力驗證室間質(zhì)評TOC o 1-5 h z評價界限（靶值對數(shù)值）作為允許總誤差（），重復(fù)性精密度T中間精密度。參考范圍（）：對于大部分檢測項目，正常參考范圍與異常值范圍都是在前期研究中就已經(jīng)明確，目的是為了給特定患者群體確定正常數(shù)值范圍。對于定性試驗，參考范圍可以是陰性、正常、無克隆性增生，或者其他能夠表明檢測結(jié)果是否正常的用詞。需要注意的是，某些檢測項目是沒有參考范圍的。如對于陽性樣本的基因分型檢測，就無法在所有已知基因型中選出一個正常的基因型?？蓤蟾娣秶ǎ簩τ诙ㄐ詼y試，應(yīng)包括所有的報

8、告結(jié)果（如野生型純合子、突變型雜合子或純合子）。對于定量試驗，實驗室必須明確定量分析中的分析測量范圍（me：surerm：engtAeM,R）是指待測樣品在未被稀釋、濃縮或其他不屬于常規(guī)檢查步驟部分的預(yù)處理條件下，一種方法可直接測量待測樣品值的范圍。因為可以稀釋樣品，報告范圍可能大于AMR。定性實驗中，分析靈敏性常用最低檢測限（）來表達(dá)。這種檢測低限指能連續(xù)在同一個標(biāo)本中測到靶核酸的可能性在統(tǒng)計學(xué)上概率。定量實驗中，多用定量限（）來表示。與不同，表示一個能夠檢測出的靶物質(zhì)在標(biāo)本中的最高和最低的量。對于某些分子檢測方法來說，與相同。但由于不需要考慮是否在線性范圍內(nèi)，所以常常比還要低。分析靈敏度的

9、確認(rèn)方法是通過一系列稀釋已知含量的靶病原體或分子來分析最低檢測限。在同一個實驗條件下并用同一個批號的制劑，重復(fù)測定已稀釋至最低濃度的標(biāo)本，重復(fù)測定來自臨床的個標(biāo)本，個結(jié)果，值小于指定標(biāo)準(zhǔn)視為接受。分析特異性（）：評價分子檢測方法的交叉反應(yīng)性，首先要獲得盡可能多的可能與特定待測靶分子發(fā)生交叉反應(yīng)的分子核酸序列并加以分析。如果在所測的標(biāo)本中存在某些結(jié)構(gòu)和核酸序列相近的病原體或內(nèi)源性生物分子，應(yīng)對這些病原體和生物分子進(jìn)行驗證評價。干擾物的作用是抑制正常反應(yīng)，使結(jié)果偏低，從而造成假陰性。最常見的驗證方法之一是在驗證實驗的過程中加入一個已知的反應(yīng)對照。在測定過程中，如果反應(yīng)對照未發(fā)生擴(kuò)增或擴(kuò)增產(chǎn)物量低于預(yù)期值范圍，即可證實有干擾抑制物在該標(biāo)本中存在。臨床驗證（）：臨床驗證是確定某種分子檢測技術(shù)檢出核酸分子診斷疾病的能力。臨床驗證的目的是評價這種新的分子檢測技術(shù)是否適合于特定的臨床疾病的診斷。臨床敏感性不同于分析敏感性：分析敏感性主要指參考方法檢測結(jié)果為陽性的結(jié)果中，用實驗方法得到陽性結(jié)果的一致性；臨床敏感性主要指結(jié)果為真陽性的人群中真正罹患某種疾病或異常的比例，強(qiáng)調(diào)實驗結(jié)果與臨床診斷的一致性。同樣的，臨床特異性也不同于分析特異性，分析特異性主要指參考方法檢測結(jié)果為陰性的結(jié)果中，用實驗方法得到陰性結(jié)果的一致性。臨床特異性主要指實驗結(jié)果為真陰性的人群中真正沒有罹患某種疾病或異常的比例1